d. Le domaine C-terminal
3.2 Microparticules endothéliales (MPE) .1 Caractères généraux
Les microparticules endothéliales proviennent de la membrane plasmatique des cellules endothéliales et portantes à leur surface des protéines marqueurs de ces cellules comme par exemple, l’ICAM-1, l’endoglin et l’E-selctin.
Grâce à l’expression de la phosphatidylsérine, les microparticules endothéliales peuvent se fixer aux facteurs de coagulation et les activer, conférant ainsi un potentiel pro-coagulant aux microparticules. De plus, les microparticules endothéliales présentent également à leur surface le facteur tissulaire, initiateur de la voie de coagulation extrinsèque. La capacité des ME à induire la génération de thrombine a été démontrée pour la première fois en utilisant des cellules endothéliales en culture ; un taux élevé de ME générées in vitro réduit le temps de coagulation. L’activité thrombogénique des ME a été confirmée en montrant que les ME provoquent la formation de thrombine de manière dépendante du facteur tissulaire et déclenchent la formation du thrombus in vivo. De plus, les ME portant le facteur tissulaire et exprimant des molécules d’adhésion endothéliales peuvent se lier à d’autres types cellulaires comme les monocytes et ainsi transférer leur facteur tissulaire actif in vitro. Elles peuvent avoir un effet pro-coagulant indirect par la stimulation de l’expression et l’activité du FT dans les monocytes. Un transfert du facteur tissulaire des ME vers les plaquettes pourrait aussi être impliqué dans cette réponse pro-coagulante car ce mécanisme a été démontré pour les microparticules leucocytaires.
Cependant, des études récentes ont montré que les ME peuvent aussi exprimer le récepteur de la protéine C et ainsi avoir des propriétés anticoagulantes, suggérant un rôle de ME dans l’équilibre pro-/anti-coagulant. Enfin les ME se comportent également comme un support pour la génération de plasmine en exprimant l’activateur de plasminogène de type urokinase et son récepteur, ce qui leur confère des propriétés fibrinolytiques et un rôle dans la dissolution du caillot.
Tout comme les microparticules leucocytaires, les ME participent à l’inflammation en induisant la production de cytokines inflammatoires, notamment d’IL-6. L’augmentation de l’adhésion est aussi médiée par l’acide arachidonique et les phospholipides oxydés présents dans ces microparticules. Elles vont également jouer un rôle dans la maturation cellules dendritiques, induisant là encore la synthèse de cytokines pro-inflammatoires (259).
3.2.2 MPE et athérosclérose
Comme les MPL les MPE ont des effets biologiques divers, négatifs ou positifs en regard de la pathologie de l’athérosclérose.
Elles sont considérées comme acteur de la dysfonction vasculaire, elles inhibent notamment la production de NO par l’endothélium soit par production de radicaux libres, soit par surexpression de cavéoline-1 ou encore par diminution de l’expression de la NOS endothéliale ou de sa phosphorylation. Elles peuvent également agir directement sur la contraction des cellules musculaires lisses.
Les MPE contribuent aussi à l’apoptose endothéliales ainsi qu’à l’expression de molécules d’adhésion par les CE et les récepteurs correspondant par les leucocytes.
Bien que les MPE soient une sous-population mineure des MP circulantes, la variation de leur concentration peut apporter des informations cliniques importantes aussi bien chez les sujets sains que chez les patients atteints de troubles cardiovasculaires (262). Chez les patients présentant une dysfonction endothéliale, les taux de MPE circulantes sont inversement corrélés à l’amplitude de dilatation induite par le débit, indépendamment de l’âge et de la pression artérielle du patient (263). De plus, une atteinte aigue de l’endothélium comme celle induite par le tabagisme passif réduit la fonction endothéliale et augmente le taux de MPE circulantes chez de jeunes sujets sains (264). Les MPE apparaissent donc comme un marqueur de l’activation de l’endothélium.
On s’intéresse également à des stratégies de multi-marquage combinant les taux de MPE et ceux de cellules progénitrices endothéliales ; ces derniers pourraient être utilisés comme marqueurs de la santé vasculaire. Une modification du rapport des concentrations de MPE/ cellules progénitrices endothéliales serait le reflet d’un déséquilibre entre lésion et réparation de l’endothélium, ce rapport permettrait d’identifier les patients ayant des vaisseaux dysfonctionnels (263).
Seules quelques études ont étudié le rôle pronostique potentiel de la mesure de la concentration plasmatique de MPE. Chez des patients ayant un accident ischémique aigu, le taux des MPE est associé à la taille de la lésion ainsi qu’au résultat clinique mais aucun suivi n’a été fait concernant les incidents cliniques (265). Chez des sujets avec un haut risque de maladie coronaire, le taux basal de MPE exprimant la VE-cadhérine prédit la survie du patient indépendamment du score de Framingham, du taux de CRP ou du niveau de peptide iatriurétique BNP (266). Des résultats similaires ont été observés dans le cas de la défaillance rénale chronique, où de haut de MPE apparaissent comme facteur prédictif indépendant de la mort cardiovasculaire, alors que les autres sous-populations de MP plasmatique n’ont pas cette valeur pronostique. Ces résultats suggèrent une utilisation possible du taux de MPE circulant comme marqueur pour la stratification des patients et l’identification des sujets à haut risque cardiovasculaire.
3.3 Techniques de dosage
L’identification très récente des MP comme nouveaux marqueurs en pathologie humaine explique la grande variabilité des conditions analytiques décrites dans la littérature. Une standardisation est actuellement en cours d’élaboration dans le cadre des Comités scientifiques de standardisation de biologie vasculaire de la Société internationale de Thrombose et d’Hémostase (ISTH).
Variabilité pré-analytique :
La notion importante dans l’analyse des MP circulantes est de contrôler au maximum l’activation cellulaire in vitro afin d’éviter toute agrégation artéfactuelle de MP. Les recommandations de l’ISTH sont résumées dans le tableau VIII.
Tableau VIII : protocole pré-analytique recommandé pour l’analyse des microparticules circulantes (267).
Méthodologies de détection des MP : il existe différentes méthodologies basées sur les caractéristiques des MP. Elles sont résumées dans la figure 31 en précisant les avantages et les limites de chacune d’elles. La numération des MP et la détermination de leur activité fonctionnelle sont complémentaires, et les résultats obtenus doivent être analysés en tenant compte des limites actuelles de ces différentes méthodes. Des techniques très récentes se développent pour améliorer la détection des MP dont la cytométrie de haute sensibilité calibrée par des billes Mégamix ®.