Chapitre 1 Introduction générale
3.3 Caractérisation de l’impact des pansements biologiques sur la réépithélialisation
Dans le but d’observer qualitativement la réépithélialisation des plaies, des analyses histologiques ont été réalisées. Des coupes transversales de 5 µm colorées au trichrome de Masson ont été réalisées à partir de biopsies de plaies sans leur pansement et préalablement enrobées dans la paraffine. Cette coloration permet de mettre en évidence en bleu les collagènes du derme et du feuillet migratoire tandis que les kératinocytes sont colorés en différentes teintes de rose selon la couche observée. La Figure 3.10 est un exemple représentatif du phénomène de migration des kératinocytes observé dans le modèle de
guérison de plaie adapté à l’étude de pansements. Sur cette coupe, le feuillet migratoire placé sous la plaie (en bleu) sert de surface aux kératinocytes qui migrent de la gauche vers la droite (en rose). Les lettres MP désignent la marge de la plaie de laquelle les kératinocytes ont débuté leur migration. En plus de la migration primaire des kératinocytes, une partie de l’épiderme différencié (indiquée par Épi) glisse secondairement vers la zone à réépithélialiser. L’exemple présenté est une plaie qui avait été recouverte d’un pansement de fibroblastes pendant trois jours de guérison.
Figure 3.10 : Aspect histologique d’une coupe transversale de la marge d’une plaie colorée au trichrome de Masson. Barre de mesure = 500 µm. Abréviations : Épi, Épiderme différencié glissant vers le centre de la plaie; MP, Marge de la plaie.
D’autres colorations au trichrome de Masson ont également permis d’observer le phénomène de réépithélialisation des plaies en fonction de la condition expérimentale à l’étude. Grâce à une mosaïque de multiples photos d’une même coupe, l’ensemble de la guérison d’un même montage expérimental a pu être observé. Cette technique a permis de visualiser sur une même photo des plaies sur une longueur d’environ 1000 mm, facilitant ainsi l’interprétation globale. À la Figure 3.11, une coupe représentative de chaque groupe expérimental de la deuxième étude est présentée. Sur chacune, les lettres MP représentent les marges de plaies de part et d'autre de la plaie circulaire initiale et la lettre C désigne la petite région au centre de chaque plaie qui n’est pas encore réépithélialisée. Peu importe la condition expérimentale, la migration semble se dérouler de manière organisée et est relativement uniforme. De plus, il est intéressant d’observer que les plaies qui étaient recouvertes d’un pansement (A-C) semblent avoir un front de migration d’une épaisseur comparable qualitativement à celle observée sur une plaie sans pansement (D).
Des analyses immunohistochimiques ont également permis de qualifier le processus de réépithélialisation des plaies exposées ou non aux pansements étudiés (Fig 3.12). Un
marqueur de la différenciation des kératinocytes (K10), un marqueur de la jonction dermo- épidermique (Collagène de type IV) ainsi qu’un marqueur des cellules prolifératives de l’épiderme (Ki-67) ont permis de constater que la réépithélialisation en présence d’un pansement de fibroblastes (A-C) ou d’un pansement adipeux (D-E) s’organise d’une manière comparable à celle observée dans une plaie in vitro non exposée à un pansement (G-I). D’une manière analogue à l’exemple présenté à la Figure 3.10, ces photos réalisées par immunofluorescence exposent une partie intacte de la peau reconstruite, la marge de la plaie (MP) ainsi que la partie proximale du front de migration des kératinocytes.
Des mesures ont été réalisées sur des photos de coupes histologiques telles que présentées à la Figure 3.13 afin de comparer l’épaisseur moyenne des pansements selon le type cellulaire et le temps d’utilisation. Les pansements mesurés sont ceux de la deuxième étude. Les pansements triples faits de fibroblastes ont une épaisseur moyenne de 46,7 ± 2,6 µm (n = 5) après avoir été utilisés comme recouvrement durant six jours sur une plaie in
vitro, tandis que des pansements similaires conservés en culture parallèlement durant six
jours ont une épaisseur moyenne de 74,2 ± 4,5 µm (n = 3). Les pansements de fibroblastes ayant servi de recouvrement sont donc 1,6 fois plus minces après une utilisation de six jours et cette différence est statistiquement significative (p = 0,0008). Les pansements adipeux ont eu aussi tendance à s’amincir suite à leur utilisation, mais dans une moindre mesure. Les pansements adipeux utilisés comme recouvrement pendant six jours (48,6 ± 1,7 µm, n = 5) sont 1,3 fois plus minces que ceux conservés en culture (62,6 ± 9,5 µm, n = 3). Cette tendance n’est toutefois pas statistiquement significative (p = 0,065). Enfin, notons que les pansements adipeux qui ont été retirés des plaies après 48h ont une épaisseur moyenne de 66,4 ± 10,8 µm (n = 5), ce qui est comparable aux pansements du même type maintenu en culture. Ces résultats suggèrent donc que l’utilisation prolongée a un impact considérable sur l’épaisseur des pansements, et par le fait même, possiblement sur leurs effets. Ces données quantitatives de l’épaisseur des tissus sont soutenues par l’observation qualitative des coupes histologiques. La Figure 3.13 illustre l’amincissement qu’ont subi les pansements adipeux après 0, 2, 3 et 6 jours d’utilisation comme recouvrement. Quelques adipocytes demeurent bien visibles après six jours de culture (D). Il est toutefois difficile de conclure si leur nombre total s’est modifié en cours d’utilisation.
Figure 3.11 : Aspect histologique de la réépithélialisation six jours après la création des plaies suite à une coloration au trichrome de Masson sur coupes transversales. Les plaies étaient recouvertes soit d’un pansement de fibroblastes (A), d’un pansement adipeux (B), d’un pansement adipeux changé aux 2 jours (C) ou sans pansement (D). Barres de mesure = 1 mm. Abréviations : C, Centre de la plaie; MP, Marge de la plaie.
Figure 3.12 : Analyses immunohistochimiques du phénomène de réépithélialisation en présence de pansements biologiques après six jours de guérison. Les plaies étaient recouvertes soit d’un pansement de fibroblastes (A-C), d’un pansement adipeux (D-F) ou sans pansement (G-I). Les couches suprabasales de la peau intacte et du front de migration expriment K10 (A, D, G). Le collagène IV est exprimé à la jonction dermo-épidermique (indiqué par des têtes de flèches) (B, E, H). Des cellules exprimant Ki-67 sont localisées à la couche basale de la peau intacte et du front de migration (indiqué par des têtes de flèches) (C, F, I). Barre de mesure = 200 µm. Abréviations : MP; Marge de la plaie.
MP MP MP
Figure 3.13 : Aspect histologique au trichrome de Masson des pansements adipeux utilisés comme recouvrement d’une plaie au fil du temps. Les pansements présentés sont représentatifs de la moyenne et ont servi de recouvrement durant 0 jour (A), 2 jours (B), 3 jours (C) et 6 jours (D). Barre de mesure = 50 µm.
Finalement, l’analyse histologique offre une piste d’explication aux ennuis techniques rencontrés avec le groupe expérimental évaluant les pansements de CSTA de la deuxième étude et avec l’ensemble de la troisième étude. À la Figure 3.14, la réépithélialisation qui devrait normalement se diriger vers le centre de la plaie en migrant sur le feuillet migratoire (tel que montré à la Figure 3.10) semble avoir été entravée par un manque de cohésion entre le feuillet migratoire et la peau lésée. En effet, les kératinocytes qui auraient dû se diriger vers la plaie semblent s’être glissés entre le feuillet migratoire et la surface inférieure du derme reconstruit, tel qu’indiqué par la flèche. La plaie n’a donc pas été réépithélialisée tel qu’attendu malgré un temps de guérison suffisant. L’exemple présenté est une plaie de la deuxième étude après six jours de guérison et qui était recouverte d’un pansement de CSTA.
Figure 3.14 : Exemple d’une plaie où le feuillet migratoire n’a pas été réépithélialisé. Le manque de cohésion entre la peau lésée et le feuillet migratoire a amené les kératinocytes à épithélialiser la surface inférieure du derme reconstruit (tel qu’indiqué par la flèche). Barre de mesure = 200 µm. Abréviations : FM, Feuillet migratoire; MP, Marge de la plaie.
MP