CONCLUSION

Ce premier travail démontre que le poids et la nature du PEG doit être pris en considération. Cet aspect est important dans le cas des solutions extracellulaires pour fournir la meilleure protection contre les lésions à long terme obtenues dans les reins allo-greffés. Les greffons préservés avec SCOT® démontrent une meilleure fonction et histologie, tout comme une expression moins prononcée des marqueurs de lésions tels que TGF-β1. Il apparait aussi que l’expression de des gènes du remodelage vasculaire est réduite. Comme l’expression de VEGF est directement liée à l’effet de HIF-1α qui en transloquant au noyau stimule l’expression des gènes liés à ce facteur tels que VEGF ou EPO. L’autre alternative est peut être liée au niveau des lésions des reins conservés avec UW et IGL-1® pouvant stimuler une activité de réparation persistante en particulier au niveau des vaisseaux.

Nous devons noter que ce travail devra faire l’objet d’études plus approfondies en termes de marqueurs étudiés et en termes d’analyses protéiques afin de valider nos observations. De même, il serait intéressant de faire varier la sévérité de notre modèle afin d’observer des différences plus marquées entre ces solutions de conservation, notamment en utilisant un modèle d’allo-transplantation avec un appariement SLA moins optimale. Ces conditions plus sévères potentiellement nécessiteront alors un traitement immunosuppresseur comme en clinique humaine.

Ces résultats en contradiction avec d’autres résultats obtenus dans nos modèles cellulaires [14], dans notre laboratoire, nous ont conduit à une étude plus précise du rôle de la taille et du poids des PEGs. Cela a fait l’objet de l’étude n° 2.

ETUDE N°2 : COMPARAISON DES EFFETS DE SOLUTIONS

DE CONSERVATION CONTENANT DIFFERENTES TAILLES

ET CONCENTRATIONS DE PEG

I.

OBJECTIF DU TRAVAIL

Comme nous l’avons souligné précédemment, les solutions contenant du PEG limitent, à long terme, les conséquences des lésions induites dans un modèle d’allo transplantation rénale, en comparaison avec la solution UW. De plus, nous avons mis en évidence un effet différent selon les PEGs inclus dans les solutions commerciales utilisées en transplantation rénale pour certains paramètres et un effet commun pour certains marqueurs de l’inflammation. Comme nous l’avons décrit au cours de l’exposé bibliographique, elles diffèrent dans leur composition et notamment au niveau de la taille et de la dose du PEG. Ce colloïde est connu pour éviter le gonflement cellulaire, limiter le stress oxydant et surtout pour limiter les processus inflammatoires à travers la théorie de l’ « immunocamouflage » [9]. Sa masse moléculaire varie en fonction de sa taille, c’est pourquoi nous parlerons de « taille » en nommant le PEG par son poids moléculaire exprimé en kilo Dalton (kDa).

Si plusieurs tailles et concentrations ont été utilisées au cours de plusieurs études, aucune ne s’est attachée à appréhender les effets respectifs des tailles et doses de PEG utilisées dans les solutions de conservation. Ce travail a été réalisé dans l’optique de répondre à cette question. Pour cela, nous avons utilisé une solution de type extracellulaire de composition équivalente à la solution SCOT®, à laquelle ont été ajoutées différentes tailles et différentes concentrations de PEG. La solution extracellulaire sans PEG a déjà été étudiée au sein de notre laboratoire. Cette dernière a eu des effets catastrophiques sur la survie animale, c’est pourquoi les solutions étudiées seront comparées à la solution de référence UW. Nous avons choisi d’étudier les tailles de PEG utilisées actuellement dans les solutions de conservation commerciales, soit PEG 20kDa (SCOT®) et PEG 35kDa (IGL-1®). Puis nous avons choisi différentes concentrations de PEG à tester. La solution commerciale SCOT® (PEG 20kDa 30g/L) a montré de nombreux effets protecteurs en transplantation rénale. Malgré cela, des problèmes ont été observés en clinique et dans des études expérimentales lors du lavage des greffons hépatiques. De plus, un effet moindre de la protection est observé en ce qui concerne les concentrations supérieures à 50g/L [409]. Ainsi nous avons choisi

Des travaux préliminaires, dans notre laboratoire, ont récemment déterminé les mécanismes liés à la survie de cellules porcines en contact avec différentes solutions contenant plus ou moins du PEG, au cours de la conservation hypothermique [14].

Cette étude a mis en évidence un effet bénéfique des solutions contenant du PEG et surtout de celles contenant du PEG 35kDa en faibles concentrations [14]. Nous avons alors choisi de reprendre les concentrations de PEG 35kDa étudiées (5g/L, 15g/L et 30g/L) et de les évaluer dans un modèle in vivo. Trois à cinq animaux ont été étudiés pour chaque concentration et

suivis pendant trois mois.

PROBLEMATIQUE

• OBJECTIF:

Quels sont les effets respectifs des tailles et doses

de PEG utilisés dans une solution de conservation

extracellulaire?

• PROTOCOLE:

Auto Greffe

24h

3Mois

X

Prélèvements: sanguins, urinaires et tissulaires (N2liquide et formol)

Solutions de conservation

I II

Figure 49 : Présentation de la problèmatique et schéma du protocole suivi.

Afin de comparer les effets à long terme (Figure 49), nous avons utilisé le modèle

d’auto transplantation rénal porcin, maîtrisé depuis de nombreuses années au sein du laboratoire de chirurgie expérimentale de Surgères, décrit dans la partie matériel et méthode. Les premières données suite à la reperfusion (survie animale et fonction glomérulaire) nous ont alors orientés vers une appréciation des effets des différentes solutions lors de l’ischémie froide. Pour cela nous avons mis au point une méthode d’analyse tissulaire de la conservation statique à 4°C à partir des reins droits néphrectomisés et inutilisés au cours de l’auto transplantation, décrit dans la partie matériel et méthode.

Trois reins ont été étudiés pour chaque concentration. Les variations histologiques et les changements de l’expression transcriptomique des marqueurs de l’hypoxie, du remodelage vasculaire et du stress ont été déterminés à partir des tissus obtenus au cours de la conservation. Les graphiques ne présenteront que les variations d’un intérêt particulier, soit après 6 et 24 heures de conservation. Ces temps représentent par ailleurs des paliers importants durant la conservation.

Après trois mois de reperfusion, les animaux auto-greffés ont été sacrifiés, prélevés et échantillonnés systématiquement. A partir de ces tissus, nous avons évalué les lésions chroniques à long terme en analysant la fibrose interstitielle et les variations de l’expression transcriptomique de :

- marqueurs liés aux processus inflammatoires (CMH de classe I, TLR, MCP-1), - marqueurs liés à l’hypoxie et au remodelage vasculaire (HIF-1 α, VEGF, Flk-1,

Notch-4),

- marqueurs liés au stress (HO-1, HO-2 et HSP70).

II.

RESULTATS