hapitre 2͘ Zƀle de l͛inŇammasome au cours de la progression tumorale mammaire
C. Yuel facteur, régulé par l͛inŇammasome, faǀorise la progression tumorale mammaire ͍
Si l͛absence des composants de l͛inŇammasome favorise la progression tumorale mam-maire dans notre étude͕ nous n͛avons pas pu meƩre en évidence son rƀle dans la sécréƟon de cLJtoŬines dans le microenvironnement͘ n eīet͕ l͛/>-1ɴ et l͛/>-18 étant sLJnthéƟsées sous la forme de précurseurs inacƟfs͕ il est nécessaire d͛avoir des techniƋues permeƩant de disƟnguer les deudž formes (acƟves et inacƟvesͿ des cLJtoŬines͘ >es tests >/S uƟlisables sur les surnageants de tu-meurs au laboratoire ne permeƩent pas de disƟnguer ces deudž formes de protéine et donc de connaŠtre l͛état d͛acƟvaƟon de ces deudž cLJtoŬines dans le microenvironnement des tumeurs 4d1͘
a. L͛IL-1ɴ faǀorise-t-elle la croissance tumorale des cellules 4T1 en présence de la caspase-1 ͍
ans le contedžte du cancer du sein͕ l͛/>-1ɴ est régulièrement associée à des rƀles pro-tu-moraudž͘ onsidérée comme un facteur de mauvais pronosƟc lorsƋu͛elle est fortement edžprimée dans diīérents tLJpes de cancers (>eǁis et al͕͘ 2ϬϬϲͿ͕ de nombreuses études montrent Ƌue l͛uƟli-saƟon de l͛antagoniste du récepteur de l͛/>-1 permet de réduire l͛appariƟon de métastases dans diīérents modèles de tumeurs murines (hirivi et al͕͘ 1993͖ lŬabets et al͕͘ 2Ϭ1Ϭ͖ sidal-sanaclo-cha et al͕͘ 1994Ϳ͘
>es résultats obtenus lors de nos edžpériences laissent également entrevoir un rƀle de l͛/>-1ɴ dans la croissance tumorale mammaire͘ Wlus précisément͕ l͛/>-1ɴ sécrétée par les cellules immunitaires présentes dans le microenvironnement tumorale pourrait favoriser la croissance des cellules tumorales par de nombreudž mécanismes tels Ƌue l͛angiogenèse ou la sécréƟon de cLJtoŬines͘ n 2Ϭ1Ϭ͕ une étude de M͘ lŬabets montre Ƌue la présence d͛/>-1ɴ au sein de tumeurs mammaires provoƋue l͛accumulaƟon de progéniteurs mLJéloŢdes͕ considérés comme des MS͕ dans le microenvironnement tumoral ( lŬabets et al͕͘ 2Ϭ1ϬͿ͘ n concordance avec ces résultats͕
Figure 15 ͗ L͛inũecƟon d͛Anakinra n͛inŇue pas la croissance des cellules tumorales 4T1
Suivi de la croissance des cellules 4d1 inũectées dans la glande mammaire de souris td ou caspase-1 <K traitées avec la forme recombinante de l͛/>-1Za (naŬinraͿ ou du WS (WSͿ͘ MoLJenne et déviaƟon stan-dard͘ ΎpфϬ͕Ϭ5 (dest staƟsƟƋue non paramètriƋue de Mann-thitneLJͿ͕ n͘s͘ с non signiĮcaƟf
13Ϭ
-notre étude du microenvironnement tumoral dans des souris caspase-1͕ ASC et NLRP3 <K montre une diminuƟon du recrutement de cellules >LJϲ' posiƟves͕ considéré comme un marƋueur des MS͘ Wourtant͕ comme nous l͛avons vu auparavant͕ ceƩe diminuƟon n͛est pas suĸsante pour réduire la croissance des cellules 4d1͘
Įn de déĮniƟvement démontrer le rƀle de l͛/>-1ɴ dans notre modèle͕ nous avons tenté d͛étudier la croissance des cellules tumorales 4d1 au sein de souris traitées avec l͛antagoniste du récepteur de l͛/>-1 (/>-1Za͕ naŬinraͿ͘ >es inũecƟons répétées (tous les 2 ũoursͿ de l͛/>-1Za n͛ont pas eu d͛eīet signiĮcaƟf sur la croissance des cellules 4d1 (&igure 15Ϳ͘ ependant͕ le métabolisme de l͛/>-1Za au sein des souris étant très rapide͕ il est possible Ƌue l͛absence d͛eīet soit due à une ineĸcacité de notre traitement sur l͛inhibiƟon de l͛/>-1͘
Wour conclure déĮniƟvement sur le rƀle de l͛/>-1ɴ dans notre modèle͕ nous étudierons la croissance des cellules 4d1 dans des souris />-1Z-déĮcientes ou traitées avec des anƟcorps blo-Ƌuant de l͛/>-1ɴ͘
b. Un rƀle pour l͛IL-1ϴ dans la progression tumorale mammaire ͍
Kutre l͛/>-1ɴ͕ le compledže de l͛inŇammasome régule également l͛acƟvité de l͛/>-18͕ une autre cLJtoŬine pro-inŇammatoire͘ omme pour l͛/>-1ɴ͕ nos résultats suggèrent Ƌu͛une diminu-Ɵon de sécrédiminu-Ɵon de l͛/>-18 dans le microenvironnement tumoral permet un meilleur contrƀle de la croissance des cellules 4d1͘ Wour le déterminer͕ nous souhaitons meƩre en place des tests de croissances de cellules 4d1 au sein de souris traitées avec l͛/>-18 inding Wrotein (/>-18WͿ͕ un inhibiteur naturel de l͛/>-18͘
͛abord considérée comme une cLJtoŬine anƟ-tumorale via son acƟon sur les cellules E< et la producƟon d͛/&E-ɶ͕ le rƀle de l͛/>-18 dans le cancer est auũourd͛hui plus contrasté͘ e nom-breuses études montrent Ƌue l͛/>-18 protège contre l͛appariƟon de tumeurs dans des modèles murins de tumeurs induites par des carcinogènes͘ e plus͕ par rapport audž souris td͕ les souris E>ZW3͕ S ou caspase-1 déĮcientes sont plus sensibles audž carcinogènes et l͛inũecƟon d͛/>-18 recombinante permet de réduire l͛appariƟon de tumeurs dans ces souris démontrant Ƌue le rƀle de l͛/>-18 est͕ dans ce cas͕ médié par l͛inŇammasome (Salcedo et al͕͘ 2Ϭ1Ϭ͖ aŬi et al͕͘ 2Ϭ1ϬͿ͘ sia l͛acƟvaƟon des cellules E<͕ l͛/>-18 protège de l͛appariƟon de métastase dans un modèle métasta-ƟƋue de mélanome (Eishio et al͕͘ 2ϬϬ8Ϳ͘
ependant͕ l͛/>-18 peut͕ comme l͛/>-1ɴ͕ favoriser le recrutement de cellules mLJéloŢdes suppressives͕ capable d͛inhiber l͛acƟvité cLJtotodžiƋue des cellules d 8 in vitro͕ au sein de tu-meurs sous-cutannées (>im et al͕͘ 2Ϭ14Ϳ͘ e plus͕ dans un contedžte d͛appariƟon de métastase hépaƟƋue͕ l͛/>-18 favorise l͛edžpression de molécules d͛adhésion͕ telles Ƌue sM1͕ par les cel-lules endothéliales et parƟcipe à l͛appariƟon de métastases (sidal-sanaclocha et al͕͘ 2ϬϬϬͿ͘ nĮn͕ comme nous l͛avons vu auparavant͕ l͛/>-18 induit l͛edžpression de W-1 à la surface des cellules E<
provoƋuant une baisse de leur acƟvité anƟ-tumorale (derme et al͕͘ 2Ϭ11Ϳ͘ Kn peut imaginer un mécanisme selon leƋuel la sécréƟon d͛/>-18͕ médiée par l͛inŇammasome͕ inhibe l͛acƟvité cLJto-todžiƋue des E< via une suredžpression de W-1͘ eƩe hLJpothèse peut ġtre simplement testée via l͛analLJse de W-1 à la surface des cellules E< par cLJtométrie en Ňudž dans les diīérents génotLJpes de souris͘
c. Un rƀle pour d͛autres cytokines et mécanismes régulés par l͛inŇammasome ͍ Kutre la caspase-1͕ l͛/>-1ɴ et l͛/>-18 peuvent également ġtre clivées par d͛autres protéases dans le microenvironnement (oeshoƩ et al͘ 1999͕ Sugaǁara S et al͘ 1999͕ inarello 2ϬϬ9Ϳ͘ Si on écarte un rƀle de l͛/>-1ɴ et de l͛/>-18 dans notre modèle͕ on peut se pencher alors sur les autres foncƟons connues de la caspase-1 comme le clivage de l͛/>-33 ou la pLJroptose͘
Weu étudiée dans le cadre du cancer͕ la pLJroptose est une mort cellulaire inŇammatoire permeƩant l͛éliminaƟon de pathogènes (Jorgensen and Miao͕ 2Ϭ15Ϳ͘ lle survient en réponse à l͛acƟvaƟon de l͛inŇammasome et de la caspase-1 et provoƋue la libéraƟon de nombreudž fac-teurs pro-inŇammatoires comme des cLJtoŬines et chimioŬines mais également de MWs tels Ƌue l͛dW ou ,M'1 (/noue and dani͕ 2Ϭ14Ϳ͘ ans un contedžte de tumeurs induites par carcino-gènes͕ la pLJroptose͕ provoƋuée par l͛acƟvaƟon de divers inŇammasomes͕ permeƩrait d͛induire une mort cellulaire autonome et une inŇammaƟon favorisant le retour à l͛homéostasie Ɵssulaire (llen et al͕͘ 2Ϭ1Ϭ͖ linav et al͕͘ 2Ϭ11b͖ ,u et al͕͘ 2Ϭ1ϬͿ͘ es études prġtent donc un rƀle anƟ-tu-moral à la pLJroptose͘ Wourtant͕ le contedžte inŇammatoire créé par ce tLJpe de mort cellulaire est considéré comme un phénomène favorisant la croissance tumorale͘ >e rƀle de la pLJroptose dans la croissance tumorale est donc peut-ġtre lié audž cellules Ƌui meurent par ce mécanisme͘ ͛un cƀté͕ la mort autonome par pLJroptose des cellules anormales peut-ġtre salvatrice et induire une réponse immunitaire anƟ-tumorale͘ ͛un autre cƀté͕ dans notre modèle͕ la mort par pLJroptose de cellules immunitaires aLJant détectées des MWs présents dans le microenvironnement pour-rait ġtre délétère et favoriser la croissance des cellules tumorales͘
>͛/>-33 est une cLJtoŬine pro-inŇammatoire dont le clivage par la caspase-1͕ contrairement à l͛/>-1ɴ et l͛/>-18͕ conduit à son inhibiƟon (aLJrol and 'irard͕ 2ϬϬ9Ϳ͘ ans le cancer͕ le rƀle de l͛/>-33 est encore mal compris͕ tantƀt pro-tumoral͕ tantƀt anƟ-tumoral (>u et al͕͘ 2Ϭ1ϲͿ͘ epen-dant͕ il est intéressant de noter Ƌue son récepteur Sd2 est edžprimé à la surface des cellules E< (ourgeois et al͕͘ 2ϬϬ9Ϳ et Ƌu͛il induit leur acƟvaƟon et leur proliféraƟon en présence d͛/>-33 ('ao et al͕͘ 2Ϭ13͖ EabeŬura et al͕͘ 2Ϭ15Ϳ͘ e plus͕ l͛edžpression transgéniƋue ou l͛inũecƟon d͛/>-33 recombinante réduit l͛appariƟon de métastases dans des modèles d͛inũecƟons de cellules issues de mélanomes ou de carcinomes pulmonaires notamment via l͛acƟvaƟon des cellules E< ('ao et al͕͘ 2Ϭ13Ϳ͘ ans notre étude͕ l͛absence de la caspase-1 ou de S pourrait favoriser la sécréƟon d͛/>-33 acƟve et non clivée͕ favorisant ainsi la proliféraƟon des cellules E< et sƟmulant leur
acƟ 132 acƟ -vité anƟ-tumorale͘
D. Un rƀle de l͛inŇammasome dépendant ou indépendant du modèle 4T1 ͍
>es cellules 4d1 sont un modèle de tumeur proche des cancers triple négaƟfs͕ basal-liŬe͕ de haut grade chenj l͛humain (Mi et al͕͘ 2ϬϬ4͖ WulasŬi and Kstrand-Zosenberg͕ 1998Ϳ͘ >eur dépen-dance vis-à-vis de certaines cellules immunitaires et du microenvironnement inŇammatoire pour se développer nous a fortement encouragé à les uƟliser pour en faire notre modèle d͛étude prin-cipal͘ ien entendu͕ nous avons envisagé l͛uƟlisaƟon d͛autres modèles de tumeurs aĮn de pou-voir élargir le rƀle de l͛inŇammasome à un contrƀle global de la croissance tumorale mammaire͘ >es cellules ϲ7EZ partagent la mġme origine Ƌue les cellules 4d1 et sont donc également des cellules tumorales isolées d͛une tumeur spontanée de la glande mammaire de souris >ͬ cf3, (Miller et al͕͘ 1983Ϳ͘ ien Ƌue la croissance des cellules ϲ7EZ in vivo soit semblable à celle des 4d1͕ les ϲ7EZ ne ƋuiƩent pas le site de la tumeur primaire et n͛ont pas la capacité de former des métastases (slaŬson and Miller͕ 1992Ϳ͘ Eous envisageons donc d͛étudier la croissance des cellules ϲ7EZ dans les souris ASC et caspase-1 <K pour déterminer le rƀle de l͛inŇammasome dans leur croissance͘Įn de changer également de fond généƟƋue de souris͕ nous avons étudié la croissance des cellules K771͕ une lignée d͛adénocarcinome mammaire de souris 57>ͬϲ (S z et al͕͘ 1951Ϳ dans les souris 57>ͬϲ͘ /nũectées dans la glande mammaire de souris 57>ͬϲ͕ les cellules K771 provoƋuent l͛appariƟon de tumeurs de hauts grades comme les cellules 4d1 ou ϲ7EZ du fond >ͬc (Johnstone et al͕͘ 2Ϭ15Ϳ͘ >es résultats préliminaires obtenus avec ce modèle n͛ont pas permis de meƩre en évidence un rƀle pour la caspase-1 dans la croissance tumorale au sein de souris td ou caspase-1 déĮcientes (&igure 1ϲͿ͘ ependant͕ le protocole d͛inũecƟon des cellules K771 doit ġtre aĸné aĮn d͛obtenir des croissances tumorales similaires au sein des groupes de souris͘ n eīet͕ malgré l͛uƟlisaƟon de protocoles issus de la liƩérature͕ nous avons obtenus une grande disparité de croissance au sein de souris d͛un mġme groupe suggérant Ƌue nos condiƟons d͛inũecƟon sont inadéƋuates͘