DEFICIT EN G6PD ET VARIATION DU TAUX DES TRANSAMINASES SERIQUES CHEZ LES NOUVEAU-NES AU CHUD-B/A DE PARAKOU

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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI (UAC)

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)

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DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

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OPTION : ANALYSES BIOMEDICALES (ABM)

RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION DU PREMIER CYCLE POUR L’OBTENTION DU DIPLÔME DE LICENCE PROFESSIONNELLE

THEME

Réalisé par :

Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Soutenu le : 02 février 2018

Année académique 2016-2017 10ème Promotion de licence Professionnelle

Tuteur de stage : Mr Gilbert DJIDONOU Ingénieur des travaux en ABM

Chef Section Biochimie au CHUD/B-A

Superviseur de stage : Dr. Casimir D. AKPOVI Maître de Conférences des Universités

de CAMES. Enseignant Chercheur à l’UAC/EPAC

DEFICIT EN G6PD ET VARIATION DU TAUX DES

TRANSAMINASES SERIQUES CHEZ LES NOUVEAU-NES AU CHUD-B/A DE PARAKOU

Composition du Jury :

Président du jury : Professeur Julien SEGBO Examinateur : Professeur Eugénie ANAGO Superviseur : Professeur Casimir AKPOVI

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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE D’ABOMEY CALAVI (UAC)

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)

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DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

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DIRECTEUR : Professeur Mohamed M. SOUMANOU

DIRECTEUR ADJOINT : Professeur Clément AHOUANNOU

CHEF DE DEPARTEMENT : Docteur Pascal ATCHADE

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page i

LISTE DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

ANNEES ACADEMIQUES 2016-2017 A. ENSEIGNANTS PERMANENTS n° Noms et Prénoms Matières enseignées

01 AHOYO Théodora Angèle Microbiologie

Santé publique et Hygiène Hospitalière 02 AKPOVI Casimir Biologie Cellulaire

Physiologie des Régulations Biochimie

03 ANAGO Eugénie Biochimie

04 ATCHADE Pascal Parasitologie

Entomologie Médicale 05 BANKOLE Honoré Bactériologie Appliquée 06 DOUGNON Victorien Informatique Médicale

Microbiologie

Méthodologie de la Recherche 07 KLOTOE Jean Robert Equipements Biomédicaux 08 LOKO Frédéric Biochimie Clinique

09 LOKOSSOU Gatien Immunologie Général 10 LOZES Evelyne Immunologie Général 11 SEGBO Julien Biologie Moléculaire

Biochimie Clinique

12 YOVO Paulin Pharmacologie /Toxicologie

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page ii

B. ENSEIGNANTS VACATAIRES n° Prénoms et Noms Matières enseignées

01 ABLEY Sylvestre Déontologie Médicale 02 AGBANGLA Clément Génétique Moléculaire

03 AGOSSOU Gilles Législation et Droit du Travail 04 AKOWANOU Christian Physique

05 ALITONOU Guy Chimie

06 ANAGONOU Sylvère Education Physique et Sportive 07 DESSOUASSI Noël Biophysique des Solutions 08 DOSSEVI Lordson Techniques Instrumentales

09 DOSSOU Cyriaque Techniques d’Expression et Méthodes de Communication

10 GANDJI Sewes Anatomie générale 11 HOUNNON Hippolyte Mathématiques 12 HOUNSSOSSOU Hubert Biostatistique 13 KOFFI Aristide Anglais

14 Père Vincent MASLOKONOU Histologie Générale

15 SECLONDE Hospice Immuno-hématologie et Transfusion Sanguine 16 SENOU Maximin Histologie Appliqué

17 SOEDE Casimir Anglais technique 18 TOHOYESSOU Zoé Soins Infirmiers

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page iii

A mes parents,

Justin AGBADJAGAN et Yolande DOMINGO pour le soutien et l’affection dont ils m’ont comblés.

DEDICACES

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page iv

Nous remercions le DIEU Tout Puissant pour nous avoir protégés et guidés tout au long de cette période :

 Aux autorités administratives de l’EPAC et du CHUD-BA, retrouvez ici l’expression de notre profonde gratitude.

 A notre maître de mémoire Pr AKPOVI Casimir, qui a contribué par ses actions, sa disponibilité et ses conseils, à la bonne réalisation de ce travail, trouvez ici notre sincère reconnaissance.

 Nos remerciements vont également à l’endroit du personnel des services du laboratoire, pour leur implication et la disponibilité dont ils ont fait preuve pour faire aboutir ce travail dans les meilleures conditions. Nous n’oublions pas de remercier le Professeur AKPONA Simon et le Docteur GOMINA Moutawakilou ainsi que les techniciens de laboratoire, Mr DJIDONOU Gilbert et tous les autres. et nos amis stagiaires du laboratoire du CHUD-BA.

 Aux moniteurs de travaux pratiques pour leur patience et leur dévouement tout au long du cycle .

 A mon cousin Codjia fabrice pour son soutien quotidien.

 A mes oncles et tantes pour leurs encouragements et leurs soutiens.

 A tous mes camarades de la 10^ème promotion pour leurs soutiens .

 Enfin à mes très chers parents pour leur affection, leurs soutiens matériels et surtout spirituels.

REMERCIEMENTS

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page v

 A SON EXCELLENCE LE PRESIDENT DU JURY

Nous sommes très honorés que vous acceptiez de présider le jury chargé de juger la qualité de ce rapport de stage malgré vos programmes très chargés. Vos remarques et suggestions seront prises en compte pour améliorer la qualité scientifique de ce rapport de stage.

 AUX HONORABLES MEMBRES DU JURY

C’est un insigne honneur que vous nous faites en acceptant de juger ce travail. Vos remarques et suggestions seront également prises en compte pour parfaire ce rapport de stage.

HOMMAGES

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page vi

CHUD-B/A : Centre Hospitalier Universitaire Départemental de Borgou Alibori

CPU : Collège Polytechnique Universitaire EDTA : Ethylène Diamine Tétra Acétique EPAC : Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi

G6P : Glucose-6-Phosphate

G6PD : Glucose-6-Phosphate Déshydrogénase.

GBH : Génie de Biologie Humaine

GSH : Glutathion réduit

GSSG : Glutathion oxydé ou Disulfure de glutathion

NADP+ : Nicotinamide Adénine Dinucléotide Phosphate oxydé NADPH : Nicotinamide Adénine Dinucléotide Phosphate réduit OMS : Organisation Mondiale de la Santé

ALAT : Alanine Amino Transférase ASAT : Aspartate Amino Transférase

ATP : Adénosine Triphosphate

MDH : Malate Déshydrogénase

LDH : Lactate Déshydrogénase

LISTES DES SIGLES ET ABREVIATIONS

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page vii

Figure 1 : Représentation du chromosome X et position du gène de

la G6PD………...……... ³

Figure 2 : Structure du dimère de la G6PD……….. 4

Figure 3 : Répartition des nouveau-nés en fonction du sexe………... ²⁰ Figure 4 : Répartition des nouveau-nés en fonction de l’ethnie……… ²¹ Figure 5 Répartition des nouveau-nés en fonction de l’âge………... ²¹ Figure 6 : Répartition des sujets déficitaires en fonction du sexe……… 22

Figure 7 : Moyenne de l’activité de la G6PD en fonction du sexe…….. ²³ Figure 8 : Répartition des sujets déficitaires selon le type de déficit…... 24

Figure 9 : Répartition des taux de transaminases en fonction du sexe... 24

Figure 10 : Répartition des taux de transaminases en fonction du type de

déficit et du sexe……… ²⁵

Figure 11 : Variation du déficit en fonction l’âge……….. ²⁵

LISTES DES FIGURES

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page viii

Tableau I : Répartition du déficit en G6PD selon le sexe……….. 22 Tableau II : Valeur moyenne de l’activité enzymatique de la G6PD en

fonction du sexe……….. 23

LISTE DES TABLEAUX

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page ix

Le déficit en Glucose-6-Phosphate Déshydrogénase (G6PD) est une enzymopathie héréditaire encore appelée « favisme » en raison du risque de survenue d’accident hémolytique après ingestion de fèves par les personnes déficitaires. Cette pathologie touche plus de 400 millions de personnes dans le monde, ce qui en fait le déficit enzymatique le plus répandu. L’objectif de l’étude est de déterminer une corrélation entre le déficit en G6PD et le taux des transaminases sériques chez les nouveau-nés de Parakou. Cette étude prospective et descriptive a été réalisée sur 64 nouveau-nés recrutés dans les centres de vaccination de Kpébié, CScom et Banikanni du 21 aout au 4 septembre 2017. A l’issu de l’étude, 23 (35,94%) sur 64 nouveau-nés ont été détectés déficients en G6PD. Il n’y a pas de différence significative entre l’activité enzymatique chez les filles comparée aux garçons. Par ailleurs, a été observé un taux de transaminases significativement plus élevé chez les non déficients par rapport aux déficients en G6PD.

Mots clés : activité enzymatique, déficit en G6PD, transaminases sériques

RESUME

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page x

Glucose -6- Phosphate Déhydrogénase (G6PD) deficiency is a hereditary enzymopathy still called favism because of the risk of occurrence of haemolytic accident after ingestion of beans by people with deficiency. This pathology affects more than 400 million people worldwide, making it the most widespread enzyme deficiency. The aim of the study was to determine a correlation between G6PD deficiency and serum transaminase levels in newborns in Parakou. This prospective and descriptive study was carried out on 64 newborns recruited in the Kpébié, Cscom, and Banikanni vaccination centers from august 21 to September 4, 2017. At the end of the study, 23 (35,94%) out of 64 new – were found to be deficient in G6PD. There is no significant difference between enzymatic activity in girls comparated to boys. In addition, a significantly higher transaminase level was observed in not deficient patients than in G6PD deficient patients.

Key words: enzymatic activity, G6PD deficiency, serum transaminases

ABSTRACT

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page xi

INTRODUCTION

PREMIERE PARTIE : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

DEUXIEME PARTIE : CADRES MATERIELS ET METHODES

TROISIEME PARTIE : RESULTATS ET DISCUSSION

CONCLUSION SUGGESTIONS

SOMMAIRE

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Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page 1

Le déficit en Glucose-6-Phosphate Déshydrogénase (G6PD) érythrocytaire affecte plus de 400 millions d’individus dans le monde. Il représente ainsi, l’enzymopathie érythrocytaire la plus fréquente (Sara et al, 2001) (Sridevi et al, 2002) Sur le plan moléculaire, il est la conséquence d’une mutation ponctuelle au niveau du gène codant pour la G6PD située sur le chromosome X. Plusieurs variantes ont été décrites, mais la plus fréquemment observée en Afrique et particulièrement en Afrique sub-saharienne est la variante A- (Beutler et al, 1989) (Allison, 1960) caractérisé par une activité enzymatique comprise entre 20 et 50% de la normale. Le déficit en G6PD a été découvert en 1956 par Carson et ses collaborateurs suite aux effets hémolysant d’un antipaludéen (primaquine) chez les noirs américains (Carson, 1956). Pour l'OMS, 7.5% de la population mondiale aurait l'une des variantes du déficit en G6PD mais souvent sans manifestations cliniques et environ 3,4 % de cette population aurait un risque de pathologie potentielle. L'OMS estimait en 1989 à 4,5 millions par an le nombre de bébés naissant avec un potentiel de déficit en G6PD sur 130 millions les naissances dans le monde (OMS, 1989). Dans la population noire des Etats Unis et dans les pays méditerranéens, sa prévalence va de 1/10 à 1/40 (Hofmann et al, 2016).

En Afrique de l’Ouest et en Afrique centrale, la prévalence du déficit en G6PD est estimée à 15 à 26%. Plus de 400 millions d'individus dans le monde sont atteints par le déficit en G6PD. L'OMS recommande le dépistage systématique du déficit en G6PD dans les régions où la prévalence de la carence en G6PD peut atteindre 3 à 5% ou plus (OMS, 1990).

INTRODUCTION

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Au Bénin, dans la ville de Parakou précisément, le diagnostic du déficit en G6PD n’est pas systématique à la naissance chez les nouveau-nés et n’est pas souvent demandé pour les nouveau-nés présentant une jaunisse lorsque le médecin soupçonne d’autres causes liées à une défaillance de la fonction hépatique.

La présente étude vise à analyser la variation de l’activité enzymatique de la G6PD chez les nouveau-nés. Spécifiquement, il s’agira de :

 Déterminer l’activité enzymatique G6PD chez les nouveau-nés.

 Etablir la proportion des sujets déficitaires en G6PD.

 Déterminer un rapport entre l’activité enzymatique de la G6PD et les taux d’ALAT et d’ASAT.

En dehors de l’introduction et de la conclusion, le présent travail a été rédigé en trois parties essentielles. La première partie aborde la synthèse bibliographique de la G6PD, la physiopathologie, les transaminases sériques. Le matériel et la méthodologie adoptée ont été décrits dans la deuxième partie. Les résultats suivis du commentaire ont constitué le contenu de la troisième partie.

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1. Glucose-6-Phosphate Déshydrogénase

La Glucose-6-Phosphate Déshydrogénase (G6PD) est une enzyme présente dans le cytoplasme des globules rouges. Elle joue un rôle essentiel dans l’élimination des peroxydes au niveau des globules rouges.

1.1 Structure et fonction 1.1.1 Structure

La Glucose-6-Phosphate Déshydrogénase est une enzyme ubiquitaire retrouvée dans toutes les cellules de l’organisme. Sa structure tridimensionnelle est définie en 1996 et plus d’une cinquantaine de séquences homologues à celles de l’enzyme humaine sont révélées (Norato, 2000 Wajcman et Galacteros ,2004). Cette enzyme est retrouvée dans la plupart des espèces avec quelques rares exceptions pour certains parasites profitant de l’action enzymatique de leur hôte ou encore certains micro-organismes vivant dans des milieux pauvres en oxygène. Chez l’être humain, la G6PD est une protéine codée par un gène constitué de 13 exons, se trouvant sur le locus q28 du chromosome X.

PREMIERE PARTIE : SYNTHESE

BIBLIOGRAPHIQUE

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Figure 1 : Représentation du chromosome X et position du gène de la G6PD (Source : Paie et al, 1980)

Figure 2 : Structure du dimère de la Glucose-6-phosphate déshydrogénase

La forme active de l’enzyme est un homo-dimère s’associant en tétramère en fonction du pH et de la force ionique (figure 2). Dans chaque sous-unité, une molécule de NADP+ fait partie intégrante de la structure enzymatique et se localise à distance du site catalytique et douze régions sont distinguées dans chaque molécule de G6PD, dont les plus importantes sont : la zone catalytique, la zone de contact entre les deux monomères et le site de fixation du coenzyme (Wajcman et Galacteros, 2004).

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Chaque monomère se compose de deux domaines : le domaine N-terminal (27 à 200 acides aminés), avec un site de liaison dinucleotide (38-44 acides aminés) et le domaine C terminal, plus grand, avec un site, constitué d'un repliement antiparallèle de neuf feuillets plissés.

Les deux domaines sont reliés par une hélice , qui contient la totalité des huit résidus peptidiques, agissant en tant que site de liaison du substrat (198-206 acides aminés).

La visualisation de la structure de l’enzyme, à une résolution de 3Å, révèle une molécule de NADP + dans chaque sous-unité du tétramère, à distance du site actif mais proche de l’interface du dimère.

La stabilité des structures actives du tétramère est essentielle pour l'activité normale de l’enzyme (Cappellini et Fiorelli, 2008). Le gène codant pour la G6PD se situe sur le chromosome X ; la transmission est donc héréditaire et liée au sexe. Le gène se trouve sur le locus q28 du chromosome X, il s’étend sur 20 kb et comporte 13 exons (figure 1) (Wajcman et Galacteros, 2004).Initialement, le déficit en G6PD a été caractérisé biochimiquement, en mesurant l'activité enzymatique résiduelle et la mobilité électro phorétique.

Le déficit en G6PD peut être d’ordre quantitatif (réduction du nombre de molécules d'enzyme), qualitatif (différence de structure de l'enzyme) ou les deux. Plus de 400 variantes biochimiques du déficit en G6PD ont été identifiées, incluant d'autres critères tels que les propriétés physico-chimiques (stabilité thermique et variables de comportement chromatographiques) et cinétiques. La G6PD a été dénombrée en plusieurs variantes. L’enzyme de référence est dénommée G6PD (B+) dont l’activité enzymatique est de 100% avec une fréquence de 60-80% dans la population.

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La variante (A+) a une fréquence de 15-40% avec une activité enzymatique de 80%, elle diffère de (B+) par un nucléotide en position 376 de la séquence nucléotidique (l’adénine est remplacée par la guanine).

La variante (A-) rencontrée dans la population noire notamment en Afrique sub-saharienne, atteint typiquement des fréquences de près de 25%

dans les populations vivant en zones d’endémie palustre (Wajcman et Galacteros, 2004).

Cette variante a une activité enzymatique de 12% (Luzzatto et Mehta, 1989) et a été décrite comme un facteur de réduction du risque de paludisme grave pour les hétérozygotes femelles et les hémizygotes masculins pour la G6PD (Ruwende et Hill,1998).

L’allèle (A-) diffère de (A+) par un nucléotide en position 202 (la guanine est remplacée par l’adénine) (Hirono et Beutler, 1988) et la

conséquence de cette mutation se traduit par une accumulation des ions peroxydes (H2O2) entraînant la mort des cellules, par une anémie hémolytique et par un déficit de l’activité enzymatique de la G6PD. On note également une variante plus sévère que la variante (A-) dite méditerranéenne qui présente une demi-vie de 8 jours de la protéine. L'examen des variantes de la G6PD montre que, dans la plupart des cas, le déficit est dû à l'instabilité de l'enzyme, ce qui implique que des substitutions d'acides aminés dans différentes localisations peuvent déstabiliser la molécule enzymatique (Cappellini et Fiorelli, 2008). La transmission héréditaire du déficit en G6PD montre un modèle typique de transmission lié au chromosome X.

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1.1.2 Fonction

La Glucose-6-Phosphate Déshydrogénase est une enzyme cytoplasmique qui catalyse la première réaction de la voie des pentoses phosphates (PPP), permettant la conversion du glucose en pentoses nécessaires à beaucoup de réactions biosynthétiques. Elle catalyse l’oxydation du glucose-6-phosphate en 6-phospho-glucuronate avec réduction de nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADP+ -> NADPH) (Megarbane, 2008).

Le NADPH joue un rôle important dans la réduction des agents oxydants, en permettant de maintenir le pool de glutathion réduit au niveau normal, particulièrement dans les globules rouges (Wajcman et Galacteros,2004).

Cette voie de synthèse est la seule source de NADPH dans le globule rouge.

Le NADP réduit est indispensable à la protection de l’hématie et de son hémoglobine contre l’oxydation compte tenu de leur rôle dans le transport de l’oxygène .

Le glutathion intervient dans la protection contre l’oxydation. Il est fabriqué par les globules rouges, où il s’y trouve à une teneur importante sous sa forme réduite (GSH). Le glutathion réduit est capable de reformer des groupes –SH ayant été oxydés et s’oxyde lui-même dans une réaction avec les peroxydes et sous l’action de la glutathion peroxydase et devient alors GSSG (forme oxydée du glutathion).

Dans un globule rouge normal, le NADP se trouve en majeure partie sous sa forme réduite (NADPH) et l’activité de la G6PD ne représente qu’environ 2

% du maximum de son activité. Le NADPH et l’ATP inhibent l’enzyme et le NADP non réduit est lié à la catalase. Lors d’un stress oxydatif, il y a augmentation de l’oxydation du NADPH et simultanément une levée de l’inhibition de la G6PD, entrainant proportionnellement une augmentation de l’activité enzymatique et du NADP.

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Cette augmentation de l’activité réductrice permet ainsi au globule rouge normal de faire face aux conditions oxydatives auxquelles il peut être confronté et l’importance de ses réserves en NADP l’aident à faire face aux actions oxydatives élevées. C’est ainsi que les hématies de sujets atteints d’un déficit en G6PD produisent moins de NADPH indispensable à la détoxification des radicaux libres produits par le métabolisme, les rendant beaucoup plus sensibles aux agressions oxydatives (Mura et al, 2009).

Chez un sujet normal, l’activité enzymatique reste supérieure aux besoins des globules rouges, ce qui n’est pas le cas d’un sujet ayant un déficit en G6PD (Wajcman et Galacteros, 2004).

1.2 Physiopathologie

Comme indiqué ci-dessus, la G6PD est une enzyme de la voie des pentoses phosphates.

Elle catalyse l’oxydation du glucose-6-phosphate et réduit le nicotinamide adénine dinucléotide (NADP+). Le NADPH réduit permet de régénérer du glutathion ayant pour rôle la neutralisation des peroxydes toxiques pour les globules rouges.

Ainsi, les hématies des personnes ayant un déficit en G6PD produisent moins de NADPH et sont de ce fait beaucoup plus sensibles à l’hémolyse causée par un stress oxydatif dû à une infection, l’ingestion de fèves ou encore certains médicaments(Mura., et al,2009). Lors d’un stress oxydatif, chez un sujet déficient en G6PD, la présence de radicaux libres en excès provoque une accélération de la transformation de l’hémoglobine en méthémoglobine, des corps de Heinz se forment à partir des dérivés oxydés de l’hémoglobine, ils précipitent et se fixent à la membrane du globule rouge ; ces derniers sont fragilisés et éliminés lors du passage dans la rate (Wajcman et Galacteros, 2004).

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La manifestation clinique du déficit en G6PD chez l’adulte est l’hémolyse aiguë, dont l’intensité est variable d’un sujet à l’autre, pouvant être déclenchée par différents facteurs ayant une activité oxydante (Megarbane, 2008). La crise hémolytique peut être accompagnée de douleurs abdominales, fièvre et pâleur, céphalées, fatigue et parfois une anorexie inexpliquée, un ictère et parfois une hémoglobinurie.

Dans les formes typiques, l’hémolyse est modérée et survient un à trois jours suivant l’exposition au produit oxydant (parfois moins). Des tableaux cliniques sévères sont possibles et peuvent entrainer, entre autres, un état de choc (Megarbane, 2008). Cette anomalie enzymatique peut aussi être à l’origine de crises hémolytiques quelquefois mortelles chez les nouveaux né, les enfants ou même plus tard dans la vie adulte, ces crises pouvant être causées par la prise de certains médicaments ou par l’ingestion de fèves.

Les études ont montré que le processus d’hémolyse est en général bref et d’arrêt spontané chez les sujets noirs G6PD A- et seuls les globules rouges âgés sont détruits.

Le tableau clinique est, en revanche, plus sévère pour les sujets portant la variante méditerranéenne : l’hémolyse ne s’arrête pas spontanément et peut mener à une insuffisance rénale aiguë nécessitant une transfusion (Megarbane, 2008).

1.3 G6PD et les transaminases sériques

Les transaminases sont des enzymes présentes à l’intérieur des cellules, en particulier au niveau du foie et des muscles. Elles interviennent dans une multitude de réactions biologiques.

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On distingue deux types de transaminases : l’ASAT (aspartate aminotransférases), surtout présent dans le foie, les muscles, le cœur, les reins, et le pancréas ; et l’ALAT (alanine aminotransférases), relativement spécifiques du foie. Le dosage de ces enzymes est utilisé pour détecter un problème au niveau du foie. Leur augmentation dans le sang est due à une libération anormale par des cellules hépatiques endommagées, par exemple en raison d’une hépatite, d’une intoxication alcoolique ou médicamenteuse etc…

Cependant, ces deux types d’enzymes se retrouvent également en plus petite quantité au niveau d’autres tissus et organes de l’organisme comme le pancréas, les reins, les globules rouges. La destruction des cellules hépatiques entrainant celle des globules rouges contenue dans le foie, causerait une élévation du taux sanguin des transaminases principalement celui de l’ALAT.

Ainsi donc, le déficit en G6PD étant une maladie hémolytique, pourrait entrainer

une augmentation du taux sérique d’ALAT suite à une crise hémolytique.

Quelques enquêteurs ont rapporté que la plupart des nouveaux -nés déficient en G6PD ont développé une jaunisse exagérée dû à la carence de l’enzyme dans les cellules du foie. Par conséquent certains changements dans la fonction hépatique ont été signalés par plusieurs chercheurs suite à déficience en G6PD (Oluboyeda et al, 1979).

Dans leurs études, Ils ont trouvé un taux sérique d’ALAT élevé non significatif dans le groupe des déficients par rapport aux non déficients. Apres avoir examiné l’effet du déficit en G6PD sur la fonction hépatique chez les nouveaux nés, ils ont signalé que la diminution du niveau d’ALAT était associée au degré de déficience en enzyme G6PD. Des études presque similaires ont été rapportées par d’autres enquêteurs (Al-Omran et al, 1998).

(24)

DEUXIEME PARTIE : CADRES, MATERIEL ET METHODES

2.1.1 CADRE INSTITUTIONNEL

L’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi est issue du Collège Polytechnique Universitaire (CPU) qui avait été créé en février 1977 pour répondre à un besoin de formation technique au niveau de l’enseignement supérieur. A L’époque, la mission assignée au (CPU) est de former des techniciens supérieurs capables de satisfaire les attentes liées à l’objectif de développement économique de la nation.

Les évolutions de l’environnement notamment les progrès en matière technologique ont amené les autorités à engager des réformes en vue de prendre en compte ces avancées et faciliter l’actualisation des enseignements dispensés.

Dans ce cadre, la dénomination a été modifiée : le Collège Polytechnique Universitaire est devenu Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi. Les enseignements à l’EPAC sont organisés en deux secteurs : le Secteur Industriel et le Secteur Biologique.

Le Secteur Industriel comprend les départements de :

• Génie civil ;

• Génie Informatique et Télécommunications ;

• Génie Mécanique et Energétique ;

• Génie Electrique ;

• Génie Biomédical

• Génie Chimique et Procédés

Dans le Secteur Biologique on a les départements de :

• Génie de Biologie Humaine ;

• Génie d’Imagerie Médicale et de Radiologie ;

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• Génie de l’environnement ;

• Production et Santé Animales ;

• Génie de Technologie Alimentaire.

2.1.2 CADRE TECHNIQUE

Créé en 1959, le Centre Hospitalier Universitaire Départemental du Borgou- Alibori est situé dans la partie septentrionale du pays, à Parakou, chef-lieu du département du Borgou. Il faut attendre 1985, et plus précisément 1990 pour qu’il devienne Centre Hospitalier Universitaire Départemental du Borgou-Alibori selon le décret N°90-347 du 14/11/1990 portant statut des Centres Hospitaliers Départementaux et formations sanitaires assimilées. Implanté dans le quartier Banikanni, le CHUD-B/A est limité : au Nord par la circonscription scolaire de Parakou non loin de la place Bio-Guerra ; au Sud par la voie passant devant l’ancien poste du deuxième arrondissement ; à l’Est par la Direction Départementale de la santé et à l’Ouest par l’école Primaire publique la Montagne.

Il est composé d’une administration et de plusieurs services à savoir : la maternité, la chirurgie, la médecine, la pédiatrie, la pharmacie, la radiologie, le service social, la psychiatrie, l’ORL (Ortho Rhino Laryngologie), la stomatologie, les urgences, l’unité du diabète et de la dialyse, et un laboratoire d’analyse biomédicale multidisciplinaire (lieu de déroulement de notre stage).

Le Centre accomplit désormais trois missions essentielles qui sont : la mission de soins ; la mission de formation des étudiants et la mission de recherches.

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- Présentation du Laboratoire

Situé sur l’étage du bâtiment principal, le laboratoire du CHD/ B-A est composé d’une salle de garde, d’une salle de prélèvement et trois autres salles qui représentent les sections destinées aux manipulations. Les prélèvements se font tous les jours ouvrables de 8heures à 10heures et les analyses des échantillons commencent à partir de 10heures.

Les différentes sections du laboratoire:

 Section Biochimie où sont réalisées les examens tels que : la glycémie, l’urémie, l’acide urique, le cholestérol (Total et HDL), les triglycérides, magnésémie, créatinémie, calcémie, l’ionogramme, la protidémie, la gamma glutamyl transférase (GGT), la bilirubine totale et conjuguée, la phosphatase alcaline (PAL), les transaminases (ASAT et ALAT), ASLO, CRP,SDW et la biochimie du LCR ;

 Section Hématologie où s’effectuent les examens tels que : la Numération Formule Sanguine (NFS), la Vitesse de Sédimentation (VS), la GEDP (Goutte Epaisse + Densité Parasitaire) et la FSDP (Frottis Sanguin + Densité Parasitaire) ;

 Section de la Bactériologie où se font des examens tels que : l’ECBU, LCR, le spermogramme, l’ECBU+ATB, l’AKOP, la recherche des microfilaires et des œufs de schistosomes.

Le laboratoire ne dispose pas encore des sections de parasitologie et de sérologie digne du nom d’où la répartition des examens de parasitologie et de sérologie dans les autres sections installées. Les résultats sont disponibles à partir de 16heure. Pour les jours fériés et la garde, seuls les échantillons venant des différents services sont analysés. La permanence est assurée du lundi au vendredi, de 8heures à 16heures, et la garde de 15heures au lendemain 8heures.

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2.2 MATERIEL

Matériel pour le dosage

- Les différents dosages sont effectués sur un automate MINDRAY BS-200 et au spectrophotomètre

- Autres : centrifugeuse «ROTINA 380 », micropipettes, cônes, portoirs, incubateur, compresses, tubes à hémolyse, marqueurs, stylos, cahiers de paillasse ,bain-marie

- Réactifs « CROMATEX » : pour le dosage des transaminases, Le réactif ‘’CYPRESS’’ pour le dosage de la G6PD.

2.3 METHODE D’ETUDE Période et type d’étude :

Il s’agit d’une étude analytique et transversale menée du 21 aout au 04 septembre 2017.

Population d’étude et échantillons

La population d’étude est constituée des enfants âgés de 0 à1 mois et nés dans la ville de Parakou. Les échantillons seront constitués de sang prélevé sur tube EDTA.

Choix de la population d’étude -Critères d’inclusion

Seront inclus dans notre étude, les enfants âgés de 0 à 1 mois dont les parents ont donné un consentement éclairé pour y participer.

(28)

- Critère d’exclusion

Seront exclus de cette étude, les nouveaux- nés ayant bénéficié d’une transfusion sanguine et les enfants dont les parents n’auraient pas donné leurs consentements éclairés.

Phase pré-analytique

Les prélèvements sont faits les matins chez les enfants dans les centres de vaccination. Après une explication brève de l’étude, les enfants des mamans consentantes sont prélevés aseptiquement dans le respect des règles de biosécurité nécessaires.

Ensuite, les échantillons de sang sont transportés au laboratoire pour les manipulations.

Phase analytique

Dosage des transaminases

 Principe ASAT

L’aspartate amino transférase (ASAT) catalyse le transfert du groupement amine de l’aspartate sur l’oxoglutarate. Il se forme de l’oxaloacétate et du L- glutamate. L’oxaloacétate formé est réduit par le MDH en malate en présence du NADH. La vitesse de la réaction est proportionnelle à la vitesse de conversion du NADH en NAD+.

(29)

ALAT

L’alanine amino transférase (ALAT) catalyse le transfert du groupement amine de l’alanine sur l’oxoglutarate. Il se forme du pyruvate et du L-glutamate.

Le pyruvate formé est réduit par le LDH en lactate en présence du NADH.

La vitesse de la réaction est proportionnelle à la vitesse de conversion du NADH en NAD+.

 Mode opératoire

Les réactifs sont préparés au préalable à raison de 1ml de R1 + 4ml de R2. Le réactif préparé doit être amené et maintenu à 37°c. (valable pour l’ASAT et l’ALAT)

Blanc Dosage

Réactif …. 1000µl

Eau distillée 1000µl …..

Echantillon ….. 100µl

Dosage de la G6PD érythrocytaire

 Principe Son principe consiste à mesurer l'augmentation de l'absorption en ultra-

violet (340 nm) correspondant à l'apparition du NADPH formé lors de l'incubation de l'hémolysât en présence de la G6PD et de NADP+.

Glucose-6-phosphate + NADP+ 6-phospho-gluconate + NADPH + H^G6PD ⁺

(30)

Longueur d’onde 340nm

 Réactif du dosage de la G6PD

Réactif 1 (R1) : Triéthanolamine pH 7,6 31,7 mmol/L Tampon : EDTA 3,2 mmol/L Réactif 2 (R2) : NADP 0,34 mmol/L Réactif 3 (R3) : G-6-P (substrat) 0,58 mmol/L Réactif 4 (R4) : Digitonine

Préparation des réactifs et stabilité

Les réactifs R1 et R4 sont prêts à l’emploi et sont stables après ouverture à 2-8°C pendant 3 mois à l’abri de la lumière et des souillures. Les réactifs R2 et R3 sont reconstitués avec 2ml d’eau distillée dans chaque boîte. Ils sont stables à 2-8°C pendant 4 semaines.

 Mode opératoire

- Laver 200µl de sang avec des aliquotes de 2000µl d’une solution de NaCl à 0,9%

- Centrifuger après chaque lavage pendant 10minutes à environ 3000 tours/min

- Répéter trois fois

- Mettre en suspension les érythrocytes lavés centrifugés dans 500µl de R4 et laisser reposer pendant 15 minutes à 4⁰C et centrifuger à nouveau

- Utiliser le surnageant dans les dosages dans les 2 heures

(31)

Réactifs Echantillon

Hémolysat (globules rouges lavés) 15µl

R1 1000µl

R2 30µl

Mélanger, mettre à incubation pendant 5 minutes à 37^oC .Puis ajouter R3

R3 15µl

Mélanger ; lire l’absorbance initiale, démarrer le chrono et lire les absorbances toutes les minutes pendant 3 minutes.

Calculer les absorbances et les différences d’absorbance moyenne par minute (Δabs/min)

 Calcul de l’activité enzymatique

L’activité enzymatique de la G6PD s’exprime en U/gramme d’hémoglobine. D’après les formules suivantes :

33650 : Coefficient utilisé pour la longueur d’onde 340 nm

∆DO x 33650

x 10 = A (G6PD) en UI / g Hb Hb (g/dL)

(32)

Valeurs normales : 10,01 à 14,19 UI / g Hb

Phase post-analytique (Analyses statistiques)

Les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide du logiciel Excel de Microsoft Office 2013 et Stata. Les résultats sont présentés sous forme de Moyenne ± Erreur standard sur la moyenne (SEM) et les variations sont jugées significatives à partir de p<0,05 en utilisant le test t de Student.

(33)

Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page 20 51,56

48,44

SEXE

FILLES GARCONS

TROISIEME PARTIE : RESULTATS ET DISCUSSION

3.1 RESULTATS

Sur cette figure nous remarquons que la majorité des patients étaient des filles. (figure 3).

Figure 3 : Répartition des nouveau-nés en fonction du sexe

(34)

Age (jour)

[0-7[ [7 -14[ [14-21[ [21-30[

Effectif

0 5 10 15 20 25 30 35

Les Fons et les Bariba étaient les plus représentés au cours de cette étude.

(figure 4).

Figure 4 : Répartition des nouveau-nés en fonction de l'ethnie

La tranche d’âge la plus représentée était celle de 0-7jours (48,43%) ; et la moins représentée est celle de 21-30 jours (9,37%).(figure 5).

Figure 5 : Répartition des nouveau-nés en fonction de l’âge

26%

22%

16%

17%

19%

ETHNIE

FON BARIBA DENDI NAGOT AUTRE

(35)

Tableau I: Répartition du déficit en G6PD selon le sexe des nouveau-nés

Sexe Activité G6PD normale Déficit en G6PD Total

Effectif Proportion (%) Effectif Proportion (%)

Masculin 21 51.22 10 43.48 31

Féminin 20 48.78 13 56.52 33

Total 41 100 23 100 64

Sur les 64 nouveau-nés inclus dans l’étude, 31 sont des garçons et 33 sont des filles. Au total, 23 de ces nouveau-nés (35,94%) sont déficients en G6PD, dont 10 garçons (43,48% des déficients) et 13 filles (56,52% des déficients).

L’analyse de cette figure nous montre que 33,33% de sexe masculin et 38,23% de sexe féminin dans la population sont déficitaires. Au total 23 sujets sur les 64inclus sont déficitaires soit un pourcentage de 35,94% de nouveau-nés déficitaires dans notre échantillon d’étude. (Figure 6).

Figure 6 : Répartition des sujets déficitaires en fonction du sexe

13

10

21 20

0 5 10 15 20 25

FEMININ MASCULIN

DEFICITAIRE NON DEFICITAIRE

(36)

Tableau II : Valeurs moyennes de l'activité enzymatique de la G6PD en fonction du sexe

L’activité moyenne de la G6PD chez les nouveau-nés est de 9,88 ± 4,45 U/g Hb. Les résultats de la G6PD s’expriment en mU/10⁹ GR et en UI/g Hb mais nous avons choisi de travailler avec cette dernière unité.

Activité

G6PD Filles Garçons Total

n=33 n=31 n=64

m ± s m ± s m ± s

G6PD

(U/g Hb) 9.92 ± 4,15 9,54 ± 5,51 9,88 ± 5,03

m = moyenne s = écart-type n = effectif

(37)

Cette figure nous montre en moyenne que l’activité de la G6PD est de 9,54 chez les sexes masculins contre 9,92 chez les sexes féminins. (figure 7).

Figure 7 : Moyenne de l'activité G6PD en fonction du sexe

9,54

9,92

9,3 9,4 9,5 9,6 9,7 9,8 9,9 10

GARCONS FILLES

MOYENNE

(38)

L’analyse de cette figure nous montre que 15,63% de sexe masculin sont déficitaires hémizygote et 0% sont déficitaires homozygotes. Par ailleurs 6,25%

de sexe féminin sont déficitaires hémizygotes et 14,06% déficitaires homozygotes. (Figure 8).

Figure 8 : Répartition des sujets déficitaires selon le type de déficit

0,00%

5,00%

10,00%

15,00%

20,00%

25,00%

30,00%

35,00%

GARCONS FILLES

DEFICITAIRE HEMIZYGOTE DEFICITAIRE HOMOZYGOTE NORMAUX HEMIZYGOTE NORMAUX HOMOZYGOTE

(39)

Sur cette figure nous constatons une augmentation générale du taux d’ALAT par rapport au taux d’ASAT. Cependant on ne note aucune variation des transaminases selon le sexe. (figure 9).

Figure 9 : Répartition des taux de transaminases en fonction du sexe

(40)

L’analyse de cette figure nous montre que chez les sujets masculins le taux des transaminases ne varie pas chez les déficitaires par rapport aux normaux. Le même constat a été fait chez les sujets féminins par rapport aux transaminases ALAT. Par contre notons une augmentation significative de l’ASAT chez les sujets homozygotes par rapport aux sujets déficitaires hémizygote et normaux féminins. (figure 10).

Figure 10 : Répartition du taux de transaminases en fonction du type de déficit et du sexe

(41)

Réalisé par Charmaine Eudoxie J.S. AGBADJAGAN Page 28 [0-7[ [7 -14[ [14-21[ [21-30[

G6PD (UI/g Hb)

0 5 10 15

20 Normal

Déficient





Cette figure démontre que le déficit en G6PD est plus accentué chez les nouveaux- nés de 07 jours et plus. (Figure 11).

Figure 11 : Variation du déficit en fonction l’âge

3.2 COMMENTAIRE

Dans la présente étude, les taux sérique d’ALAT et d’ASAT ont été mesurés pour évaluer l’état de la fonction hépatique chez les nouveau-nés déficients en G6PD. L’étude a été faite au total sur 64 bébés dont : 31 garçons et 33filles. Le sexe féminin était majoritaire dans notre étude avec une fréquence de 51,56%, contre 48,44% de sexe masculin. Les ethnies les plus représentées sont les Fons et les Bariba avec respectivement 26,56%, et 21,88%. Le déficit en G6PD était observé chez environ 35,94% des nouveau-nés.

(42)

Les résultats de notre étude ont révélé une moyenne de 9,88 ± 4,45 U/g Hb dans la population étudiée.

Il n’y a pas de différence significative entre le taux de l’activité de la G6PD chez les filles comparé aux garçons. La moyenne de l’activité de la G6PD trouvée dans notre étude est inférieure à celle rapportée par Youl (2004) qui est de 24,72 ± 11,87 U/g Hb dans une étude réalisée à Ouagadougou. Cette différence pourrait s’expliquer par la taille de l’échantillon moins importante dans notre étude (64 contre 308). A l’opposée, la fréquence du déficit de la G6PD trouvé dans notre étude est supérieure à celle rapportée par Mouélé en 1999 au Congo Brazzaville (Mouélé et Galacteros, 1999) avec une fréquence de 22,2%. Cette différence pourrait s’expliquer par le fait que leurs prélèvements ont été faits sur du sang de cordon ombilical ou le coffret de réactif utilisé.

Les transaminases ASAT et ALAT sont des indicateurs de la cytolyse hépatique. Le taux sérique des deux enzymes augmente dans diverses pathologies hépatiques.

Le taux d’ASAT est augmenté chez les nouveau-nés souffrant de troubles hépatiques non traités (Rosenthal, 1990) tandis que celui de la baisse de rapport ASAT/ALAT est prédictive d’une meilleur santé hépatique (Rosenthal, 1990).

Dans notre étude, nous avons montré que le taux de l’ASAT est significativement augmenté chez les nouveau – nés de sexe féminin déficitaires comparé aux sujets hémizygotes et normaux. Ce résultat suggère l’existence probable de trouble du fonctionnement hépatique chez les nouveau-nés déficitaires en G6PD. Le faite que le déficit est plus prononcé chez les nouveau – nés plus âgés signifie qu’une attention particulière doit être accordée au suivi des nouveau- nés déficitaires en G6PD.

(43)

CONCLUSION

Nous avons montré que les nouveau-nés reçus au Centre Hospitalier Départemental BORGOU-ALIBORI sont affligés par le déficit en G6PD dans une proportion de 15,63% chez les garçons et 20,31% chez les filles. Les résultats de l’étude ont conclu qu’un niveau plus élevé de l’ASAT sériques est remarqué chez les déficitaires homozygotes de sexe féminin contrairement aux sujets hémizygotes et normaux.

(44)

SUGGESTION

Au terme de cette étude, vu les résultats obtenus et les difficultés rencontrées dans l’obtention de ces résultats nous formulons les suggestions suivantes :

 A l’endroit de l’EPAC : nous souhaitons que des recherches similaires soient effectuées dans d’autres cadres lors des années à venir afin de vérifier les résultats obtenus et de constituer une base de données pour des études plus avancées.

 A l’endroit des autorités du ministère de la santé publique : nous apprécierons la mise en œuvre de projets d’étude sur le plan national afin de définir la prévalence du déficit en G6PD et de ces variantes dans notre population.

 A l’endroit du CHUD-B /A : nous recommandons aux médecins pédiatres de procéder au dépistage du déficit en G6PD chez les nouveau-nés en particulier ceux présentant un ictère.

(45)

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