Comparaison des tests utilisant les trois organismes

Afin de pouvoir comparer le test utilisant les embryons de poisson zèbre aux autres tests, les résultats valides mais non confirmés sont également intégrés pour obtenir une liste commune de substances de référence. Dans ces conditions, 15 substances ont été sélectionnées (Tableau 42) : 5 références de chaque catégorie.

Tableau 42 : Résultats valides des trois tests sur 15 références communes

Les indices tératogènes grisés indiquent que la substance n’a été testée qu’une seule fois. NA : Non Applicable.

Aucune malformation n’a été détectée chez les embryons des trois espèces exposés aux références négatives. En effet, l’acide ascorbique ne fait pas partie de la liste commune de substances de référence. Elle n’a été testée que dans le test utilisant les embryons de médaka. C’est d’ailleurs la valeur de son IT qui a précédemment fixé la valeur du seuil de l’IT à 2,5 pour le test utilisant les embryons de médaka. Bien évidemment, la valeur de l’IT de l’acide ascorbique doit être prise en compte lorsque les performances du test utilisant les embryons de médaka sont analysées séparément. Cependant, pour comparer les trois tests entre eux, les mêmes règles aux trois tests doivent être appliquées. Sur la base de la liste commune de substances de référence, les seuils de tératogénicité des trois tests sont fixés à 1,0 pour obtenir 100 % de spécificité avec la meilleure sensibilité possible.

Dans la 1ère condition d’analyse, les 5 substances de référence de la 1ère catégorie et celles de la 3ème catégorie sont prises en compte (Tableau 43). L’amantadine est correctement détectée comme ayant des effets tératogènes dans les trois tests. Le cyclophosphamide est correctement détecté par les tests utilisant les embryons de poisson zèbre et de médaka,

Test utilisant des embryons de Chemical name CL 50 mg / l CE 50 mg / l IT CL 50 mg / l CE 50 mg / l IT CL 50 mg / l CE 50 mg / l IT Acetylsalicylic acid 21,30 45,80 0,47 52,24 > 1000 NA 201,00 162,00 1,24 Amantadine 1240,00 504,21 2,46 1161,98 173,98 6,68 116,87 50,43 2,32 Captopril >1000 >1000 NA 1364,22 916,95 1,49 >1000 >1000 NA Cyclophosphamide C 784,20 198,00 8,51 867,5 300,12 2,89 >1000 >1000 NA Ethambutol dihydrochloride >1000 >1000 NA >4000 665,53 >6,01 >1000 >1000 NA bupivacaine hydrochloride 258,60 227,90 1,13 > 1000 > 1000 NA 66,67 15,57 4,28 Colchicine 36,00 24,40 1,48 9,72 2,62 3,71 186,75 65,21 2,86 Hydroxyzine 34,87 11,50 2,97 111,96 57,09 1,96 9,89 3,76 2,63 Levamisol 1003,00 382,60 2,62 987,13 563,71 1,75 64,84 50,77 1,28 Saccharin >1000 >1000 NA > 1000 > 1000 NA >1000 >1000 NA Amaranth >1000 >1000 NA > 1000 > 1000 NA >1000 >1000 NA Ceftriaxone 744,00 >1000 NA > 1000 > 1000 NA >1000 >1000 NA Cromolyn disodique >1000 >1000 NA > 1000 > 1000 NA >1000 >1000 NA Cyclamate sodium >1000 >1000 NA > 1000 > 1000 NA >1000 >1000 NA Lactitol monohydrate >1000 >1000 NA > 1000 > 1000 NA >1000 >1000 NA

l’éthambutol et le captopril uniquement par le test utilisant les embryons de médaka et l’acide acétylsalicylique uniquement par le test utilisant les embryons de xénope (Figure 50). Les tests utilisant le poisson zèbre et le xénope ont 2 VP avec des substances différentes. Ils ont une sensibilité faible de 40,0 %. Le test utilisant les embryons de médaka détecte 2 VP de plus et obtient la meilleure sensibilité des trois tests dans ces conditions, à savoir une sensibilité satisfaisante de 80,0 %.

Tableau 43 : Évaluation de la concordance des tests selon les conditions d’analyse de performance 1ère condition 2ème condition

Test utilisant le ^Poisson _zèbre Médaka Xénope Poisson _zèbre Médaka Xénope

Nombre de références 10 15

Seuil de l’indice tératogène 1,0

Nombre de « Vrais Positifs » 2 4 2 6 7 6

Nombre de « Faux Négatifs » 3 1 3 4 3 4

Nombre de « Vrais Négatifs » 5

Nombre de « Faux Positifs » 0

Spécificité 100%

Sensibilité 40,0% 80,0% 40,0% 60,0% 70,0% 60,0%

Concordance observée 0,70 0,90 0,70 0,73 0,80 0,73

Concordance attendue 0,50 0,50 0,50 0,47 0,49 0,47

Valeur κ 0,40 0,80 0,40 0,50 0,61 0,50

Accord du test Faible Fort Faible Modéré Fort Modéré

1ère condition : résultats valides et confirmés de la 1ère et de la 3ème catégories de références.

2ème condition : résultats valides et confirmés de toutes les catégories de références.

Dans la 2ème condition d’analyse, les 5 références de la 2ème catégorie sont intégrées. Le test utilisant les embryons de médaka obtient encore la meilleure sensibilité avec 70,0 %. Il a permis de détecter 1 VP de plus que les deux autres tests pour atteindre 7 VP avec 3 FN. Les tests utilisant les embryons de poisson zèbre et de xénope obtiennent là encore les mêmes performances mais pas sur les mêmes références de la liste commune. Ils ont chacun correctement détecté 6 substances comme ayant des effets tératogènes des références positives (6 VP). Parmi elles, 3 de la 2^ème catégorie sont communes aux trois tests : la colchicine l’hydroxyzine et le lévamisole. Leurs ITs varient en fonction des tests. Par exemple, l’hydroxyzine obtient 2,97 dans le test utilisant les embryons de poisson zèbre, 1,96 dans celui utilisant les embryons de médaka et 2,63 dans celui utilisant les embryons de xénope. La bupivacaïne est correctement identifiée par les tests utilisant les embryons de poisson zèbre et de xénope. La saccharine est le FN commun aux trois tests. Tous les ITs des références négatives de la 3ème catégorie sont nuls. Dans ces conditions, leur sensibilité de test

est modérée avec 60,0 %. Leur indice κ correspond à un accord modéré. L’ajout de substances avec des alertes de tératogénicité augmente de 20,0 % la sensibilité des tests utilisant les embryons de poisson zèbre et de xénope, tandis que celle du test utilisant les embryons de médaka augmente de 10,0 % pour atteindre 70,0 % avec un accord fort de concordance.

Figure 50 : Comparaison des IT des trois tests sur 15 substances de référence

Ronds violets : Poisson zèbre. Ronds bleus : Médaka. Ronds marron : Xénope.

Lorsque l’on compare les valeurs de CL50 et de CE50 obtenues dans les trois tests (Figure 51), la distribution entre les trois varie. Par exemple, le test utilisant les embryons de médaka est plus sensible à la colchicine (CL50 et CE50) que le test utilisant les embryons de poisson zèbre suivi de celui utilisant les embryons de xénope. Pour l’hydroxyzine, le test utilisant les embryons de xénope est le plus sensible suivi de celui utilisant les embryons de poisson zèbre puis celui utilisant les embryons de médaka. Le test utilisant les embryons de poisson zèbre est le plus sensible à l’acide acétylsalicylique que le test utilisant les embryons de xénope et aucune malformation n’a été observée chez les embryons de médaka exposés.

Sur la base de ces éléments, aucun test ne semble plus sensible que les deux autres. Les sensibilités des tests varient en fonction des substances présentes dans la liste.

Figure 51 : Comparaison des valeurs de CL50 et de CE50 des trois tests sur 15 substances de référence

Les valeurs de CL50 et de CE50 sont exprimées en log10 et en ordre inversé pour faciliter la lecture et mettre en avant les effets létaux ou tératogènes. Losanges et carrés violets : Poisson zèbre. Losanges et carrés

Pour comparer les trois tests sur une même liste de substances de référence, les résultats valides mais non confirmés sont également pris en compte pour intégrer les résultats obtenus dans le test utilisant les embryons de poisson zèbre. De la même manière pour appliquer les mêmes critères aux trois tests, le seuil de l’IT est fixé pour chaque test afin d’obtenir 100 % de spécificité avec la meilleure sensibilité possible. Selon ces critères, le seuil de l’IT est fixé à 1,0 pour les trois tests. En effet, aucune malformation n’a été observée chez les embryons exposés aux références négatives. Par conséquent, la valeur de leur IT n’a pas pu être calculée.

Dans la 1ère condition d’analyse de performance, le test utilisant les embryons de médaka obtient une sensibilité satisfaisante la plus élevée avec 80 % contre 40 % pour les deux autres sur la base de 10 substances de référence.

Dans la 2ème condition d’analyse, le test utilisant les embryons de médaka obtient la sensibilité plus élevée avec 70 % contre 60 % pour les deux autres pour un seuil fixé à 1,0 et sur une liste de 15 substances, même si les Vrais Positifs ne sont pas exactement les mêmes d’un test à un autre.

Lorsque les mêmes critères sont appliqués aux trois tests, le test utilisant les embryons de médaka obtient les meilleures performances avec une sensibilité satisfaisante entre 70 et 80 %, quel que soit les conditions d’analyse de performance.