Blocage du transfert

E. faecalis est capable d’acquérir, d’accumuler et de disséminer des éléments

extra-chromosomiques codant pour des propriétés contribuant à leur pathogenèse et à la résistance aux antimicrobiens [32]. Cette espèce possède, tel que mentionné précédemment, un système de transfert hautement efficace nommé « réponse aux phéromones » et qui implique l’expression d’une protéine d’agrégation à sa surface. Ainsi, une première étude a été faite démontrant l’inhibition de l’auto-agrégation de la bactérie E. faecalis, exprimant la protéine d’agrégation, par un sérum anti-N-terminal de la protéine [162]. Le but de cette étude était de caractériser en détail l’adhésine codée par le plasmide répondant aux phéromones le plus connu, pAD1, soit la protéine d’agrégation codé par le gène asa1. Ainsi, les chercheurs ont démontré que les protéines d’agrégation codées par 17 plasmides répondant aux phéromones étaient immunologiquement reliées. Ils ont également démontré que le domaine N-terminal de la protéine était exposé à la surface tandis que la partie C-terminale l’était moins. Une seconde étude a démontré la corrélation entre la formation d’agrégats et le transfert plasmidique efficace par l’analyse de mutants par insertion de la protéine d’agrégation [37]. Le but de cette étude était d’analyser la relation structure-fonction de la protéine d’agrégation. Afin d’identifier les domaines fonctionnels, une banque de 23 mutants par insertion de la protéine d’agrégation PrgB (plasmide pCF10) a été construite. L’analyse de ces insertions a révélé un domaine nécessaire à l’agrégation du donneur-receveur qui s’étend au-delà de la région N-terminale. De plus, des insertions dans le domaine C-

terminal de la protéine ont également réduit la formation d’agrégats. Par ce fait même, l’habileté de former des agrégats corrélait avec un transfert efficace du plasmide. Finalement, une étude précédente a utilisé des anticorps monoclonaux anti-Asc10 et polyclonaux F’ab anti-Asc10 afin de démontrer l’interaction entre la protéine d’agrégation et son récepteur, la substance de liaison, impliqués dans la conjugaison répondant aux phéromones du plasmide pCF10 et dans son transfert [36]. Effectivement, ils ont pu démontrer que ces anticorps pouvaient bloquer la formation d’agrégats et réduisaient le taux de transfert conjugatif du plasmide pCF10 qui code également pour de la résistance à la tétracycline.

Ainsi, en rappel, les objectifs détaillés de ce projet sont les suivants :

1. Caractériser la résistance aux antibiotiques phénotypique et génotypique des E. faecalis et E. faecium aviaires et porcins des abattoirs du Québec. Cet objectif consiste en la détermination des profils de résistance aux antimicrobiens et de la diversité des gènes de résistance aux antibiotiques des isolats provenant des abattoirs. En plus, elle consiste à étudier la colocalisation plasmidique des gènes de résistance aux macrolides et aux tétracyclines, deux des résistances les plus communes chez les entérocoques.

2. Détecter la présence du gène de virulence asa1, qui code pour la substance agrégative, chez les isolats multi-résistants, et déterminer la présence d’une association plasmidique ou d’un co-transfert de ce gène et de gènes de résistance aux antibiotiques. Cet objectif permet l’identification d’un isolat démontrant une colocalisation, qui sera utilisé dans l’objectif 3 de ce travail. La dissémination des plasmides répondant aux phéromones est également mise en évidence chez des isolats d’E.

faecalis commensaux de la volaille et du porc du Québec.

3. Suite à la détection d’une colocalisation plasmidique du gène asa1 et de gènes de résistance aux antibiotiques, l’interférance par un antisérum polyclonal Agg44-560 est évalué dans le processus de conjugaison

répondant aux phéromones. Cet objectif consiste en la création de l’antisérum polyclonal Agg44-560 et de son utilisation in vitro lors des

expérimentations de conjugaison répondant aux phéromones.

4. En plus de l’analyse d’isolats d’entérocoques commensaux, un objectif vise à caractériser et à comparer des souches cliniques d’E. faecium isolées d’origines humaine et canine. Cet objectif permet d’utiliser des outils d’analyse rapides et efficaces afin de déterminer des caractères spécifiques des isolats testés. De plus, ces analyses permettent d’observer des associations significatives ou non selon l’hôte. Ces associations sont déterminées pour les gènes de résistance aux antibiotiques, les gènes de

virulence, les phénotypes d’hémolyse et de la gélatinase, la formation de biofilm, la présence de familles de plasmides et des séquences CRISPR.

Ce travail permet de décrire les profils de résistance phénotypique et génotypique en contribuant en une meilleure compréhension de la résistance des isolats d’E. faecalis et d’E. faecium aviaires et porcins des abattoirs du Québec. L’analyse des éléments génétiques mobiles de ces isolats augmente nos connaissances sur la plasticité génomique des entérocoques et leur grande capacité d’accumuler des gènes de résistance aux antibiotiques. Puisque nous étions face à la présence d’un plasmide répondant aux phéromones non-décrit jusqu’à présent dans un isolat E. faecalis aviaire, nous devions démontrer préalablement la capacité d’interférer dans le transfert horizontal de ce plasmide et également, d’interférer dans la formation d’agrégats y étant rattachée par l’utilisation d’un antisérum polyclonal SA. Ainsi, cette étude permet également d’ouvrir la porte sur de nouvelles stratégies portant sur la diminution du transfert horizontal de la résistance aux antibiotiques via le blocage de molécule impliquée dans la conjugaison répondant aux phéromones. Cette stratégie pourrait représenter une avenue intéressante dans l’interférence du transfert horizontal de la résistance aux antibiotiques pour les producteurs porcins et aviaires du Québec. Finalement, ce projet permet également d’identifier et de caractériser des facteurs associés à la virulence et à la résistance aux antibiotiques d’isolats cliniques humains et canins du Québec, Canada afin de mieux déterminer leur importance dans l’environnement hospitalier.