Résultats et discussion

I.2.3.1 Approche 1 : Modification de la vitesse d’agitation, du ratio et du temps d’incubation

Pour les expériences 3, 4, 6, 7, 8 et 9 de la première approche (Figure 16), aucun digestat n’a pu être filtré entièrement sur les filtres GF/A de porosité 1,6 µm menant à des

%De égales à zéro. De plus, pour l’expérience 5, un échantillon sur trois n’a pas pu être filtré entièrement (%De = 65,78%). Les expériences 5 à 9 sont celles où le temps d’incubation a été augmenté de 24 à 36 ou 48h démontrant que l’augmentation du temps d’incubation n’a pas d’impact pour l’amélioration de la filtration des TGI de merlans. De plus, l’expérience 9 qui correspond à une augmentation de tous les paramètres de digestion ne s’est pas révélée être concluante. Il est important de noter que les seules expériences présentant des filtrations complètes sont celles de l’expérience 1 et 2 (%De = 97,91 et 96,17 respectivement). L’expérience 1 est celle de référence où aucun paramètre n’a été modifié et pour l’expérience

2 seul le ratio de KOH a été augmenté. Néanmoins, même si les filtrations des expériences 1 et 2 ont été réalisées entièrement, les filtres n’étaient pas exploitables pour la recherche de MP.

Pour conclure, la présente approche par modifications de trois paramètres (vitesse d’agitation, ratio de KOH et temps d’incubations) n’a pas permis d’améliorer la digestion puis la filtration des TGI de merlans dans le but de pouvoir rechercher les MP dans ces tissus. Il a donc été décidé de continuer l’optimisation de la digestion des TGI de merlans en faisant varier d’autres paramètres et en essayant de rajouter des étapes avant le processus de digestion au KOH 10%.

I.2.3.2 Approche 2 : Application d’un pré-traitement

Dans le cas de l’utilisation d’un prétraitement, seul l’essai 2 présente un taux de filtre exploitable supérieur à zéro (Tableau 8). L’utilisation de prétraitement avant la digestion n’a pas montré des résultats probants (Essai 1 à 4 - Tableau 8).

I.2.3.3 Approche 3 : Modification de la concentration du KOH

L’augmentation de la concentration du KOH de 10% à 3,5 M sans augmenter le ratio de KOH/g de chair (Essai 5) a démontré une bonne digestion puis filtration des échantillons (Tableau 8).

I.2.3.4 Approche 4 : Modification par combinaison des paramètres de digestion

Lorsque les modifications sont réalisées en combinaisons (Essai 6 à 14 - Tableau 7), les résultats sont beaucoup plus variables et sont dans l’ensemble plus satisfaisants (Tableau 8). Néanmoins, même en augmentant la molarité du KOH, son ratio et en filtrant sur des filtres de porosité 20 µm (Essai 13), la digestion et la filtration de TGI de la classe > 20 g ne sont pas exploitables pour la recherche des MP (Tableau 8) et la filtration n’est pas possible en utilisant des filtres de porosité 1,6 µm (Essai 14 - Tableau 8). Les essais 6, 8 et 9 ont été réalisés dans les mêmes conditions de digestions en utilisant des TD qui avaient des masses différentes mais toutes inférieures à 20 g (Tableau 7). Ces trois essais présentent des résultats différents : le pourcentage de filtre exploitable varie entre 50 et 100% mettant en évidence une forte variabilité individuelle.

Tableau 8 : Récapitulatif des pourcentages et nombre de filtres exploitables pour la recherche de MP suite à la digestion de TGI de merlans.

Essai ^{Nombre de filtre} exploitable Approche 2 1 0 0,0% 2 1 50,0% 3 0 0,0% 4 0 0,0% Approche 3 5 3 100,0% Approche 4 6 1 50,0% 7 1 50,0% 8 2 100,0% 9 2 66,7% 10 2 66,7% 11 2 100,0% 12 0 0,0% 13 1,5 50,0% 14 0 0,0% I.2.4 Conclusion

Globalement, les changements de paramètres de digestion incluant la molarité du KOH, le ratio de KOH/g de chair, la vitesse et la durée d’agitation, l’augmentation de la porosité des filtres ou l’ajout d’étapes de prétraitement avant la digestion n’ont pas amélioré la digestion ni la filtration des TGI des merlans dans le but de rechercher les MP sur ces filtres. Les résultats sont très variables d’un échantillon à un autre même en considérant une même classe de masse de TGI. Afin de proposer un protocole de digestion standardisé des tissus des produits de la pêche, il semble plus réaliste de fixer des limites de poids de tissus permettant l’applicabilité de cette méthode.

Détermination des masses limites des tractus gastro-intestinaux de poisson I.3

pour l’analyse des microplastiques

I.3.1 Introduction

Ces travaux sur la recherche de masses limites permettant d’appliquer la méthode de digestion des TGI de poissons en utilisant la méthode préalablement sélectionnée a été réalisée en complément de l’article 2. Ce travail est en cours de préparation pour soumission au journal Environmental Pollution (Article 3) :

Dehaut A., Hermabessiere L., Himber C., Paul-Pont I., Soudant P., Duflos G., in prep. Study of microplastics in fish whole alimentary tract: Recommendations on the limits of applicability of the KOH digestion method. Environmental Pollution.

Ce travail a été réalisé, dans le cadre du CRD Microplastiques (2015-CRD-11), par l’équipe du département des produits de la pêche et d’aquaculture du laboratoire de sécurité des aliments (LSAl) de l’Anses.

Les objectifs de ce travail étaient de déterminer les efficacités de digestion de 3 classes de masses (<7,5 g ; 7,5 – 15 g ; 15 – 22,5 g) de TGI de 5 espèces de poissons différents (Merlan, Maquereau, Sole, Bar et Daurade) afin de faire des recommandations concernant l’application de la méthode de digestion KOH 10%, notamment en fixant une masse de TGI limite d’utilisation pour ces 5 espèces.

Afin de répondre à ces objectifs, 10 individus par espèces de poisson et pour chaque classe de masses ont été achetés localement auprès de pêcheurs professionnel ou en supermarchés. Chaque TGI a été digéré en utilisant le protocole de digestion au KOH 10% (section I.1). Pour évaluer la bonne digestion des TGI, l’efficacité de digestion a été calculée et pour évaluer la filtration, chaque filtre a été photographié puis noté par un panel de 3 personnes familière avec la thématique des MP.

Dans ce travail collaboratif, je me suis particulièrement impliqué dans l’échantillonnage, les digestions, les différentes mesures permettant d’évaluer la bonne digestion/filtration des TGI de poissons.