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Streptococcus thermophilus : réponses physiologiques aux températures basses et étude de deux protéines de
choc froid ; premières étapes de la cartographie protéomique
Clarisse Perrin
To cite this version:
Clarisse Perrin. Streptococcus thermophilus : réponses physiologiques aux températures basses et étude de deux protéines de choc froid ; premières étapes de la cartographie protéomique. Biochimie [q-bio.BM]. Université Henri Poincaré - Nancy 1, 1999. Français. �NNT : 1999NAN10267�. �tel- 01747553�
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Matériel et Méthodes 116
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lavage 1 fois 5 min dans du tampon TBS (Tris-HCI50 mM pH 7,4 ; NaCI 150 mM)
la révélation est réalisée avec le kit de Sigma (DAB) liquid substrat system la réaction est stoppée après quelques minutes avec du tampon TBS.
4.7. Autoradiographie
Les protéines qui ont été marquées avec de la L35S-méthionine sont mises en évidence par autoradiographie. 10 000 cpm sont déposés dans chaque puits pour les PAGE-SDS-1 D, et 30 000 cpm pour les PAGE-SDS-2D.
Après la migration des protéines radioactives, le gel est placé 20 min dans une solution de TCA 12%, et est ensuite séché. Aucune coloration n'est réalisée afin de ne pas engendrer d'interférences ou " Quenching ".
Le gel sec est placé en contact avec un film Hyperfilm I3max de Kodak, à l'obscurité dans une cassette à température ambiante. Après deux semaines, le film est développé:
- 5 min dans une solution révélatrice (LX 24) - rincé à l'eau courante
- 5 à 10 min dans une solution fixatrice (AL 4)
4.8. Electrophorèse capillaire
Les dosages des glucides et des acides organiques sont effectués par électrophorèse capillaire.
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