Chapitre 3 : Le rôle et les tâches des agents d’intervention au CJM-IU
3.4 L’agent d’intervention, un modèle masculin
3.5.3 Les tâches des agents d’intervention
Levando-se em conta que a fase fundo pode, em situações diferentes, comportar-se das formas mais diversas, seja como puramente líquida, sólida ou ainda uma mistura das duas (cuja análise mostra-se a mais difícil); foi considerada a fase topo para fins de análise das atividades.
As figuras 9, 10, 11 e 12 mostram as composições de BSA e PEG em sistemas contendo PEG 2000, 4000, 6000 e 10000 respectivamente. Os pontos representados por círculos referem-se ao ELL, losangos referem-se ao ESLL e quadrados ao ELS. Os pontos cuja cor de preenchimento seja branca, cinza ou preta referem-se aos sistemas de pH 4,0, 5,0 ou 6,0 respectivamente.
Em cada figura apresentam-se ainda três curvas de atividade constante, para fins ilustrativos. Os valores são -1700, -1600 e -1500, representados pelas linhas cheia, tracejada e pontilhada. Pode-se inferir sobre a variação nos valores de atividade para cada sistema considerado observando-se a variação entre as curvas de atividade constante que servem como guias.
Para fins de modelagem, sabe-se que os fatores que irão modular a diferença entre o tamanho médio de cadeia polimérica apresentado pelos PEG´s estudados serão os parâmetros de interação ?. Nos gráficos apresentados a seguir considerou-se que tais parâmetros são constantes independentemente do tipo de PEG empregado. Na prática estes valores serão diferentes, já que efeitos como o volume de exclusão ou interferência dos grupos hidroxila terminais regem os
valores dos parâmetros de interação com maior ou menor influência para diferentes tipos de PEG. Entretanto, para a análise qualitativa apresentada, é importante apenas a forma topológica das curvas de isoatividade.
Como estratégia de cálculo para os parâmetros de interação ? sugere-se a igualdade de atividades apresentadas por sólidos formados no ELS, pois a natureza destes precipitados é a mesma, bem como a sua composição (hipótese da proteína pura). Fixando-se o valor de atividade é possível calcular os parâmetros de interação por meio da equação de Flory-Huggins.
0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 ??PEG BSA
Figura 11. Curvas de isoatividade (-1700 linha cheia, -1600 linha tracejada e –1500 linha pontilhada) e dados experimentais sobre as concentrações mássicas de PEG e BSA na fase topo
0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 ? ?PEG ?? BSA
Figura 12. Curvas de isoatividade (-1700 linha cheia, -1600 linha tracejada e –1500 linha pontilhada) e dados experimentais sobre as concentrações mássicas de PEG e BSA na fase topo
0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 ??PEG BSA
Figura 13. Curvas de isoatividade (-1700 linha cheia, -1600 linha tracejada e –1500 linha pontilhada) e dados experimentais sobre as concentrações mássicas de PEG e BSA na fase topo
0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 ? PEG ?? BSA
Figura 14. Curvas de isoatividade (-1700 linha cheia, -1600 linha tracejada e –1500 linha pontilhada) e dados experimentais sobre as concentrações mássicas de PEG e BSA na fase topo
para PEG 10000 em pH 4,0 (branco), 5,0 (cinza) e 6,0 (preto) a 25ºC
Como discutido anteriormente, há a tendência geral de uma quantidade inicial maior de PEG 2000 ser necessária a fim de se obter a formação de fases em relação às demais moléculas de PEG. Tal fato deve-se ao efeito dos grupos hidroxila terminais das moléculas de PEG, responsáveis pelo aumento da energia necessária à formação de fases. Isto se reflete não apenas na quantidade inicial maior de PEG 2000, mas também em um deslocamento dos pontos referentes para atividades maiores da que aquelas apresentadas pelas outras moléculas de PEG, independentemente dos valores de pH. Além disso, os pontos referentes ao ELS situam-se em regiões de atividade mais alta. Isso é condizente com o fato que, dependendo das condições do
sistema, uma separação de fase sólida é obstada pela formação de uma segunda fase líquida, que ocorre em concentrações menores e valores menores de atividade.
7 Conclusões
Foram estudados sistemas aquosos contendo BSA e diferentes tipos PEG (2000, 4000, 6000 e 10000) em diferentes valores de pH (4,0, 5,0 e 6,0). Os dados experimentais mostraram que o equilíbrio formado pode ser ELL ou ELS, dependendo das condições. Por meio de simulações a partir da equação de Flory-Huggins, em conjunto com a análise dos dados experimentais obtidos, conclui-se que o tamanho médio da cadeia polimérica possui um papel importante na formação do equilíbrio de fases. Sugere-se que o efeito de maior destaque seja a influência dos grupos hidroxila terminais das moléculas de PEG – quanto menor for o PEG maior será a influência destes grupos sobre as moléculas água que fazem parte da camada de hidratação presente na superfície da molécula de BSA, acarretando na alteração do parâmetro de interação
?BSA-H2O (analogamente ao efeito gerado pelos sais cosmotrópicos), o que por sua vez é responsável pela proteína em solução atingir um determinado valor de atividade com maior facilidade, promovendo a formação de fases.
A equação de Flory-Huggins não sustenta a idéia de que o efeito principal responsável pela diferença na formação de fases em sistemas aquosos contendo proteína e polímeros de diversos tamanhos de cadeia (cuja estrutura permite a interação de grupos funcionais) seja o volume de exclusão.
8 Sugestões para trabalhos futuros
Estudos com outras proteínas se fazem necessários, principalmente aquelas de interesse econômico ou clínico, a saber: anticorpos, enzimas (lisozima, álcool desidrogenase) e proteínas estruturais (?-cristalina). Além do mais, variações em relação ao tipo do tipo de polímero também devem ser exploradas, e sais também dever ser investigados. É possível citar os exemplos do carbamato de amônio e do sulfato de sódio para os sais e da dextrana para o polímero.
Referências Bibliográficas
ANDERSON, V.J.; LEKKERKERKER, H.N.W. Insights into phase transition kinetics from colloid science. Nature, n.416, p.811-815, 2002.
ANDREWS, B.A.; SCHMIDT, A.S.; ASENJO, J.A. Correlation for the Partition Behaviour of Proteins in Aqueous Two-Phase Systems: Effect of Surface Hydrophobicity and Charge. Biotechnology and Engineering, v.90, p.380-390, 2005.
ASAKURA, S.; OOSAWA, F. Interaction Between Particles Suspended in Solutions of Macromolecules. Journal of Polymer Science, v.33, 183, 1958.
BONNETÈ, F.; VIVARÈS, D. Interest of the normalizad second virial coefficient and interaction potentials for crystallizing large macromolecules. Acta Crystallographica, v.D58, p.1571-1575, 2002.
BRADFORD, M.M. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry n.72, p.248-254, 1976.
CABEZAS, H. Theory of phase formation in aqueous two-phase systems. Journal of Chromatography, v.B680, p.3-30, 1996.
COHN, E.J.; STRONG, L.E.; HUGHES JR , W.L.; MULFORD, D.J.; ASHWORTH, J.N.; MELIN, M.; TAYLOR, H.L. Preparation and properties of serum and plasma proteins. IV. A system for the separation into fractions of the protein and lipoprotein components of biological tissue and fluids. Journal of the American Chemical Society, v.68, p.459-475, 1946.
CSL Ltd., Victoria, Australia New chromatographic albumin facility largest in the world. Downstream, v.21, p.3-4, 1996.
CURTIS, R.A.; LUE, L. A Molecular approach to bioseparations: Protein-protein and protein-salt interactions. Chemical Engineering Science, v.61, p.970-923, 2006.
CURTIS, R.A.; NEWMAN, J.; BLANCH, H.W.; PRAUSNITZ, J.M. McMillan-Mayer solution thermodynamics for a protein in a mixed solvent. Fluid Phase Equilibria, v.192, p.131-153, 2001.
EDMOND, E.; OGSTON, A.G. An approach to the study of phase separation in ternary aqueous systems. Biochemical Journal, v.109, p.569, 1968.
FORNASIERO, F.; ULRICH, J.; PRAUSNITZ, J.M. Molecular Thermodynamics of Precipitation. Chemical Engineering and Processing, v.38, p.463-475, 1999.
GRIGSBY, J.J.; BLANCH, H.W.; PRAUSNITZ, J.M. Effect of secondary structure on the potencial of mean force for poly-L-lysine in the ?-helix and ?-sheet conformations. Biophysical Chemistry, v.99, p.107-116, 2002.
GROSSMANN, C.; TINTINGER, R.; ZHU, J.; MAURER, G. Aqueous two-phase systems of poly(ethylene glycol) and dextran – experimental results and modeling of thermodynamic properties. Fluid Phase Equilibria, v.106, p.111-138, 1994.
GUAN, Y.; LILLEY, T.H. Theory of Phase Equilibria for Multicomponent Aqueous Solutions: Applications to Aqueous Polymer Two-phase Systems. Journal of Chemical Society - Faraday Transactions, n.89, v.24, p.4283-4298, 1993.
GUO, R.; GUO, M.; NARSIMHAN, G. Thermodynamics of Precipitation of Globular Proteins by Nonionic Polymers. Industrial Engineering Chemistry Research, v.35, p.3015-3026, 1996.
HANSSON, H.; KÅGEDAL, L. Adsorption and Desorption of Proteins in Metal Chelate Affinity Chromatography. Journal of Chromatography. v.215, p.333-339, 1981.
JANSON, J.C.; RYDÉN, L. Protein Purification. Principles, High Resolution Methods, and Applications. 1.ed, VCH Publishers Inc., 1989.
JIANG, J.; PRAUSNITZ, J.M. Molecular Thermodynamics for Partitioning of Native and Denatured Proteins in Aqueous Two-Phase Systems. Journal of Physical Chemistry, v.104, p.7197-7205, 2000.
KENDALL, F.E. Studies on Human Serum Proteins. II. Crystallization of Human Serum Albumin. Journal of Biological Chemistry. v.138, p.97, 1941
KIEFFER, T.L.; SARRAZIN, C.; MILLER, J.S.; WELKER, M.W.; FORESTIER, N.; REESINK, H.W.; KWONG, A.D.; ZEUZEM, S. Telaprevir and pegylated interferon-alpha- 2a inhibit wild-type and resistant genotype 1 hepatitis C virus replication in patients. Hepatology, v.46, n.3, p.631-639, 2007.
KIM, S.G.; BAE, Y.C. Salt-Induced Protein Precipitation in Aqueous Solution: Single and Binary Protein Systems. Macromolecular Research, v.11, n.1, p.53-61, 2003.
LADISCH, M.R. Bioseparations Engineering: Principles, Practice, and Economics. 1.ed, Canada, John Wiley & Sons, 2001.
LUE, L.; BLANKSCHTEIN, D. A Liquid-State Theory Approach to Modeling Solute Partitioning in Phase-Separated Solutions. Industrial and Engineering Chemistry Research, v.35, p.3032-3043, 1996.
MAHADEVAN, H.; HALL, C.K. Theory of Precipitation of Protein Mixtures by Nonionic Polymer. AIChE Journal, v.38, p.573, 1992.
McMEEKIN, T.L. Serum Albumin. I. The Preparation and Properties of Crystalline Horse Serum Albumin of Constant Solubility. Journal of Chemical Society. v.61, p.2884, 1939.
MELANDER, H.; HORVATH, C. Salt effect on hydrophobic interactions in precipitation and chromatography of proteins: An interpretation of the lyotropic series. Arch. Biochem. Biophys., n.183, p.200-215, 1977.
MOON, Y.U; CURTIS, R.A.; ANDERSON, C.O.; BLANCH, H.W.; PRAUSNITZ, J.M. Protein-protein Interactions in Aqueous Ammonium Sulfate Solutions. Lysozyme and Bovine Serum Albumin (BSA). Journal of Solution Chemistry, v.29, p.699-717, 2000.
MUSCHOL, M.; ROSENBERGER, F. Liquid-liquid phase separation in supersaturated lysozyme solutions and associated precipitate formation/crystallization. Journal of Chemical Physics, n.107, v.2, p.1953-1962, 1997.
NEURATH, H.; BAILEY, K. The proteins – Chemistry, Biological Activity, and Methods. Volume II, Part B. 1.ed, Academic Press Inc., New York, 1954.
PEARSE, A.G.E. Histochemistry, Theoretical and Applied: Preparative and Optical technology. 4.ed, Vol.1. Edinburgh, Churchill Livingstone 1980.
PESSOA JÚNIOR, A.; KILIKIAN, B.V. Purificação de Produtos Biotecnológicos. 1.ed. Barueri, SP: Manole, 2005, p988.
PETSEV, D.N.; WU, X.; GALKIN, O.; VEKILOV, P.G. Thermodynamic Functions of Concentrated Protein Solutions from Phase Equilibria. Journal of Physical Chemistry, v.107, p.3921-3926, 2003.
POPOVA, E.; WATANABE, E.O; PESSOA FILHO, P.A; MAURER, G. Phase equilibria for salt-induced lysozyme precipitation: Effect of salt concentration and pH. Chemical Engineering and Processing, 2007. doi:10.1016/j.cep.2007.02.005
PRAUSNITZ, J.M. Molecular thermodynamics for some applications in biotechnology. Journal of Chemical Thermodynamics, v.35, p21-39, 2003.
PRZYBYCIEN, T.M.; BAILEY, J.E. Solubility-activity relationship in the inorganic salt- induced precipitation of a-chymotrypsin. Enzimes Microbiology Technology, v.11, p.264, 1989.
PRZYBYCIEN, T.M. Protein-protein interactions as a means of purification. Current Opinion in Biotechnology, v.9, p.164-170, 1998.
PRZYBYCIEN, T.M.; PUJAR, N.S.; STEELE, L.M. (2004) Alternative bioseparation operations: life beyond packed-bed chromatography. Current Opinion in Biotechnology, v.15, p.469-478, 2004.
PUTMAN, F.W. The Plasma Proteins: Structure, Function and Genetic Control. 2.ed, New York: Academic Press, v.1, p.141-147,1975.
WADE, N. Hybridomas: The Making of a Revolution. Science, v.215, p.1073-1075, Fevereiro 26, 1982.
SCHAINK, H.M.; SMIT, J.A.M. Protein-polysaccharide interactions: The determination of the osmotic second virial coefficients in aqueous solutions of ?-lactoglobulin and dextran. Food Hydrocolloids, v.21, p.1389-1396, 2007.
SHAW, D.J. Introduction to Colloid and Surface Chemistry. Oxford: Reed Educational and Professional Publishing, 1996, p153.
SHIH, Y.C.; PRAUSNITZ, J.M.; BLANCH, W. Some Characteristics of Protein Precipitation by Salts. Biotechnology and Bioengineering, n.40, p.1155- 1164, 1992.
SKOOG, D.A.; WEST D.M.; HOLLER F.J. Fundamentals of analytical chemistry. 4.ed, Barcelona, Reverté, 1997.
SOLMS, N.V.; ANDERSON, C.O.; BLANCH, H.; PRAUSNITZ, J.M. Molecular Thermodynamics for Fluid-Phase Equilibria in Aqueous Two-protein Systems. AIChE Journal, v.48, p.1292-1300, 2002.
SPITZER, M.; SABADINI, E.; LOH, W. Poly(ethylene glycol) or Poly(ethylene oxide)? Magnitude of end-group Contribution to the Partitioning of Ethylene Oxide Oligomers and Polymers between Water and Organic Phases. Journal of Brazilian Chemical Society, v.13, n.1, p.7-9, 2002.
TANAKA, K.; SAWATANI, E.; SHIGUEOKA, E.M.; CAMPOS, T.C.X.B.; NAKAO, H.C.; DIAS, G.A.; FUJITA, R.K.; ARASHIRO, F. A chromatographic method for the production
of a human immunoglobulin G solution for intravenous use. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, v.31, p.1375-1381, 1998.
TAVARES, F.W.; PRAUSNITZ, J.M. Analytic calculation of phase diagrams for solutions containing colloids or globular proteins. Colloid Polymer Science, n.282, p.620-632, 2004.
TIMASHEFF, S.,N.; ARAKAWA, T. Preferential Interactions of Proteins with Salts in Concentrated Solutions. Biochemistry, v.21, p.6545-6552, 1982.
TOTH, J.; VARSÁNYI, E.P.; GYENIS, J. Formation and Isolation of Bovine Serum Albumin in Particulate Solid Form. VDI Berichte 1901, v.II, n.C-5, p.575-580, 2005.
VERWEY, E.J.W.; OVERBEEK, J.T.G. Theory of the Stability of Lyophobic Colloids. Elsevier: New York, 1948. p.205.
WATANABE, E. O., Equilíbrio de fases na precipitação de lisozima e albumina de soro bovino com o uso de sais. 2007, Tese (Doutorado), Universidade Estadual de Campinas, 2007.
XIE, H.G.; WANG,Y.J.; SUN,M. Modeling of the partitioning of membrane protein and phase equilibria for Triton X-100-salt aqueous two-phase systems using a modified generalized multicomponent osmotic virial equation. Process Biochemistry, v.41, p.689-696, 2006.
YOUSEF, M.A.; DATTA, R.; RODGERS, V.G.J. Monolayer Hydration Governs Nonideality in Osmotic Pressure of Proteins Solutions. AIChE Journal, v.48, p.1301-1308, 2002.
ZHOU, Y.; HALL, C.K. Solute Excluded-Volume Effects on the Stability of Globular Proteins: A Statistical Thermodynamic Theory. Biopolymers, v.38, p.273-284, 1996.
APÊNDICE A
Resultados (tabelas e gráficos)
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 15. Sistemas contendo BSA e PEG 2000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 1 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 2000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
15%, 20%, 25% e 30%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,1381 0,1954 0,2307 0,2924 0,0989 0,0036 0,1420 0,1904 0,2191 0,2650 0,0976 0,0050 0,1921 0,2336 0,2620 0,2468 0,1000 0,0001 0,1918 0,2365 0,2756 0,2493 0,0982 0,0001 0,2325 0,2858 0,3213 0,2911 0,0974 0,0000 0,2376 0,2842 0,3150 0,2472 0,0981 0,0000 0,0802 0,1416 0,1757 0,2811 0,0973 0,0049 0,0854 0,1415 0,1887 0,2827 0,0987 0,0050
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 16. Sistemas contendo BSA e PEG 2000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 2. Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 2000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a 15%,
20%, 25% e 30%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,1149 0,1958 0,2334 0,3455 0,0987 0,0050 0,1343 0,1953 0,2403 0,2624 0,0985 0,0055 0,2150 0,2454 0,2780 0,2182 0,0981 0,0007 0,2129 0,2451 0,2856 0,2180 0,0980 0,0003 0,2639 0,2941 0,3327 0,2077 0,0978 0,0002 0,2637 0,2939 0,3307 0,1951 0,0979 0,0001 0,0068 0,1487 0,1773 0,5665 0,0988 0,0507 0,0077 0,1481 0,1750 0,5195 0,0969 0,0490
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 17. Sistemas contendo BSA e PEG 2000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 3 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 2000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
15%, 20%, 25% e 30%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0928 0,1959 0,2421 0,3621 0,1002 0,0218 0,1073 0,1953 0,2498 0,3200 0,1000 0,0181 0,1779 0,2452 0,2732 0,2927 0,0996 0,0255 0,1949 0,2436 0,2757 0,2732 0,1006 0,0240 0,2383 0,2928 0,3360 0,3104 0,1003 0,0002 0,2264 0,2937 0,3358 0,3083 0,0998 0,0002 0,0521 0,1466 0,1752 0,2181 0,1001 0,0798 0,0785 0,1471 0,1667 0,1889 0,1006 0,0860
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g XBSA g/g
Figura 18. Sistemas contendo BSA e PEG 4000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 4 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 4000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20% e 25%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0639 0,0984 0,1226 0,3656 0,1002 0,0222 0,0581 0,0998 0,1050 0,3866 0,0993 0,0253 0,1009 0,1501 0,1750 0,3613 0,1012 0,0007 0,1243 0,1503 0,1736 0,3386 0,1001 0,0006 0,1744 0,2018 0,2166 0,2370 0,0992 0,0003 0,1609 0,2000 0,2210 0,2439 0,1005 0,0002 0,2324 0,2508 0,2727 0,2044 0,0995 0,0000 0,1819 0,2492 0,2746 0,2526 0,1002 0,0000
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g XBSA g/g
Figura 19. Sistemas contendo BSA e PEG 4000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 5 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 4000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20% e 25%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0854 0,1022 0,0702 0,1781 0,0994 0,1128 0,0798 0,1022 0,0750 0,1864 0,0985 0,1120 0,0952 0,1497 0,1590 0,3437 0,1003 0,0006 0,1155 0,1496 0,1828 0,3497 0,1005 0,0005 0,2278 0,1982 0,2169 0,1987 0,1009 0,0006 0,1301 0,1978 0,2117 0,2837 0,1001 0,0005 0,1776 0,2500 0,2740 0,2779 0,0998 0,0000 0,2017 0,2503 0,2704 0,2463 0,0997 0,0000
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g XBSA g/g
Figura 20. Sistemas contendo BSA e PEG 4000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 6 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 4000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20% e 25%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
- - - - - - - - 0,1649 0,1506 0,1590 0,2897 0,1002 0,0350 0,1104 0,1490 0,1508 0,3443 0,0997 0,0352 0,1436 0,1979 0,2194 0,3313 0,1003 0,0040 0,1985 0,1978 0,2025 0,2777 0,0996 0,0040 0,2203 0,2483 0,2823 0,2192 0,1005 0,0004 0,1959 0,2494 0,2816 0,2218 0,1001 0,0003
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 21. Sistemas contendo BSA e PEG 6000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 7 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 6000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20% e 25%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0651 0,0986 0,1160 0,4037 0,1003 0,0084 0,0520 0,0988 0,1034 0,4312 0,1004 0,0076 0,0889 0,1499 0,1620 0,4788 0,0994 0,0004 0,1008 0,1497 0,1671 0,4306 0,1000 0,0005 0,1336 0,1986 0,2361 0,3672 0,1015 0,0000 0,1352 0,1989 0,2408 0,3479 0,1004 0,0000 0,1755 0,2497 0,2935 0,3558 0,0995 0,0000 0,1753 0,2471 0,2945 0,3485 0,1006 0,0000
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 22. Sistemas contendo BSA e PEG 6000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 8 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 6000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20% e 25%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0171 0,0989 0,1200 0,4555 0,0999 0,0327 0,0125 0,1039 0,1236 0,4515 0,1004 0,0286 0,0051 0,1495 0,1792 0,5384 0,1001 0,0008 0,0042 0,1490 0,1893 0,4677 0,0990 0,0008 0,0049 0,1985 0,2429 0,4432 0,0997 0,0002 0,0046 0,1997 0,2348 0,6208 0,0985 0,0002 0,0810 0,2450 0,2988 0,3531 0,0972 0,0000 0,0862 0,2526 0,3289 0,3533 0,1007 0,0000
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g XBSA g/g
Figura 23. Sistemas contendo BSA e PEG 6000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 9 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 6000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20% e 25%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA iWBSA al. WBSA s
0,0237 0,0978 0,1491 0,6576 0,1015 0,0386 0,0235 0,1036 0,1464 0,5989 0,0994 0,0371 0,0667 0,1479 0,1683 0,4045 0,1006 0,0063 0,0732 0,1507 0,1851 0,4016 0,1007 0,0071 0,0990 0,1987 0,2299 0,4117 0,1007 0,0004 0,1159 0,2022 0,2350 0,4110 0,1010 0,0004 0,1650 0,2447 0,2902 0,2703 0,0970 0,0001 0,1589 0,2470 0,2898 0,2802 0,0988 0,0001
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 24. Sistemas contendo BSA e PEG 10000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 10 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 10000, a 25ºC, com valor de pH igual a 4,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20%, 25%, 30% e 35%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0792 0,0935 0,1121 0,2259 0,0997 0,0025 0,0750 0,0964 0,1134 0,2593 0,0987 0,0019 0,1097 0,1407 0,1550 0,3436 0,1004 0,0001 0,1182 0,1410 0,1589 0,3187 0,1006 0,0001 0,1805 0,1882 0,2126 0,2048 0,0991 0,0000 0,1780 0,1922 0,2157 0,2010 0,0982 0,0000 0,2206 0,2366 0,2572 0,2486 0,0991 0,0000 0,2235 0,2370 0,2523 0,2298 0,0996 0,0000 0,1805 0,2957 0,3246 0,4677 0,0997 0,0000 0,1843 0,2969 0,3380 0,5013 0,0996 0,0001 0,1997 0,3454 0,3796 0,4756 0,1007 0,0001 0,2033 0,3464 0,3977 0,5015 0,1001 0,0005
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 25. Sistemas contendo BSA e PEG 10000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 11 – Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 10000, a 25ºC, com valor de pH igual a 5,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a
10%, 15%, 20%, 25%, 30% e 35%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0047 0,0977 0,1309 0,3695 0,0987 0,0176 0,0060 0,1004 0,1299 0,3951 0,0975 0,0152 0,1214 0,1474 0,1694 0,2697 0,0983 0,0008 0,1273 0,1493 0,1686 0,2601 0,0981 0,0008 0,1736 0,1962 0,2171 0,2528 0,0970 0,0001 0,1859 0,1977 0,2121 0,2735 0,0983 0,0001 0,2283 0,2468 0,2736 0,2077 0,0982 0,0000 0,2261 0,2449 0,2710 0,1977 0,0983 0,0001 0,1925 0,2997 0,3305 0,4970 0,0988 0,0001 0,1633 0,2994 0,3317 0,5003 0,0977 0,0001 0,2640 0,3479 0,3985 0,3495 0,1000 0,0001 0,2419 0,3487 0,3821 0,3626 0,0995 0,0001
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 XPEG g/g X BSA g/g
Figura 26. Sistemas contendo BSA e PEG 10000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, o ELL é representado por círculos, o equilíbrio de transição é representado por losangos e o ELL é
representado por círculos
Tabela 12 – Sistemas contendo BSA e PEG 10000, a 25ºC, com valor de pH igual a 6,0, com concentração de BSA na alimentação igual a 10% e concentrações de PEG iguais a 10%, 15%,
20%, 25%, 30% e 35%
WPEG i WPEG al. WPEG s WBSA i WBSA al. WBSA s
0,0025 0,0974 0,1292 0,3632 0,0986 0,0149 0,0029 0,0942 0,1324 0,4117 0,0995 0,0148 0,0993 0,1407 0,1629 0,3326 0,0994 0,0175 0,0984 0,1403 0,1610 0,3426 0,0989 0,0189 0,1749 0,1844 0,2124 0,2462 0,0993 0,0004 0,1606 0,1893 0,2212 0,2547 0,1002 0,0002 0,2211 0,2349 0,2576 0,1733 0,0986 0,0003 0,2253 0,2348 0,2684 0,1708 0,0995 0,0001 0,1878 0,2987 0,3363 0,4240 0,0992 0,0002 0,1797 0,2968 0,3475 0,4785 0,1005 0,0002 0,2596 0,3476 0,3892 0,3168 0,1001 0,0002 0,2578 0,3486 0,3931 0,2799 0,0994 0,0001