V. Résultats de l’analyse quantitative V.1 Analyse quantitative des lipides

V. Résultats de l’analyse quantitative V.1 Analyse quantitative des lipides V.1.1 Teneur en lipides

Les teneurs en lipides totaux dans les fruits de Pistachier de l’Atlas et le Pistachier Lentisque ainsi les aspects des lipides totaux sont mentionnés dans le Tableau V.1. Les couleurs des lipides totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas et le Pistachier Lentisque sont respectivement jaunes et vert-jaunâtre. Ces lipides totaux ont une odeur agréable et se solidifient

partiellement à température ambiante, et cela est peut être due à l’existence des acides gras saturés dans la composition des lipides totaux en proportion un peu élevée. À la lumière de ces résultats, on remarque que les fruits de Pistachier Lentisque présentent la teneur la plus élevée 21,54%, par rapport aux fruits de Pistachier de l’Atlas qui présentent la teneur inférieure à 14 %.

Tableau V.1 : Teneurs en lipides totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas et le Pistachier Lentisque

poids Pistachier

Lentisque (PL) Pistachier de

l’Atlas (PA)

Couleur des lipides totaux Vert-jaunâtre

jaune

Teneur (%) 21,54

14.00

V.1.2 Fractionnement des classes des lipides.

Le fractionnement des lipides totaux des huiles extraites des fruits en utilisant des solvants organiques de polarité croissante à savoir : le chloroforme et le méthanol nous a permis d’obtenir les différentes classes des lipides ; lipides neutres LN et les phospholipides PL.

Les teneurs de ces différentes classes des lipides sont mentionnées dans le Tableau V.2. À travers ce tableau, on remarque que les teneurs les plus élevées sont enregistrés pour les lipides neutres (63,5% pour les lipides totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas et 93,17%

pour les lipides totaux des fruits de Pistachier Lentisque). En fin les lipides totaux des fruits étudiées sont pauvres en phospholipides (1,2% pour le Pistachier lentisque et 0,8% pour le Pistachier de l’Atlas).

Tableau V.2 : Teneur des différentes classes des lipides

Teneur (%) Pistachier

Lentisque (PL) Pistachier de

l’Atlas (PA)

lipides neutres (LN) 93,17

63,5

Phospholipides (PL) 1,2

0,8

V.2 Composition en acides gras des lipides totaux et des différentes classes de lipides

La composition des lipides totaux et les différentes classes des lipides a été déterminée par chromatographie en phase gazeuse (CPG). La séparation des esters méthyliques d’acides gras est obtenue en fonction de la masse moléculaire (longueur de chaine), du nombre et de la localisation des doubles liaisons. L’identification des pics représentatifs des esters

méthyliques à été réalisée en utilisant des substances de références et ceci par comparaison des temps de rétention de chaque pic du chromatogramme avec ceux obtenus par les étalons.

Solvant

C16:0

C16:1 C18:0

C18:1 C18:2

C18:3

a

Figure V.1 : Chromatogramme des EMAG des

-a- lipides totaux de Pistachier d’Atlas et -b- lipides neutres de Pistachier Lentisque.

À partir des chromatogrammes des EMAG (Figure V.1) des différents extrait, nous avons dressé le Tableau V.3, qui indique les proportions relatives des divers esters méthyliques d’acides gras obtenus par saponification des lipides totaux et des différentes classes des lipides est estérification par le méthanol.

Nous observons que les lipides totaux et les différentes classes des lipides : lipides neutres, et phospholipides du fruit de Pistachier de l’Atlas et de Pistachier Lentisque contiennent des acides gras habituellement rencontrés dans les huiles végétales, on l’occurrence les acides : myristique, palmitique, palmitéolique, stéarique, oléique, linoléique, linolénique et

arachidique.

Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau V.3 C16:0

Solvant C18:1

C18:2

C16:1 C18:0

b

Tableau V.3 : Composition en acides gras des lipides totaux et des différentes classes des lipides.

Pistachier Lentisque Pistachier de l’Atlas

Espèce AG % LT LN PL LT LN PL

C10 :0 - - - -

C11 :0 - - - -

C14 :0 - - - 4,1

C14 :1 - - - -

C15 :0 - - - -

C16 :0 15,1 18,8 10,2 17,7 21,4 7,0

C16 :1 3,3 2,2 2,0 0,8 0,7 -

C18 :0 1,00 2,1 39,1 0,3 1,2 67,2

C18 :1 55,5 53,9 20,1 52,3 48,4 5,9

C18 :2 25,1 23,0 24,3 28,0 27,4 9.0

C18 :3 - - 2,1 0,9 0,9 3,2

C20 :0 - - 0,5 - - 0,4

Autres - - 1,6 - - 3,2

Total 100 100 100 100 100 100

AGS 16,1 20,9 49,7 18 22,6 78,7

AGI 83,9 79,1 48,7 82 77,4 18,1

AGI/AGS 5,21 3,78 0,98 4,55 3,42 0,23

AGS : Acide Gras Saturés AGS : Acide Gras Insaturés

À partir des résultats du Tableau V.3, on remarque que les lipides totaux et les différentes classes des lipides (lipides neutres, phospholipides) des fruits de Pistachier de l’Atlas et le Pistachier Lentisque sont caractérisés par leurs richesses en acides gras mono- et di-insaturés.

Les acides gras insaturés représentent (67% pour les extraits lipidiques de Pistachier Lentisque et 59% pour les extraits lipidiques de Pistachier de l’Atlas).

Dans les extraits lipidiques des fruits de Pistachier Lentisque l’acide oléique C18:1 est le plus important (les lipides totaux 55,5% et les lipides neutres 53,9%) suivi de l’acide linoléique C18:2 (les lipides totaux 25,1% et les lipides neutres 23%), on enregistre en troisième un acides gras saturés avec des proportion assez élevée c’est l’acide palmitique C16:0 (les lipides totaux 15,1% et les lipides neutres 18,8%). La même remarque pour les extraits lipidiques des fruits de Pistachier de l’Atlas, l’acide oléique C18:1 (les lipides totaux 52,3% et les lipides neutres 48,4%) suivi de l’acide linoléique C18:2 (les lipides totaux 28% et les lipides neutres 27,4%), l’acide palmitique C16:0 (les lipides totaux 17,7% et les lipides neutres 21,4%).

On note dans les extraits des phospholipides des valeurs assez importantes du taux d’acides gras saturés et en particulier de l’acide stéarique C18:0 (39,1% pour les extraits lipidiques de Pistachier Lentisque et 67,2% pour les extraits lipidiques de Pistachier de l’Atlas). Ainsi que la présence de l’acide arachidique C20:0 et l’acide linolénique C18:3 mais avec des proportions faibles.

V.3 Analyse quantitative des composés phénoliques

V.3.1 Quantification des phénols totaux dans les lipides totaux et lipides neutres La teneur en composés phénoliques de chaque extrait a été alors calculée à partir de la courbe d’étalonnage de l’acide gallique (Figure V.2).

Object 3

Figure V.2 : Courbe d'étalonnage de l'acide gallique

Les résultats sont exprimés en grammes par 100 grammes des lipides totaux et lipides neutres équivalent en acide gallique. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau V.4.

Tableau V.4 : Teneur en phénols totaux des différents extraits

Extraits Teneur en phénols totaux

(g /100g)

PL.LN 4,20

PL.LT 1,90

PA.LT 1,35

PA.LN 0,90

D'après la synthèse des résultats consignés dans le tableau ci-dessus, on constate que les teneurs en composés phénoliques varient de 4,20 à 0,90 g/100g en équivalent d’acide gallique. La valeur la plus élevée a été enregistrée pour les lipides neutres de Pistachier Lentisque, tandis que les lipides neutres de Pistachier de l’Atlas ont donné la valeur la plus faible. On remarque que la valeur maximale et la valeur minimale représentent deux individus des plantes différentes de la même classe de lipide (les lipides neutres).

On remarque aussi d’après les résultats que la quantité des composés phénoliques dans les extraits de Pistachier Lentisque pour les deux classes des lipides (les lipides neutres et les

lipides totaux) est très importante (6,1 g/100g) par rapport à celle des extraits de Pistachier de l’Atlas (2,25 g/100g).

Du point de vu comparative, les extraits des lipides neutres des fruits de Pistachier Lentisque sont plus riches en composés phénoliques par comparaison aux lipides totaux, on remarque aussi que les teneurs en phénols totaux dans les lipides totaux des extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas présentent des valeurs plus importantes que dans les lipides neutres.

V.3.2 Quantification des phénols totaux exclus des tocophérols

La teneur en composés phénoliques exclus des tocophérols de chaque extrait a été aussi calculée à partir de la courbe d’étalonnage de l’acide gallique (Figure V.2).

Les résultats sont exprimés en milligrammes par 100 grammes des lipides totaux en équivalent d’acide gallique. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau V.5.

Tableau V.5 : Teneur en phénols totaux des différents extraits exclus des tocophérols

Extraits Teneur en phénols totaux

(mg /100g)

PA.LT 5,80

PL.LT 4,41

D'après la synthèse des résultats obtenus dans le tableau ci-dessus (Tableau V.5), on constate que les teneurs en composés phénoliques exempte des tocophérols sont de 5,80 à 4,41

mg/100g en équivalent en acide gallique. La valeur la plus élevée a été enregistrée pour les extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas, tandis que les extraits de Pistachier lentisque ont donné la valeur la plus faible.

Du point de vu comparative, les extraits lipidiques du tableau V.4, des fruits de Pistachier lentisque et de Pistachier de l’Atlas sont plus riches en composés phénoliques par

comparaison aux extraits lipidiques exclus des tocophérols, à titre exemple la quantité des composés phénoliques dans les extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas est 232 fois plus grande que les extraits des lipides totaux exclus des tocophérols, de même on remarque que la quantité des composés phénoliques dans les extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier lentisque est 430 fois plus grande que les extraits des lipides totaux exclus

des tocophérols. Ces résultats montrent que les extraits lipidiques étudiés des deux fruits de plantes renferment des quantités importantes en tocophérols et cela confirment que la majorité des composés phénoliques dans les extraits lipidiques sont de squelette

tocophéroliques. Un autre résultat qui peut être aussi déduit est que les extraits lipidiques des fruits étudiés contiennent d’autres composés phénoliques autres que les tocophérols.

V.3.3 Quantification des flavonoïdes dans les lipides totaux et les lipides neutres La quantification des flavonoïdes dans nos extraits a été déterminée à partir de la courbe d'étalonnage de la rutine (Figure V.3).

Object 5

Figure V.3 : Courbe d'étalonnage de la rutine

Les résultats sont exprimés en grammes par 100 grammes des lipides totaux et lipides neutres équivalent en rutine. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau V.6.

Tableau V.6 : La teneur des flavonoïdes des différents extraits

Extraits Teneur en flavonoïdes

(g /100g) Taux des flavonoïdes %

PA.LT 0,30

21,85

PL.LT 0,16

8,60

PL.LN 0,15

3,56

PA.LN 0,09

10,60

D'après la synthèse des résultats obtenus dans le tableau ci-dessus, on constate que les teneurs en flavonoïdes varient de 0,30 à 0,09 g équivalents en rutine par cent gramme des lipides totaux et lipides neutres. La valeur la plus élevée a été enregistrée pour les lipides totaux de Pistachier de l’Atlas, tandis que les lipides neutres de Pistachier de l’Atlas ont donné la valeur la plus faible. Ces teneurs en flavonoïdes sont largement moins importantes que celles observées pour d’autres espèces de plantes médicinales investiguées dans le laboratoire de sciences fondamentales.

L’analyse de l’ensemble des résultats obtenus (Tableau V.6) montre clairement que les extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas (surtout les lipides totaux), sont plus riches en flavonoïdes et présentent une valeur moyenne de l’ordre 0,196 g/ 100g devant les extraits des fruits de Pistachier Lentisque.

Les extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas sont plus riches en flavonoïdes par comparaison aux lipides neutres, on a remarque aussi que les teneurs en flavonoïdes dans les lipides totaux des extraits des fruits de Pistachier Lentisque présentent des valeurs plus importantes que dans les lipides neutres. Donc les lipides totaux des extraits sont plus riches en flavonoïdes pour les deux fruits de plantes (Pistachier de l’Atlas, Pistachier Lentisque) que ceux des lipides neutres.

Dans un souci de simplifier, les différents extraits ont été classés par ordre décroissant en teneur des composés phénoliques. Nous présentons alors, dans l’histogramme ci-dessous les différentes valeurs du contenu en phénols totaux, en flavonoïdes pour chaque extrait (Figure V.4).

Object 7

Figure V.4 : Comparaison de la teneur en phénols totaux et en flavonoïdes des extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas et Pistachier Lentisque

Il est clair à partir de cet histogramme que les quantités des phénols totaux et des flavonoïdes ne varient pas dans le même sens à titre d’exemple, on remarque que le

pourcentage en flavonoïdes dans l’extrait des lipides totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas est plus important que dans les autres extraits alors qui n’est pas l’extrait le plus riche en composés phénoliques totaux. La même remarque peut-être faite sur les autres extraits lipidiques.

A la lumière de ces résultats, on déduit que la variation de la teneur en flavonoïdes d'un individu à l'autre que se soit le Pistachier Lentisque ou le Pistachier de l’Atlas est moins importante par rapport a celle des phénols totaux pour les extraits des fruits de Pistachier Lentisque et présente un étendu de 0,013 g/100g. D'autre part, on note que l'étendu pour les extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas est de 0,21 g/100g, alors qu'il est de 0,14 g/100g pour les extraits des lipides totaux des plantes étudiées. Quant aux lipides neutres cette valeur et de 0,06 mg/g

V.3.4 Quantification des flavonoïdes exclus des tocophérols

La quantification des flavonoïdes dans nos extraits a été déterminée à partir de la courbe d'étalonnage de la rutine (Figure V.3).

Les résultats sont exprimés en milligrammes par 100 grammes des lipides totaux équivalent en rutine. Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau V.7.

Tableau V.7 : La teneur des flavonoïdes des différents extraits exclus des tocophérols

Extraits Teneur en flavonoïdes

(mg /100g) Taux des flavonoïdes %

PL.LT 1,17

26,63

PA.LT 2.00

34,41

D'après la synthèse des résultats obtenus dans le tableau ci-dessus, on constate que les teneurs en flavonoïdes varient de 1,17 à 2,00 g équivalents en rutine par cent gramme des lipides totaux. La valeur la plus élevée a été enregistrée pour les extraits des fruits de

Pistachier de l’Atlas, tandis que les extraits de Pistachier lentisque ont donné la valeur la plus faible.

L’analyse de l’ensemble des résultats obtenus (Tableau V.7) montre clairement que les extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas, sont plus riches en flavonoïdes et présentent une valeur moyenne de l’ordre 1,00 mg/100g devant les extraits des fruits de Pistachier

Lentisque (0,585 mg/100g).

Dans un souci de simplifier les différents extraits ont été classés par ordre décroissant en teneur des composés phénoliques. Nous présentons alors, dans l’histogramme ci-dessous les différentes valeurs du contenu en phénols totaux, en flavonoïdes pour chaque extrait (Figure V.5).

Object 9

Figure V.5 : Comparaison de la teneur en phénols totaux et en flavonoïdes des extraits exclus des tocophérols des fruits de Pistachier de l’Atlas et de Pistachier Lentisque

Il est clair à partir de cet histogramme que les quantités des phénols totaux et les flavonoïdes varient dans le même sens, on remarque d’après l’histogramme ci-dessus que les extraits lipidiques des fruits de Pistachier de l’Atlas sont plus riches en flavonoïdes et composés phénoliques par rapport à ceux des extraits lipidiques des fruits de Pistachier lentisques.

Du point de vu comparative, les extraits lipidiques du Tableau V.6, des fruits de Pistachier lentisque et de Pistachier de l’Atlas sont plus riches en flavonoïdes par comparaison aux extraits lipidiques exclus des tocophérols (Tableau V.7), à titre exemple la quantité des flavonoïdes dans les extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas est 150 fois plus grande que les extraits des lipides totaux exclus des tocophérols. On a remarque aussi que la quantité des flavonoïdes dans les extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier lentisque est 136 fois plus grande que les extraits des lipides totaux exclus des tocophérols.

Egalement, nous avons tracé la courbe représentant la variation entre la teneur en phénols totaux et la quantité des flavonoïdes des extraits lipidiques (Tableau V.6) et les extraits lipidiques exclus des tocophérols (Tableau V.7)

Object 11

Figure V.6 : Variation de la quantité des phénols totaux en fonction de la teneur en flavonoïdes.

D’après le graphe précèdent, il est clair qu’il existe une très faible corrélation (R²= 0,25) entre la teneur en phénols totaux et le teneur en flavonoïdes.

D'après la synthèse des différents résultats de dosage des composés phénoliques, on peut constater que le classement décroissant de la quantité en phénols totaux des extraits lipidiques étudiés est différent à celui de la quantité en flavonoïdes surtout si on parle en pourcentage. Par conséquent, on peut conclure que la quantité de différents composés phénoliques est un caractère spécifique pour chaque individu et chaque classe de lipide.

V.4. Evaluation du pouvoir antioxydant

V.4.1 Test chimique de DPPH dans les lipides totaux et lipides neutres

Les graphes suivants représentent la variation du pourcentage du pouvoir d’inhibition (PI %) en fonction de la concentration de chaque extrait nous aident à calculer le paramètre EC50

(EC50 « efficient concentration ». Le paramètre EC50 a été présenté récemment pour

l'interprétation des résultats de la méthode de DPPH (autrement appelé la valeur IC50). Ceci est défini comme la concentration de substrat qui cause la perte de 50% de l'activité de DPPH.

Ce paramètre a été apparemment présenté par Marque Williams et ses collègues (Marque Williams et al, 1995 ; Bondet et al, 1997), il a été employé plus tard par plusieurs groupes de chercheurs pour présenter leurs résultats (Kim et al, 2002 ; Lebeau et al, 2000 ; Leit et al, 2002 ; Lu et Foo, 2000); Ce paramètre a été analogiquement présenté comme des paramètres biologiques tels que LD50. L'inconvénient de ce paramètre est que plus l'activité antioxydante est haute, plus la valeur d'EC50 est inférieure. C'est un inconvénient en particulier quand des résultats sont présentés en forme de graphiques comme un diagramme à barres (De SA nchez- Moreno et al, 1999), encore si les mêmes données sont également disponibles en forme numérique (SA nchez-Moreno et al, 1998).

Object 13 Object 15

Figure V.7 : Courbes représentants l’activité antioxydante des extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas mesurée par le test de DPPH

Object 17 Object 20

-c- -d-

Figure V.8 : Courbes représentants l’activité antioxydante des extraits des fruits de Pistachier Lentisque mesurée par le test de DPPH

-c- les lipides neutres (LN), -d- les lipides totaux (LT)

Object 23 Object 25

Object 27

Figure V.9 : Courbes représentants l’activité antioxydante des antioxydants de références le Trolox et la vitamine C et le BHA par le test de DPPH

La capacité antioxydante de nos différents extraits a été déterminée à partir des EC50. Les EC50

ont été déterminées pour tous les extraits et à 30 min. le tableau V.8, suivant résume les différents résultats obtenus.

Tableau V.8 : Les valeurs de EC 50 (g/ l) des différents extraits

Extraits EC50 (g / l) ARP

PL.LT 9,88 0,10

PA.LT 5,04 0,20

PL.LN 53,42 0,01

PA.LN 20,61 0,05

Acide ascorbique (vitamine C) 4,33 x 10^-3 0,23x 10³

Trolox 3,54 x10^-3 0,28x 10³

Puisque les valeurs d’EC50 présentent les concentrations d’inhibiteurs nécessaires pour balayer 50% des radicaux libres et qui sont inversement proportionnelle à l’activité

antioxydante, Ainsi l’acide ascorbique, BHA et le Trolox sont connus pour leurs propriétés antioxydantes, ils sont donc utilisés comme contrôles positifs (Frei. B et al; 1990). Alors et d’après les valeurs obtenues d’EC50, on perçoit que tous les extraits testés découvrent des activités antiradicalaires plus faible que les antioxydants de référence. Ce résultat explique que les extraits ne contiennent pas que des antioxydants, mais ils renferment d’autres molécules neutres.

D’après le classement décroissant schématisé dans les figures ci-dessous (figure V.10). On remarque que l’ensemble des extraits lipidiques des lipides totaux (le Pistachier de l’Atlas et le Pistachier Lentisque) ont un pouvoir antioxydant supérieurs au extraits lipidiques des lipides neutres, de même les extraits lipidiques (les lipides totaux et les lipides neutres) dévoilent des capacités antiradicalaires très inférieures par rapport à ceux des antioxydants de référence (vitamine C, Trolox et BHA).

Figure V.10 : Classement décroissant des différents extraits lipidique selon leurs EC50

Figure V.11 : Classement croissant des différents extraits lipidiques selon leurs ARP

D’après les résultats du classement décroissant des extraits lipidiques de chaque plante selon leur valeur moyenne d’EC50, on remarque que ce classement varie dans le même sens dans les deux cas (les lipides totaux et les lipides neutres) dont les extraits des lipides totaux sont toujours les plus puissants. Ce résultat peut être expliqué à la présence de composés ayant les mêmes structures chimiques dans les deux extraits (lipides totaux et lipides neutres) de chaque plante mais à forte abondance dans les extraits des lipides totaux.

Du point de vu comparative, les extraits lipidiques (totaux et neutres) des fruits de Pistachier de l’Atlas sont classés premiers comme antioxydants, c’est- à-dire ils sont les plus riches en molécules antioxydantes par rapport aux extraits lipidiques des fruits de Pistachier Lentisque.

En se basant sur les résultats obtenus, on peut conclure que la variation de la capacité antioxydante de ces extraits comparativement à celle du Trolox, BHA et la vitamine C

pourrait principalement due à la présence de certaines molécules potentiellement actives, et on peut conclure aussi que les extraits des lipides totaux sont plus riches en espèces

antioxydantes par rapport aux extraits des lipides neutres, notamment les extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas. (La valeur d’ARP des extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier

de l’Atlas est 4 fois plus grande que les lipides neutres, et 10 fois dans les fruits de Pistachier Lentisque)

Tous les extraits lipidiques (les lipides totaux et les lipides neutres) montrent des capacités antiradicalaire très faibles par rapport aux composés phénoliques de références (vitamine C, BHA et le Trolox), à titre d’exemple la puissance antiradicalaire ''ARP '', du Trolox est 1423 fois (vitamine C : 1164, BHA : 1902) plus grande que la valeur des extraits lipidiques totaux des fruits de Pistachier de l’Atlas. Cette large différence peut être expliquée du fait que les composés phénoliques sont masqués par les lipides. Cet effet justifie que les composés lipidiques sont les espèces moléculaires possédant la plus grande activité antioxydante importante vis-à-vis du radical DPPH.

Nous avons essayé de trouver une corrélation linéaire entre les valeurs d'EC50 et les teneurs en phénols totaux et flavonoïdes, mais nous avons trouvé de coefficient de corrélation très faible (R²= 0,276). La seule explication de cette indépendance peut être traduite par l’existence de certaines molécules individuelles responsables de cette activité. Dans le cas des phénols totaux, nous avons trouvé une corrélation linéaire significative (R² = 0,781) plus la pente chute rapidement plus l'activité de ces extraits est très importante (Figure V.12). L'activité antioxydante des extraits lipidiques dépend principalement de ces composés antioxydants et de leurs concentrations, plus l'extrait lipidique est riche en ces dernier plus EC50 diminue plus l'extrait est antioxydant.

-a- -b-

Figure V.12 : Corrélation entre le pouvoir d’inhibition (EC50) des extraits lipidiques et la -a-teneur en phénols totaux,-b- la teneur en flavonoïdes.

Figure V.13 : Corrélation entre le pouvoir d’inhibition (EC50) des extraits lipidiques et le taux des flavonoïdes.

En revanche des moyennes corrélations ont été détectées entre les valeurs d’EC50 avec le taux des flavonoïdes (R²= 0,591). Une explication simple de cette variation, c’est que la tendance des flavonoïdes à piéger les radicaux dépend essentiellement de leurs structures individuelles comme le montre la figure V.15, et de leurs taux dans l’extrait. La position de la double liaison dans le cycle C ainsi que le nombre et/ou la position des groupements

hydroxyles (OH) sont les éléments les plus importants pour expliquer l’augmentation ou la diminution de l’activité antiradicalaire de nos extraits phénoliques (Abdelghafour Marfak, 2003). (Figure V.14).

Figure V.14 : Eléments essentiels pour l’activité antioxydante des flavonoïdes.

V.4.2 Test chimique de DPPH exclus des tocophérols

L’évaluation de l’activité antiradicalaire des extraits phénoliques exclus des tocophérols à été faite en suivant les mêmes procédures utilisées dans le cas des autres extraits. Les tracés de la Figure V.15 représentent la variation du pouvoir antioxydant (PI %) en fonction de la

concentration de chaque extrait.

Object 30 Object 32

-a- -b-

Figure V.15 : Courbes représentants l’activité antioxydante des extraits des lipides totaux exclus des tocophérols mesurée par le test de DPPH

-a- Pistachier de l’Atlas (PA), -b- Pistachier Lentisque (PL)

La capacité antioxydante de nos différents extraits a été déterminée à partir des EC50. Les valeurs des EC50 ont été déterminées pour tous les extraits et à 30 min. le tableau V.9, résume les différents résultats obtenus.

Tableau V.9 : Les valeurs de EC50 (g / l) des différents extraits exclus des tocophérols

À la lumière de ces résultats, on remarque que l’extrait lipidique des lipides totaux de fruit de Pistachier Lentisque possède une activité antioxydante très importante (0,13 g/l) par rapport aux extraits de lipides totaux de fruits de Pistachier de l’Atlas. Les deux extraits lipidiques de Pistachier de l’Atlas et de Pistachier Lentisque ont des pouvoirs antioxydants similaires, ce qui indique que les espèces moléculaires responsables de l’activité antioxydante sont contenues dans les lipides totaux. Les deux extraits lipidiques des lipides totaux dévoilent des capacités antiradicalaires très inférieures par rapport à ceux des antioxydants de référence (la vitamine C, le Trolox et le BHA). Ce résultat explique que les extraits ne contiennent pas que des antioxydants, mais ils renferment d’autres molécules neutres.

D'après la synthèse des résultats consignés dans le tableau V.9, on constate que tous les extraits des lipides totaux (le Pistachier de l’Atlas et le Pistachier Lentisque) montrent des capacités antiradicalaires très faibles par rapport aux composés phénoliques de références (la vitamine C, le BHA et le Trolox), à titre d’exemple la puissance antiradicalaire ''EC50 '', du

Extraits EC50 (g / l)

PL.LT 0,13

PA.LT 0,16

Acide ascorbique (vitamine C) 4,33 x10^-3 Butylhydroxyanisole (BHA) 2,65x10^-3

Trolox 3,54 x10^-3

Trolox est 60 fois plus grande que la valeur des extraits lipidiques totaux des fruits de

Pistachier de l’Atlas, de même la puissance antiradicalaire ''EC50'', de la vitamine C est 30 fois plus grande que celles des extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier Lentisque. Cette large différence peut être expliquée du fait que les composés phénoliques sont masqués par les lipides. Cet effet justifie que les composés lipidiques sont les espèces moléculaires possédant la plus grande activité antioxydante importante vis-à-vis du radical DPPH.

Du point de vu comparative, Les extraits lipidiques exclus des tocophérols des fruits de Pistachier de l’Atlas et Pistachier Lentisque montrent une capacité antiradicalaire très importante, c’est- à-dire ils sont les plus riches en molécules antioxydantes par rapport aux autres extraits lipidiques.

Nous n’avons pas trouvé une corrélation entre le pouvoir antioxydant EC50 et la teneur en phénols totaux et flavonoïdes. Ce résultat peut être expliqué que les extraits lipidiques renferment des composés phénoliques de structures chimiques différentes et que l’activité antioxydante étudiée par ce test ne dépend pas obligatoirement de la concentration des composés phénoliques.

V.4.3 Test Molybdate Phosphate dans les lipides totaux et les lipides neutres L’évaluation de l’activité antioxydante de nos extraits à été déterminée à partir d’une courbe d’étalonnage de la vitamine E (Figure V.16), exprimée en VEEAC (vitamin E Equivalent Antioxydant Capacity) pour chaque extrait.

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Figure V.16 : La courbe d’étalonnage de la vitamine E

Les graphes des figures (Figure V.17 et Figure V.18) qui représentent la variation de l’absorbance en fonction de l’inverse du nombre de dilution pour chaque extrait.

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-a- -b-

Figure V.17 : Courbes représentants l’activité antioxydante des extraits des fruits de Pistachier de l’Atlas mesurée par le test de Molybdate

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-c- -d-

Figure V.18 : Courbes représentants l’activité antioxydante des extraits des fruits de Pistachier Lentisque mesurée par le test de Molybdate

-c- les lipides neutres (LN), -d- les lipides totaux (LT)

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Figure V.19 : Courbes représentants l’activité antioxydante des antioxydants de références le BHA et la vitamine C par le test de Molybdate

Les pentes tirées à partir de ces tracées, nous aide à déterminer un nouveau paramètre appelé VEEAC (vitamine E Equivalent Antioxydant Capacity).Ce paramètre est nécessaire pour estimer le pouvoir antioxydant de nos extraits par rapport à la vitamine E pris comme un antioxydant de référence.

Le tableau suivant résume les différents résultats obtenus du VEEAC.

Tableau V.10 : Les valeurs de VEEAC des différents extraits

Figure V.20 : Classement décroissant des différents extraits lipidique selon leurs VEEAC L’analyse de l’ensemble des résultats obtenus (Tableau V.10) montre clairement que les extraits lipidiques de Pistachier Lentisque que se soit lipides totaux ou lipides neutres présentent un pouvoir réducteur plus important par apport à ceux des extraits lipidiques de Pistachier de l’Atlas.

Extraits VEEAC (mM)

PL.LT 2,21

PA.LT 0,70

PL.LN 0,60

PA.LN 0,48

Butylhydroxyanisole (BHA) 1,13

Acide ascorbique (vitamine C) 3,21

Par ailleurs pour les extraits lipidiques des plantes étudiées, on note que les extraits des lipides totaux (soit le Pistachier Lentisque ou le Pistachier de l’Atlas) possèdent un pouvoir antioxydant très intéressant que les extraits des lipides neutres.

On remarque que les extraits des lipides totaux de Pistachier Lentisque (PL.LT) testés présentent une activité réductrice nettement supérieure à celle de tous les extraits lipidiques étudiés et le BHA prise comme de antioxydant de référence.

En revanche, selon les résultats obtenus, on peut dire que quel que soit les extraits lipidiques étudiés le potentiel réducteur est bien inferieur à ceux de la vitamine C prise comme antioxydant de référence.

Nous avons essayé de trouver une corrélation linéaire entre les valeurs de VEEAC de chaque extrait lipidique avec leur contenue en composés phénoliques totaux et en flavonoïdes.

Aucune corrélation n’a été observée entre les valeurs de VEEAC et la teneur en composés phénoliques totaux. Tandis que, une mauvaise corrélation a été enregistrée dans le cas des flavonoïdes.

La seule explication de l’indépendance de l’activité réductrice des phénols totaux ou des flavonoïdes de nos extraits peut être interpréter par l’existence de certaines molécules

individuelles autres que les composés phénoliques totaux responsables de cette activité à titre d’exemple, les extraits des lipides neutres des fruits de Pistachier Lentisque présentent des valeurs de VEEAC inférieures à celles des extraits des lipides totaux mais les teneurs en phénols totaux et en flavonoïdes dans les extraits des lipides neutres sont trois fois plus supérieures que dans les extraits des lipides totaux.Cependant, on peut émit l’hypothèse que cette différence provienne uniquement aux structures chimiques des antioxydants.

V.4.4 Test Molybdate Phosphate exclus des tocophérols

L’évaluation de l’activité antioxydante des extraits à été déterminée de la même manière suivie dans les autres extraits.

A partir des graphes de la Figure V.21 et la courbe d’étalonnage de la vitamine E, nous avons déterminé les valeurs des VEEAC (vitamine E Equivalent Antioxydant Capacity) de nos extraits.

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Figure V.21 : Courbes représentants l’activité antioxydante des extraits des lipides totaux exclus des tocophérols mesurée par le test de Molybdate

Le tableau V.11 résume les différents résultats obtenus du VEEAC.

Tableau V.11 : Les valeurs de VEEAC des différents extraits exclus des tocophérols

L’analyse de l’ensemble des résultats obtenus (Tableau V.11) montre clairement que l’extrait lipidique de Pistachier Lentisque présente toujours un pouvoir réducteur plus important que celui de l’extrait lipidique de Pistachier de l’Atlas. On remarque que les

Extraits VEEAC (mM)

PL.LT 1,48

PA.LT 1,07

Butylhydroxyanisole (BHA) 1,13

Acide ascorbique (vitamine C) 3,21

extraits des lipides totaux de Pistachier Lentisque (PL.LT) testés présentent aussi des activités réductrices nettement supérieures à celle du BHA pris comme antioxydant de référence.

D'après la synthèse des résultats obtenus dans les tableaux V.10 et V.11, on constate que tous les extraits lipidiques des fruits de Pistachier de l’Atlas montrent des pouvoirs réducteurs faibles par rapport aux composés phénoliques de références (vitamine C et le BHA) à titre d’exemple la valeur de VEEAC de la vitamine C est trois fois plus grande que les valeurs des extraits des lipides totaux exclus des tocophérols, de même la valeur de VEEAC du BHA est cinq fois plus grande que les valeurs des extraits des lipides totaux. On peut dire que ces extraits renferment des substances possédants un potentiel donneur d’électrons aussi faible.

Un point qui attire l’intention est que les valeurs des VEEAC du BHA sont deux fois plus faibles que celles des extraits des lipides totaux des fruits de Pistachier lentisque et 1,3 fois plus inferieure que celles des extraits des lipides totaux exclus des tocophérols, on peut dire que ces derniers extraits peuvent renfermées des substances possédants un potentiel donneur d’électrons fort que celui de l’extraits de composé phénolique de référence le BHA.

En revanche, selon les résultats obtenus, on peut dire que quel que soit les extraits

lipidiques étudiés les potentiels réducteurs sont bien inferieurs à ceux de la vitamine C pris comme de antioxydant de référence.

Nous n’avons pas trouvé une corrélation linéaire entre les valeurs de VEEAC de chaque extrait lipidique avec leur contenue en composés phénoliques totaux et en flavonoïdes.

Une simple explication de l’indépendance de l’activité réductrice par rapport aux phénols totaux et flavonoïdes de nos extraits peut être interpréter par l’existence de certaines

molécules individuelles autres que les phénols totaux et les flavonoïdes responsables des cette activité.