Descripción del material analizado 1. Creación de palinoteca

El Laboratori d’Anàlisis Palinològiques (LAP) de la Universitat Autònoma de Barcelona lleva en funcionamiento desde 1983. Desde entonces, y pese haberse realizado algunos estudios melisopalinológicos, nunca se había realizado una tesis doctoral sobre los productos de las abejas en Catalunya. Es por ello que, como primer paso para conseguirlo, se hizo el estudio de la vegetación colindante de los colmenares, recolectando flores de las plantas y preparando una palinoteca de referencia y un listado de taxones polínicos de referencia.

Para ello se visitaron todos los colmenares y el área de los alrededores, haciendo un inventario de las principales especies presentes y observando a cuáles de ellas visitaban las abejas. De las especies vegetales desconocidas, se recolectaron ejemplares para hacer un herbario, analizar sus características en el laboratorio y clasificarlas taxonómicamente, hasta género o especie, mediante las claves dicotómicas de la “Flora manual dels Països Catalans” (Bolós et al., 1993).

De las especies visitadas por A. mellifera se registró si lo hacían para obtener polen y/o néctar, tal i como se explica en el apartado 3.1. Al mismo tiempo se realizó un registro fotográfico de las especies visitadas y se recolectó muestras de flores y polen para realizar una palinoteca de referencia, la cual sirvió para elaborar un catálogo polínico fotográfico.

Para realizar la palinoteca, se separaron los granos de polen de los estambres de manera mecánica por agitación o con una aguja enmangada, después se colocaron sobre los portaobjetos en una placa calefactora a 37ºC y se añadió una gota de dietil éter para eliminar la capa lipídica de la superficie (Gong et al., 2015). Una vez evaporado el éter, se depositaba una gota de glicerogelatina con fucsina básica e, inmediatamente después, se colocaba un cubreobjetos. Una vez solidificada la muestra se sellaban los bordes del cubreobjetos con histolaca (LMR®). Con este método se obtuvieron unas 300 muestras de palinoteca para melisopalinología de plantas de zona urbanas y no urbanas.

3.3.2. Mieles

Durante la recolección de la miel, los apicultores recogen los cuadros llenos de miel de todas las colmenas que tienen en su colmenar, y posteriormente realizan la extracción. La mayoría de los apicultores que han participado en este estudio hicieron la extracción mediante centrifugación, con una centrífuga especializada, pero algunos lo hicieron mediante prensado de los panales (MBVlld17Jl, MCPins17No, MLGar17Oc, MTMP16Se, MTMS16Jl, MvilC17Oc). En todos los casos, posteriormente

Material y Métodos

Cardellach Lliso, Pau 72

mezclan toda la miel extraída de un mismo colmenar para obtener un producto homogeneizado de ese emplazamiento. Para el estudio de la presente tesis se recogió una muestra de cada período de extracción que realizaron los apicultores en cada emplazamiento. En este caso, al ser colmenares estáticos, la mayoría de los participantes solo recolectan miel una vez al año.

En total se obtuvieron 51 muestras de miel de 29 colmenares, de distintos años y durante diferentes períodos de recolección (Tabla 6).

A la hora de analizar los resultados, las mieles se clasificaron en función de diferentes variables:

- Estación del año de recolección: Se han clasificado las mieles por estaciones según los meses de recolección, considerando invierno a los meses de enero, febrero y marzo; primavera a abril, mayo y junio; verano a julio, agosto y septiembre; y otoño a octubre, noviembre y diciembre. En invierno solo se recolectó una muestra de miel (MDaig16En), en primavera 17 muestras, en verano 12 muestras, y en otoño 7 muestras.

- El color y el estado físico de las mieles: para clasificar el color, debido a la ausencia de medidor Pfund, se ha utilizado un criterio visual a partir de la clasificación de los estándares de miel de los Estado Unidos (United States Department of Agriculture, 1985) que se muestra en la tabla 3, y que usa 7 categorías: claro agua, extra claro, claro, ámbar extra claro, ámbar claro, ámbar, ámbar oscuro. En el caso de las mieles de este estudio, el color se ha clasificado en 5 categorías, de más claras a más oscuras: claro agua, claro (engloba extra claro y claro), ámbar (engloba ámbar extra claro), ámbar oscuro (engloba ámbar claro y ámbar) y oscuro (engloba ámbar oscuro) (Fotos 9 y 10). Para determinar el color, la observación se ha realizado en las mismas condiciones para todas las mieles, con la misma luz ambiental, en el mismo tipo de recipiente, y con un fondo blanco.

- Según el estado físico, las mieles se han clasificado en cristalizadas, cuando la miel estaba estática aun moviendo el envase, o fluidas, cuando la miel se movía al girar el envase.

Análisis esporo-polínico de la miel y el propóleo, y su relación con el entorno

Cardellach Lliso, Pau 73 Foto 9. Comparación entre la clasificación de los colores de las mieles establecida en esta tesis con la

clasificación de la USDA (United States Department of Agriculture, 1985).

Foto 10. Gradientes y clasificación de colores de las mieles en este estudio.

Material y Métodos

Cardellach Lliso, Pau 74

Tabla 6. Clasificación de las muestras de miel según la provincia (Prov); municipio; localización del colmenar;

año; mes; estación de recolección; metodología de extracción: centrífuga o por prensado; color: claro agua (C.

agua), claro, Ámbar, Ámbar oscuro (Ámbar O.) y Oscuro; estado físico: Fluido o cristalizado (Crist.); código de identificación de cada muestra.

Prov. Municipio Localización Año Mes Estación Extracción Color Estado Código

Barcelona Ago. Verano Centrífuga Ámbar Fluido MBCiu17Ag Oct. Otoño Centrífuga Oscuro Fluido MBCiu17Oc Can Masdeu 2017 Oct. Otoño Centrífuga Claro Crist. MBCMd17Oc Valldaura 2017 Jul. Verano Prensado Ámbar Fluido MBVll17Jl

Campins 2017 Nov. Otoño Prensado Ámbar O. Crist. MCpins17No

Granollers 2016 Jul. Verano Centrífuga Ámbar O. Crist. MGra16Jl

La Garriga 2017 Oct. Otoño Prensado Oscuro Fluido MLGar17Oc

Marganell 2017 Jun. Prim. Centrífuga Claro Fluido MMarg17AJn

Martorell 2016 Jun. Prim. Centrífuga Ámbar O. Crist MMart16Jn Julio Verano Centrífuga Ámbar Fluido MTore17Jl

Viladecans Filipines 2018 Dic. Otoño Centrífuga Claro Crist. MVFil18Dc

Girona Mirador 2016 Jun. Prim. Centrífuga Oscuro Fluido MVidM16Jn 2017 Jun. Prim. Centrífuga Ámbar O. Fluido MVidM17Jn

Querol 2017 Junio Prim. Centrífuga Claro Crist. MAQuer17Jn

Duesaigües 2016 Ene. Invi. Centrífuga Ámbar O. Fluido MDaig16En Vilallonga del

Camp 2017 Oct. Otoño Prensado Ámbar O. Fluido MVilC17Oc

Análisis esporo-polínico de la miel y el propóleo, y su relación con el entorno

Cardellach Lliso, Pau 75

3.3.3. Propóleos

Como se ha comentado en el apartado 1.3.1, en general los apicultores de Catalunya no comercializan el propóleo de sus colmenares. En el caso de los apicultores que han participado en el estudio tampoco lo recolectaron. Así pues, la extracción de los propóleos de esta tesis se realizó mediante raspado (Foto 11). Algunas veces la realizaron los propios apicultores y otras se realizó personalmente durante la visita de estudio de los colmenares. En todos los casos se obtuvieron muestras de todas las colmenas del colmenar y se mezclaron para homogeneizar la muestra.

Mediante este método de raspado no se puede saber cuándo fueron elaborados los propóleos, ni cuál es el período de tiempo que han estado en la colmena. Lo único que se puede determinar es que son propóleos de esta zona ya que las colmenas son estáticas y siempre han estado en el mismo lugar.

En total se obtuvieron 26 muestras de propóleo de 26 colmenares (Tabla 7), los mismos colmenares de los que se obtuvo las muestras de miel, excepto en el caso de los colmenares de Granollers, Vidreres (Can Dalmau) y Viladecans (Filipines). Las muestras se recolectaron entre los años 2016 y 2017.

Los propóleos se han clasificado por

- Color y textura. Para determinar estas características, se observaron todas las muestras en las mismas condiciones de luz, con un fondo blanco y con las mismas condiciones ambientales para evitar variaciones en función de la temperatura.

De esta manera se determinaron 6 colores (Foto 12): rojo, rojo amarillento (combinación de resina roja y amarilla, pero predomina la roja), amarillo rojizo (combinación de resina roja y amarilla, pero predomina la amarilla), amarilla, marrón claro (combinación de resina amarilla y marrón) y marrón oscuro.

Foto 11. Raspado de propóleo de una colmena de A. mellifera.

Material y Métodos

Cardellach Lliso, Pau 76

Cada tipo de resina tenía una textura característica, la roja confería una textura rígida y cristalina, la amarilla maleable y la marrón rígida granulada (Foto 13). La mayoría de los propóleos tenían combinaciones de resinas que les conferían colores y texturas intermedias.

Tabla 7. Clasificación de las muestras de propóleo según la provincia (Prov.); localización del colmenar; año de recolección; color: rojo, rojo, amarillo rojizo, amarilla, marrón claro o marrón oscuro; textura: maleable, rígida

cristalina o rígida granulada; código de identificación de cada muestra.

Prov. Localización Año Color Textura Código

Barcelona

Barcelona

Ciutadella 2016 Marrón oscuro Rígida granulada PBCiu16 Can Masdeu 2017 Amarillo Maleable PBCMd17

Valldaura 2017 Marrón oscuro Rígida granulada PBVlld17 Campins 2017 Rojo amarillento Rígida cristalina PCpins17

La Garriga 2017 Amarillo Maleable PLGar17

Marganell 2017 Rojo amarillento Rígida cristalina PMarg17

Martorell 2017 Amarillo Maleable PMart17

Orrius 2017 Rojo amarillento Rígida cristalina POrri17 Sagàs 2016 Marrón claro Rígida granulada PSag16 Torelló 2016 Rojo amarillento Rígida cristalina PTore16 Viladecans Atrium 2016 Amarillo rojizo Maleable PVAt16

Mas Ratés 2016 Marrón oscuro Rígida granulada PVMR16

Girona

Torroella de Montgrí

Plana 2016 Amarillo rojizo Rígida granulada PTMP16 Serra 2017 Amarillo Maleable PTMS17 Olot Batet 2017 Rojo Rígida cristalina PGBat17A Riudaura 2017 Rojo amarillento Rígida cristalina PGRiu17 Santa Pau Can Jordà 2017 Rojo amarillento Rígida cristalina PGCJo17 St. Hilari

Sacalm 2017 Rojo amarillento Rígida cristalina

PStH17

Vidreres 2016 Amarillo rojizo Maleable PVidM16

Alòs d'Isil 2017 Rojo amarillento Rígida cristalina PAlI17

Lleida

Camarasa La Maçana 2017 Marrón claro Rígido granulado

PCam17 Serós 2017 Marrón claro Rígida granulada PSer17

Solsona 2017 Amarillo rojizo Maleable PSol17

Tarra gona

Querol 2017 Rojo amarillento Maleable PQuer17

Duesaigües 2017 Marrón oscuro Rígida granulada PDaig17 Vilallonga del

Camp 2017 Marrón oscuro Rígida granulada

PVilC17

Análisis esporo-polínico de la miel y el propóleo, y su relación con el entorno

Cardellach Lliso, Pau 77 Foto 12. Clasificación de los propóleos según el color.

Foto 13. Clasificación de los propóleos según sus texturas.