Immunomarquages sur biopsies cutanées

Images en Dermatologie ^• Vol. IX - n° 6 ^• novembre-décembre 2016 ²¹⁹

Dermato-pathologie

Fiche

Fi ch e n

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Immunomarquages sur biopsies cutanées

Immunostainings of skin samples

N. Ortonne

(Département de pathologie, hôpital Henri-Mondor, AP-HP, Créteil)

Indications et type de prélèvements Immunohistochimie

• Biopsie fi xée dans le formol (biopsie de routine)

• Biopsie congelée, rarement nécessaire actuellement (recherche) - Caractérisation des cancers et lymphomes cutanés

-Caractérisation de certains infi ltrats infl ammatoires : lupus, syndrome de Sweet histiocytoïde…

-Identifi cation d’agents pathogènes : syphilis

-Génodermatoses : expression anormale de certains gènes Immunofl uorescence

• Biopsie fraîche pour congélation immédiate

• Biopsie dans le liquide de Michel (3 à 4 jours maximum) - Dermatoses bulleuses

-Suspicion de lupus : recherche d’une bande lupique -Vascularite et mise en évidence de complexes immuns Technique “en une couche”

Immunofl uorescence et automates

Ré-hydratation des coupes si prélèvement fi xé et inclus en paraffi ne

• Inutile si biopsie congelée (milieu aqueux)

• Bains de xylène puis d’alcool (de concentration croissante) puis d’eau Incubation de la coupe avec l’anticorps (AC) primaire

▶ IFD : Ac couplé à un fl uorochrome

• Contre-coloration (ex. : bleu Evans )

• Montage entre lame et lamelle

• Observation sur microscope à fl uorescence dans le noir

▶ Automate : Ac couplé à une macromolécule couverte d’enzyme (ex. : peroxydase) (fi gure 1)

• Lavage

• Incubation de la coupe dans le substrat de l’enzyme : di-amino-benzidine (DAB)

• Contre-coloration

• Montage entre lame et lamelle

• Observation avec microscope à fond clair

Peroxydase Anticorps primaire

Antigène à détecter

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Images en Dermatologie ^• Vol. IX - n° 6 ^• novembre-décembre 2016 220

Dermato-pathologie

Sous la responsabilité de son auteur

Fiche

Technique “en trois couches”

Peroxydase anti-peroxydase (PAP) [fi gure 2]

• Réhydratation des coupes si prélèvement fi xé et inclus en paraffi ne - Inutile si biopsie congelée (milieu aqueux)

-Bains de xylène puis d’alcool (de concentration croissante) puis d’eau

• Blocage des enzymes endogènes (peroxydase) : H ₂ O ₂

• Incubation de la coupe avec l’anticorps primaire (espèce 1, ex. : souris)

• Incubation de la coupe avec l’anticorps secondaire (espèce 2, ex. : lapin), tertiaire (espèce 1) et la peroxydase

• Incubation de la coupe avec la di-amino-benzidine (DAB)

• Contre-coloration

• Montage

• Observation avec microscope à fond clair

Technique “en deux couches”

Système (strept)avidine-biotine (fi gure 3)

• Réhydratation des coupes si prélèvement fi xé et inclus en paraffi ne - Inutile si biopsie congelée (milieu aqueux)

-Bains de xylène puis d’alcool (de concentration croissante) puis d’eau

• Incubation de la coupe avec l’anticorps primaire (espèce 1, ex. : souris)

• Incubation de la coupe avec l’anticorps secondaire (espèce 2, ex. : lapin) couplé à la biotine

• Incubation de la coupe avec la (strept)avidine couplée à la peroxydase

• Incubation de la coupe avec la di-amino-benzidine (DAB)

• Contre-coloration

• Montage

• Observation avec microscope à fond clair

N. Ortonne déclare ne pas avoir de liens d’intérêts.

Peroxydase

Anticorps primaire

Anticorps secondaire Anticorps tertiaire

anti-peroxydase Complexe “PAP”

Antigène à détecter 2

Peroxydase Biotine Avidine

Anticorps biotinylé Complexe avidine-biotine- peroxydase

Antigène à détecter 3

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