CHAPITRE IV: RESULTATS
1. Etude I : The differential expression of galectin-1 and galectin-3 in normal lymphoid
Hodgkin lymphomas
1. Expression des galectines dans les organes lymphoïdes
normaux
1.1 Galectine-1
Le profil d’expression de la galectine-1 dans les ganglions lymphatiques normaux est illustré en Figure 37A. On observe très peu d’expression de galectine-1 par les cellules lymphoïdes des différents organes étudiés (<1% de lymphocytes marqués). Quelques macrophages expriment la galectine-1 de façon variable dans les ganglions lymphatiques, dans les amygdales et dans les capillaires à housse ellipsoïdale de la rate. Les CE n’expriment pas la galectine-1, excepté une expression faible et focale (intensité faible et <30% de vaisseaux marqués) qui est observée uniquement pour les vaisseaux amygdaliens (3 cas/5).
1.2 Galectine-3
Le profil d’expression de la galectine-3 dans les ganglions lymphatiques normaux est illustré en Figure 37B. Les ganglions lymphatiques, le tissu amygdalien et splénique sont constitués d’une majorité de lymphocytes n’exprimant pas la galectine-3, comme observé pour la galectine-1. Quelques rares lymphocytes isolés expriment la galectine-3. Les macrophages et les CE expriment fortement la galectine-3 dans les différents tissus étudiés. La galectine-3 est également exprimée par les cellules dendritiques folliculaires et interdigitées des ganglions lymphatiques. Une expression de galectine-3 dans l’épithélium malpighien des cryptes amygdaliennes, dans les cellules épithéliales corticales et médullaires thymiques et les corpuscules de Hassal est également observée.
De manière globale, les cellules lymphoïdes normales expriment peu la galectine-1 et la galectine-3 alors que les cellules endothéliales expriment fortement la galectine-3. A l’opposé, l’expression de la galectine-1 par les cellules endothéliales des organes lymphoïdes normaux est très faible.
2. Expression des galectines dans les tissus lymphomateux
2.1 Galectine-1 et cellules lymphomateuses
Le profil d’expression de la galectine-1 dans les lymphomes est illustré en Figure 37C. En ce qui concerne les LNH, les cellules lymphomateuses n’expriment pas la galectine-1 dans 35 cas sur 42. De rares cellules positives sont observées pour 7 cas sans association à un sous-groupe histologique particulier (Table 22).
Pour les LH, une faible expression de galectine-1 par les cellules de Reed-Sternberg est observée pour 4 cas sur 14, sans association à un sous-groupe histologique particulier. Dans les LH de forme sclérose nodulaire, les fibroblastes sont nettement marqués par l’anticorps anti-galectine-1.
De manière globale, les cellules lymphomateuses expriment peu la galectine-1.
2.2 Galectine-3 et cellules lymphomateuses
2.2.1 Evaluation de l’expression immunohistochimique
Le profil d’expression de la galectine-3 dans les lymphomes est illustré en Figures 37D et F. L’expression de galectine-3 par les cellules lymphomateuses en fonction des sous-groupes de LNH est détaillée dans la Table 23. Les lymphomes lymphocytiques, de Burkitt, de la zone marginale et du manteau n’expriment pas la galectine-3. Un seul cas de lymphome lymphocytique est caractérisé par un marquage focal. Les LF sont très hétérogènes ; 1 cas sur 8 est diffusément positif et 4 cas sur 8 le sont focalement. Contrairement aux autres lymphomes, les DLBCL expriment fortement la galectine-3 (8 cas/16) et 5 cas sur 16 présentent une positivité focale. Nous n’avons pas trouvé de relation entre les variables cliniques évaluées dans cette étude (stade Ann Arbor, âge, présence de symptômes B ou survie) et l’expression de galectine-3 au sein des DLBCL.
Les cellules de Reed-Sternberg n’expriment pas la galectine-3 dans 12 cas sur 14. Seuls 1 cas de LH de forme sclérose nodulaire et 1 cas de LH riche en lymphocytes sont associés à une expression de galectine-3 par les cellules de Reed-Sternberg. Pour tous les cas de LH, quelques rares lymphocytes expriment la galectine-3. Dans les LH de forme sclérose nodulaire, comme pour la galectine-1, on observe un marquage des fibroblastes par l’anticorps anti-galectine-3.
L’hétérogénéité des lymphomes se manifeste également par l’expression de la galectine-3 qui est différente selon les sous-groupes de lymphomes ; elle est fortement exprimée par les cellules lymphomateuses de certains DLBCL.
2.2.2 Concordance entre l’expression immunohistochimique et l’expression de l’ARNm de la galectine-3
L’analyse concomittante de l’expression du gène de la galectine-3 par RT-PCR quantitative et de la protéine par immunohistochimie a été réalisée sur 3 ganglions lymphatiques normaux, 3 LF et 3 DLBCL. Elle confirme que la présence d’un marquage diffus pour la galectine-3 au sein des DLBCL est associée à une surexpression du gène de la galectine-3 (Figure 38).
Les techniques de RT-PCR et d’immunohistochimie confirment que les DLBCL se caractérisent par une expression plus élevée de galectine-3 que les autres sous-groupes de lymphomes.
2.3 Galectine-1 et cellules endothéliales
2.3.1 Evaluation semi-quantitative de l’expression immunohistochimique
Il existe une grande hétérogénéité d’expression de la galectine-1 par les CE des vaisseaux des LH et des LNH (Table 24); 15 cas sont négatifs alors qu’une positivité est observée dans 41 cas dont 22 sont caractérisés par un marquage important (intensité forte et plus de 60% de vaisseaux positifs). Cette expression n’est pas associée à un sous-groupe histologique particulier ni en relation avec les variables cliniques évaluées dans cette étude (stade Ann Arbor, âge, présence de symptômes B ou survie).
Alors que les CE des vaisseaux des tissus lymphoïdes normaux n’expriment pas la galectine-1, les CE associées aux lymphomes sont caractérisées par une expression de galectine-1.
2.3.2 Corrélation entre l’expression endothéliale de galectine-1 et la DMV
Ces résultats nous portent à croire que la galectine-1 pourrait jouer un rôle dans l’angiogenèse des lymphomes systémiques. Nous avons donc décidé, dans cette étude, d’évaluer la corrélation entre l’expression endothéliale de galectine-1 et la DMV. Cette méthodologie nécessite une évaluation quantitative de l’expression endothéliale de galectine-1.
Evaluation quantitative de l’expression de galectine-1 par les vaisseaux
La Figure 37E illustre la méthodologie de quantification (décrite dans le chapitre Matériel et Méthodes point 2.2.2.3). La quantification de l’expression endothéliale de galectine-1 ainsi que la correspondance entre les évaluations semi-quantitative et quantitative sont détaillées Figure 39. La quantification permet de comparer l’expression de galectine-1 par les vaisseaux des différents groupes à l’aide de deux variables: l’intensité de marquage et le pourcentage de vaisseaux marqués.
L’analyse quantitative confirme l’absence d’expression de galectine-1 observée par analyse semi-quantitative en ce qui concerne les CE des organes lymphoïdes normaux (Figures 39D-E).
L’expression de galectine-1 augmente de façon statistiquement significative dans les vaisseaux des lymphomes tant pour l’intensité moyenne de marquage (p = 0.0001) que pour le pourcentage de vaisseaux marqués (p=0.0007 ; Figures 39D-E).
L’analyse quantitative permet de mettre en évidence que les vaisseaux des LH se caractérisent par une intensité moyenne de galectine-1 plus élevée que les LNH (p=0.02 ; Figure 39D). Toutefois, une grande hétérogénéité d’expression au sein de chaque sous-groupe de lymphome est observée et, en particulier, en ce qui concerne le pourcentage de vaisseaux marqués.
Nous n’avons pas trouvé de relation entre les variables cliniques évaluées dans cette étude (stade Ann Arbor, âge, présence de symptômes B ou survie) et l’expression endothéliale de galectine-1, évaluée quantitativement.
Corrélation entre l’expression de galectine-1 par les vaisseaux et la DMV
La DMV de chaque cas de lymphome est évaluée par analyse d’image en identifiant les vaisseaux à l’aide de l’anticorps anti-CD31 (méthodologie décrite dans le chapitre Matériel et Méthodes point 2.2.2.4).
On observe, au sein de la série de lymphomes (56 cas) une corrélation positive entre l’expression endothéliale de galectine-1 et la DMV (coefficient de Spearman à 0.43 ; p =
0.0007), comme l’illustre la Figure 40. Si l’on s’intéresse spécifiquement aux LNH de type B (37 cas), cette corrélation s’accentue (coefficient de Spearman à 0.59 ; p = 0.0001).
L’expression endothéliale de galectine-1 est corrélée à la DMV des lymphomes.
2.4 Galectine-3 et cellules endothéliales
Comme observé dans les tissus normaux, la galectine-3 est fortement exprimée par les CE associées aux différents sous-groupes de lymphomes.
En conclusion, en ce qui concerne la galectine-1, les cellules lymphomateuses expriment peu la galectine-1, de façon similaire à ce qui est observé pour les cellules lymphoïdes normales. Au contraire, les CE associées aux lymphomes sont caractérisées par une augmentation de l’expression de galectine-1 en comparaison aux CE normales. Cette expression endothéliale ne montre pas de relation avec les variables cliniques de notre étude mais est corrélée à la DMV des lymphomes, suggérant un rôle angiogénique de la galectine-1 dans les lymphomes systémiques.
En ce qui concerne la galectine-3, les cellules lymphomateuses des DLBCL se caractérisent par une expression plus élevée de galectine-3 comparativement aux autres sous-groupes de lymphomes ou aux cellules lymphoïdes normales. Cette expression de galectine-3 ne montre pas de relation avec les variables cliniques de notre étude. Tandis qu’une expression différente de galectine-1 est observée entre les CE des vaisseaux des tissus lymphoïdes normaux et des lymphomes, la galectine-3 est exprimée de façon similaire pour les CE des vaisseaux des tissus lymphoïdes normaux et des lymphomes.