Sujets et procédures.

L’expérience a été réalisée sur 50 rats mâles de la souche Long-Evans. Le dispositif expérimental ainsi que les procédures de conditionnement, de test et de vérification histologique sont identiques à celles décrites dans l’expérience 1 du chapitre II.

2) Chirurgie.

Les lésions excitotoxiques bilatérales du Cortex Entorhinal (CE) sont effectuées en adaptant la procédure décrite dans Coutureau et coll. (1999) adaptée de Jarrard (1989).

L’ensemble de la procédure chirurgicale est comparable à celle décrite dans la première expérience du chapitre II, mise à part une modification des sites d’injection.

Les coordonnées des sites d’injections sont calculées conformément au tableau III-2, la coordonnée 0 dorso-ventrale étant prise directement sur la dure-mère à la verticale du site d’injection.

3) Analyse Statistique.

Les moments pour lesquels la RC est quantifiée sont identiques à ceux décrits dans l’expérience 1 de ce chapitre. Les données des six groupes de rats sont soumises à une ANOVA ayant pour facteurs de comparaison entre sujets le traitement (PSEUDO ou ENT) et le protocole de conditionnement (D ou T30). AP ML DV VOLUME (µl) Durée (min) -6,1 ±5,8 -6,9 0,05µl (2min) -6,5 ±4,7 -7,4 0,025µl (1min) ±4,5 -6,6 0,05µl (1min) -7,0 ±5,8 -5,8 0,075 µl (2min) -7,5 ±4,6 -5,8 0,1 µl (5min) -8,0 ±4,7 -5,3 0,1 µl (5min) -8,5 ±4,8 -3,6 0,1 µl (5min)

Tableau III-2 : Localisation de l’ensemble des sites d’injections et volumes de NMDA injectés en chaque site afin de produire une lésion du cortex entorhinal. La durée durant laquelle la micro- pipette est laissée en place après injection est notée entre parenthèses. AP : Antéro-Postérieur ; ML : Médio-Latéral ; DV : Dorso-Ventral.

II- Résultats.

1) Etendue des lésions.

Après la vérification histologique, les performances comportementales de 45 animaux présentant des lésions touchant le cortex entorhinal médian et latéral sans atteinte du subiculum ont été analysées. Deux rats du groupe T30/PSEUDO et 1 rat du groupe D/ENT ont été exclus pour cause de RC non spécifique. Les effectifs respectifs de chaque groupe étaient donc les suivants : D/ENT (n=11), T30/ENT (n=13), D/PSEUDO (n=9) et T30/PSEUDO (n=9).

Les animaux ayant reçu des lésions du cortex entorhinal présentent généralement une atteinte bilatérale du cortex entorhinal médian et latéral. La localisation de la zone à atteindre favorisant le bouchage de la micropipette, l’étendue des lésions présente une légère variabilité (figure III-8).

2) Acquisition.

La RC des animaux lésés et pseudo-lésés après administration des chocs en fonction du protocole de conditionnement est présentée sur la figure III-9A. Lors de la session de conditionnement, l’ensemble des rats témoins acquiert une RC. Les animaux des groupes lésés présentent eux aussi une augmentation de la RC au fur et à mesure des essais, mais cette RC semble légèrement plus faible que celle des rats témoins, indépendamment du protocole de conditionnement.

L’ANOVA sur les taux de RC post-choc ne détecte pas d’effet du protocole de conditionnement (F(1,38)=0,32, p>0,01), ni de la lésion (F(1,38)=2,98 p>0 ,05), ni d’interaction entre ces deux facteurs ((1, 38)=0,02, p>0,01).

A

B

Pseudo

ENT

La RC des animaux lésés et pseudo-lésés durant le test de peur associée au contexte est présentée sur la figure III-9B. Les animaux du groupe T30/PSEUDO présentent une forte RC au contexte alors que ceux du groupe D/PSEUDO ont une RC plus faible. La lésion du CE induit une forte diminution de cette RC pour les groupes d’animaux conditionnés avec un protocole de Trace.

L’ANOVA confirme en partie ces constatations puisqu’elle met en évidence l’effet de la lésion (F(1,38)=8,53, p<0,01), mais ne détecte pas d’effet significatif du protocole de

Figure III-8 : Lésions du cortex entorhinal. A : Représentation schématique de l’étendue des lésions du cortex entorhinal chez le rat présentant la lésion la plus étendue (gris foncé) et le rat présentant la lésion la moins étendue (noir). Diagrammes adaptés de Paxinos & Watson 1998, avec les distances au Bregma indiquées en millimètres. B : Photomicrographie de tranches d’un hémisphère de cerveau à 7,4 mm en arriere du Bregma d’un rat contrôle (Pseudo, en haut) et d’un rat ayant une lésion représentative du cortex entorhinal (ENT, en bas). Les limites de la lésion sont indiquées par des flèches.

conditionnement (F(1,38)=2,07, p>0,05) et seulement une tendance à l’interaction entre ces deux facteurs (F(1,38)=3,38, p=0,074). L’ANOVA partielle effectuée sur ces données indique que l’effet de la lésion est significatif uniquement pour les groupes conditionnés avec un protocole de Trace (F(1,20)=10,60, p<0,005) et non pour les animaux conditionnés avec un protocole de Délai (F(1,18)=0,64, p>0,05). 0 20 40 60 80 100

ESSAI 1 ESSAI 2 ESSAI 3 ESSAI 4 ESSAI 5 D/PSEUDO D/ENT T30/PSEUDO T30/ENT 0 20 40 60 80 100 D T30 SHAM ENT

*

*

%R

C

A

B

La RC des animaux lésés et pseudo-lésés durant la présentation du son en fonction du

protocole de conditionnement est présentée sur les figures III-10A et C. La RC manifestée par les rats en présence du contexte modifié est négligeable pour l’ensemble des groupes.

Durant la présentation du son une forte RC apparaît chez les animaux pseudo-lésés qui semble légèrement plus forte pour les animaux conditionnés avec un protocole de Délai que pour ceux conditionnés avec un protocole de Trace. Les animaux du groupe T30/CE présentent une réponse fortement diminuée par rapport à leurs témoins, alors qu’à l’inverse la lésion semble sans effet pour le groupe conditionné avec un protocole de Délai.

Ces constatations sont appuyées par l’ANOVA qui indique un effet significatif du protocole de conditionnement (F(1,38)=15,19, p<0,0005), ainsi que de la lésion (F(1,38)=4,84, p<0,05), ainsi qu’une interaction entre ces deux facteurs (F(1,38)=6,87, p<0,05). L’ANOVA partielle effectuée sur ces données confirme que l’effet de la lésion est significatif uniquement

Figure III-9 : Pourcentage de RC et erreur standard en fonction du traitement et du protocole de conditionnement de l’expérience 2. A : Durant le conditionnement. Evolution au cours des essais de la RC au cours de la minute suivant la fin du choc en fonction du protocole. B : Durant le test au contexte (moyenne des 5 minutes de test).

pour les groupes conditionnés avec un protocole de Trace (F(1,20)=11,98, p<0,005), mais pas pour les animaux conditionnés avec un protocole de Délai (F(1,18)=0,09, p>0,05).

5) RC durant l’intervalle de Trace.

La RC des animaux lésés et pseudo-lésés durant l’intervalle de trace en fonction du protocole de conditionnement est présentée sur les figures 5B et C. Les animaux des groupes D/PSEUDO et T30/PSEUDO présentent une forte RC durant les 30 s suivant la présentation du son. Cette réponse est globalement au même niveau pour les deux groupes témoins, bien que la réponse du groupe conditionné en Trace apparaisse légèrement plus tardivement. Comme pour la réponse durant le son, la lésion du CE semble induire une diminution de la RC des animaux conditionnés en Trace, mais être sans effet sur les animaux conditionnés en Délai.

Ces constatations sont appuyées par l’ANOVA qui ne révèle pas d’effet significatif du protocole de conditionnement (F(1,38)=2,32, p>0,05), mais confirme l’effet de la lésion (F(1,38)=4,15, p<0,05) ainsi que la présence d’une interaction entre ce facteur et le protocole de conditionnement (F(1,38)=6,52, p<0,05). L’ANOVA partielle effectuée sur ces données confirme que l’effet de la lésion est significatif uniquement pour les groupes conditionnés avec un protocole de Trace (F(1,20)=13,59, p<0,005), mais pas pour les animaux conditionnés avec un protocole de Délai (F(1,18)=0,11, p>0,05).

Ces données indiquent donc que les lésions neurotoxiques du CE effectuées préalablement au conditionnement perturbent spécifiquement le conditionnement de Trace, sans induire de déficit chez les animaux conditionnés avec un protocole de Délai. La forte diminution de RC au son conditionné en Trace est accompagnée par un déficit important de la RC au contexte.

0 20 40 60 80 100 D T30 SHAM ENT 0 20 40 60 80 100 D T30

*

*

AC PRE‐CS CS POST 10 POST 20 POST 30 POST 40 POST 50