Clivage et sécrétion

68

À l’instar de plusieurs autres neuropeptides comme POMC, ACBP peut être clivé pour produire différents peptides fonctionnels. La digestion trypsique d’ACBP génère les peptides Octadecaneuropeptide (ODN) et Triakontatetraneuropeptide (TTN). ACBP et l’ensemble de ses produits de clivage ont été nommés endozépines puisque ces peptides endogènes agissent sur le récepteur des benzodiazépines « endogenous benzodiazepine receptor ligand ». Ces endozépines sont associés aux synaptosomes dans les neurones et peuvent être sécrétés suite à la dépolarisation des membranes neuronales par le KCl (Ferrarese et al. 1987). Toutefois, les travaux récents montrant une localisation essentiellement gliale remettent en question l’expression neuronale décrite par le groupe de Costa. La sécrétion d’ACBP et/ou de ses produits de clivage a beaucoup été étudiée puisqu’elle est essentielle au rôle présumé d’ACBP en tant que neurotransmetteur. Plusieurs signaux incluant la voie de l’autophagie (Manjithaya et al. 2010), l’amyloïde β (Tokay et al. 2005) et le cortisol (Loomis et al. 2010) sont capables d’induire la sécrétion d’ACBP dans des cultures d’astrocytes. Les différents produits de clivages connus d’ACBP sont résumés dans la Figure 10

Figure 10 : Représentation schématique des différents produits de clivage d’ACBP.

ACBP (1-86) peut être clivé à plusieurs positions pour produire un ou plusieurs peptides considérés comme endozépines. Abréviations : (TTN) Triakontatétraneuropeptide (17-50), (ODN) Octadécaneuropeptide (33-50), (OP) Octapeptide (43-50).

69

ODN est un des deux produits majeurs du clivage d’ACBP, comme son nom l’indique, ODN est un peptide de 18 acides aminés formé des acides aminés 33-50 d’ACBP. Tout comme ACBP, ODN a la capacité de lier le récepteur CBR faisant partie du complexe GABAA et d’empêcher la liaison du diazépam, ainsi que des substances anxiogènes comme les β-carbolines. La capacité d’ODN à inhiber la liaison de ces substances au CBR est en fait supérieure à celle d’ACBP, ce qui suggérerait que l’action d’ACBP sur ce récepteur implique son clivage en ODN (Ferrero, Santi, et al. 1986). Ceci est corroboré par le fait que l’administration d’ODN en ICV produit les mêmes effets que l’administration de la protéine complète sur la prise alimentaire sur les comportements reliés à l’anxiété ainsi que le comportement de conflit. De plus, dans la plupart des cas, l’effet d’une administration d’ODN est plus rapide que l’administration d’ACBP (De Mateos-Verchere et al. 1998). ODN peut lui-même être clivé pour former un peptide biologiquement actif de 8 acides aminés, octapeptide (OP). Ce peptide, qui est composé des 8 derniers acides aminés C-terminal d’ODN, a les mêmes effets que ce dernier sur l’augmentation de la concentration en Ca++_{, effet dépendant du récepteur GABA}

A, ainsi que sur la prise alimentaire, effet dépendant du récepteur métabotropique (Leprince et al. 1998, do Rego et al. 2007).

V.3.1.2 Triakontatétraneuropeptide (TTN)

TTN, comme son nom l’indique, est un peptide de 34 acides aminés. Il est le premier produit de clivage d’ACBP (résumé à la Figure 10) et est formé des acides aminés 17-50 d’ACBP. À l’instar d’ODN, TTN est capable de se lier au site de reconnaissance des benzodiazépines. Par contre, le site d’action de TTN n’est pas sur le récepteur CBR, mais plutôt sur le « Peripheral Benzodiazepine Receptor » (PBR) (Slobodyansky et al. 1989). L’administration ICV de TTN produit des effets similaires sur l’anxiété qu’ODN. Ces effets peuvent être bloqués par des inhibiteurs spécifiques de PBR, mais pas par les inhibiteurs de CBR. De plus, l’augmentation de la concentration d’ions Ca++ _{intracellulaire} engendrée par TTN est additive à celle d’ODN et engendre une augmentation plus importante. Ceci suggère que ces deux peptides, quoique très similaires, agissent sur deux récepteurs différents (Gandolfo et al. 2001). Le récepteur PBR, contrairement à ce que son nom suggère, est aussi exprimé dans le cerveau au niveau de la membrane mitochondriale externe, il est aussi connu sous le nom de « Translocator protein » et est responsable de l’entrée du cholestérol dans la mitochondrie pour la

70

synthèse des stéroïdes (Krueger and Papadopoulos 1990). En accord avec la fonction de PBR dans le transport du cholestérol, TTN peut augmenter les niveaux de synthèse des neurostéroïdes (Do Rego et al. 2009).

V.3.1.3 Sécrétion

L’association d’ACBP aux synaptosomes, observée par microscopie électronique, est une des premières indications que cette protéine a la capacité d’être sécrétée. La sécrétion d’ACBP a été démontrée pour la première fois dans des préparations d’explants provenant de diverses régions du cerveau, hypothalamus, cortex, striatum hippocampe. Ces différents explants sont capables de sécréter ACBP à l’état basal et la dépolarisation membranaire de ces derniers par le KCl provoque une augmentation de la relâche d’ACBP dans le milieu de culture (Ferrarese et al. 1987). ACBP est plus fortement exprimé dans les cellules gliales que dans les neurones, sa sécrétion dans le milieu de culture provient probablement majoritairement des cellules gliales. D’autres études montrent qu’ACBP est surtout sécrété par les cellules gliales, plus précisément par les astrocytes (Lamacz et al. 1996, Gach et al. 2015). Les cellules de Müller, des cellules gliales radiales de la rétine, ou une lignée immortalisée de ces cellules gliales peuvent sécréter ACBP lorsqu’elles sont traitées au KCl. La sécrétion d’ACBP dans ces cellules est dépendante de sa phosphorylation par PKC. Le phorbol miristic acetate (PMA), un activateur de la PKC, augmente la sécrétion d’ACBP. ACBP possède deux résidus thréonines compatibles avec le motif de reconnaissance pour une phosphorylation par la PKC. Enfin, les deux thréonines phosphorylées par la PKC sont dans le peptide ODN qui, lorsqu’il est phosphorylé, a une plus forte affinité pour le récepteur GABAA qu’ODN non phosphorylé (Qian et al. 2008). Comme pour les cellules gliales Müller, le traitement de cultures d’astrocytes primaires provenant du cerveau induit la sécrétion d’ACBP. Dans ce système, plusieurs stéroïdes, comme le cortisol et le pregnenolone, sont aussi capables d’induire cette sécrétion. Dans le cerveau, le pregnenolone est converti en pregnenolone sulfate qui est capable d’induire la sécrétion d’ACBP à de plus forts niveaux que le pregnenolone. Le pregnenolone sulfate peut être produit dans le cerveau où il a la capacité de diminuer la transmission GABAergique, une fonction qui est conséquente avec son implication dans la sécrétion d’ACBP, un agoniste inverse du récepteur GABAA (Loomis et al. 2010). La sécrétion d’ACBP, sous forme d’ODN, par les astrocytes peut aussi être induite par l’accumulation d’amyloïde β. La présence d’agrégats peptidiques d’amyloïde β dans le milieu de culture d’astrocytes primaire induit à

71

la fois une augmentation de la production intracellulaire d’ACBP, augmentation à la fois de la transcription en ARN ainsi que de la synthèse de la protéine, et une augmentation dose dépendante de sa sécrétion (Tokay et al. 2005). Cette augmentation de la production et/ou de la sécrétion d’ACBP, liée à la présence d’amyloïde β, a aussi un effet positif sur la prolifération et la survie de ces astrocytes en culture. Bien que l’étude citée ne fasse pas le lien direct entre la sécrétion d’endozépine et la prolifération et survie cellulaire, ce rôle potentiel d’ACBP dans le CNS sera abordé plus en détail dans les sections suivantes.

L’analyse de la séquence d’ACBP soulève un problème majeur en ce qui a trait à sa sécrétion. ACBP ne possède pas de séquence N-terminale lui permettant d’être transloqué vers l’ER et l’appareil de Golgi pour être sécrété par la voie de sécrétion classique des protéines. Il est suggéré qu’ACBP, comme plusieurs autres protéines, puisse être sécrété par un mécanisme de sécrétion non conventionnel. Ceci est mis en évidence par le fait que la sécrétion d’ACBP par des astrocytes en culture n’est pas inhibée en présence de brefeldin A, un inhibiteur de l’assemblage des vésicules d’exocytose dites classiques (Lafon-Cazal et al. 2003). Plusieurs études chez la levure et chez l’amibe ont montré que les mécanismes de sécrétion d’ACBP impliquent plusieurs protéines de la voie de l’autophagie. Chez la levure et l’amibe, l’autophagie induite par une privation nutritionnelle augmente la sécrétion d’ACBP dans le milieu extracellulaire, cette sécrétion requiert les étapes initiales de la voie de l’autophagie. L’inactivation d’un seul ou plusieurs gènes impliqués cette voie inhibe complètement la sécrétion d’ACBP. L’étape finale de l’autophagie, la fusion des autophagosomes et endosomes avec les vacuoles et les lysosomes, n’est pas requise pour la sécrétion d’ACBP dans ce modèle. En effet, l’invalidation des gènes impliqués dans la fusion des autophagosomes aux vacuoles n’a pas d’effet sur la relâche d’ACBP dans le milieu extracellulaire (Duran et al. 2010, Manjithaya et al. 2010). Les vésicules contenant ACBP fusionnent directement avec la membrane plasmique pour sécréter leur contenu dans le milieu extracellulaire. Le transport de ces vésicules est effectué via un mécanisme qui dépend de la protéine de l’assemblage de l’appareil de Golgi GRASP et leur fusion avec cette dernière requiert le complexe SNARE (Kinseth et al. 2007). Une des étapes essentielles à l’inclusion d’ACBP dans ces vésicules sécrétoires semble être la liaison d’ACBP à un Acyl-CoA, plus précisément les MCFA-CoA. L’inhibition de leur production dans le peroxysome inhibe la sécrétion d’ACBP (Manjithaya et al. 2010). La translocation d’ACBP dans l’ER et l’appareil de Golgi est un autre processus, possiblement relié à sa sécrétion, qui nécessite la liaison d’un Acyl-CoA (Hansen et al. 2008). La sécrétion d’ACBP, stimulé par l’amyloïde β, nécessite une augmentation des niveaux de « cyclic Adenosin

72

monophosphate » (cAMP) ainsi que l’activation de la PKA, une kinase activée par le cAMP. L’inhibition de l’adenylyl cyclase ou de la PKA a pour effet d’inhiber la sécrétion d’ACBP, mais n’affecte pas la relâche basale d’ACBP (Tokay et al. 2008). Ce mécanisme de sécrétion, cAMP et PKA dépendant, semble impliquer le transporteur ATP-binding cassette, ce transporteur membranaire est exprimé dans les astrocytes en culture et peut être phosphorylé par la PKA, de plus son inhibition prévient la sécrétion d’ACBP stimulée par l’amyloïde β (Tokay et al. 2005, Masmoudi-Kouki et al. 2006).

Une fois sécrété, ACBP est ensuite clivé et peut agir sur deux différents types de récepteur, ionotropique et métabotropique, et donc produire des réponses différentes. Jusqu’à ce jour, uniquement un de ces deux récepteurs d’ODN a été identifié, soit le récepteur GABAA. Nous allons brièvement décrire ces différents récepteurs avant d’introduire les fonctions d’ACBP et d’ODN dans le SNC.