Pendant la semaine de mesures de chaque période de l'essai 2, un échantillon de lait est prélevé sur deux traites consécutives. La matière grasse de ces laits a été séparée par centrifugation (45 min. à 6000 tours/min) puis dissoute dans l'hexane (réf 052048, SOS) (dilution finale :environ 5mg de MG/mL). Chaque échantillon est ensuite analysé en double. L'analyse des acides gras est réalisée par deux estérifications différentes : les acides gras courts et moyens Uusqu'au C18:0) sont analysés après estérification isopropylique (EIP), les acides gras longs (à partir du C18:0) par estérification méthylique (EM).
Acides gras courts et moyens (WOLFF et FABIEN, 1989). Une prise d'essai correspondant à environ 5 mg de matière grasse est séchée sous courant d'azote, ensuite diluée avec 0,5 mL
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d'hexane. Les échantillons sont incubés pendant 1 h à 1
oooc
après ajout de 3,5 ml d'isopropanol (réf. 0950516, pu rex) et 0,5 ml d'acide sulfurique (réf. 1030515, SOS). Après refroidissement et ajout de 0,5 ml de NaCI 5% (réf. S 9888, Sigma, France), 1,5 ml d'hexane et 5 ml d'eau distillée, les échantillons sont centrifugés (3 min à 3000 min.1) et le surnageant est récupéré. Le culot est lavé (2 ml d'hexane) et centrifugé une deuxième fois. Les deux surnageants sont alors cumulés.Les esters isopropyliques sont analysés en chromatographie en phase gazeuse sur une colonne BPX70 de 120m (SGE, Melbourne, Australie) avec l'hydrogène comme gaz vecteur et un détecteur d'ionisation de flamme. Le programme de température est le suivant : 5 min à 50°C, augmentation de 5°C/min jusqu'à 190°C, palier de 15 min à 190°C, augmentation de 20°C/min jusqu'à 21
ooc
et palier de 10 min à 21ooc.
Acides gras longs. Une prise d'essai correspondant à environ 5 mg de matière grasse est séchée sous courant d'azote puis diluée dans 1 ml de toluène (réf. 0710516, SOS). Les échantillons sont incubés pendant 5 min. à
sooc
après ajout de 2 ml de méthanolate de sodium 0,5 N (réf. 16,499-2, Aldrich, France). Après refroidissement et ajout de 0,1 ml d'acide acétique (réf. 070515, SOS, France), 5 ml d'hexane et 5 ml d'eau distillée, les échantillons sont centrifugés (3 min à 3000 tours/min.1) et le surnageant est récupéré. Le culot est lavé (4 ml d'hexane) et centrifugé une deuxième fois et les deux surnageants sont cumulés. Les esters méthyliques sont analysés en chromatographie en phase gazeuse sur une colonne CPSIL88 de 1 QOm (Variant) avec l'hydrogène comme gaz vecteur et un détecteur d'ionisation de flamme. Le programme de température est le suivant : 1 min à 60°C, augmentation de 20°C/min jusqu'à 200°C, palier de 55 min à 200°C, augmentation de 20°C/min jusqu'à 220°C et palier de 5 min à 220°C.L'intégration des chromatogrammes est faite par rapport à des standards :
1 mélange des différents acides gras courts et moyens (Sigma, St Quentin Fallavier, France) 1 mélange d'acides gras à partir d'huile de soja enrichie en CLA (Laboratoire de Nutrition Lipidique, INRA Dijon)
réf. 1 9405 (Sigma, St Quentin Fallavier, France)
Lipid standard 189-19 (Sigma, St Quentin Fallavier, France).
Les surfaces des chromatogrammes des esters isopropyliques (EIP) sont transformées en surfaces esters méthyliques (EM) par le rapport EIP/EM du C 18:0 et la part des différents acides gras est exprimée par rapport à la somme des EM.
Analyse statistique
En plus des proportions de chaque acide gras ont été calculées les parts cumulées des acides gras courts (<11 C) moyens (11 à 16 C) et longs (>17 C), la somme des acides gras C 18:1, C18:2 et C18:3 ainsi que les rapports C10:0/C10:1, C14:0/C14:1, C15:0/C15:1, C16:0/C16:1, C17:0/C17:1,
PARTIE EXPERIMENTALE
C18:0/C18:1 et C20:0/C20:1. Les acides gras ayant une proportion moyenne de moins de 0,05%
de la somme des EM considérés comme traces ne sont pas analysées statistiquement.
Les données sont traitées avec une analyse de variance par la procédure MIXED du logiciel SAS (SAS lnst., lnc., Cary, NC) dont le modèle comporte le facteur étudié concentré amidon et la vache comme facteur contrôlé. L'effet a été testé en utilisant la somme des carrés des écarts de type Ill.
Les valeurs sont exprimées sous forme de moyennes ajustées (ajustées par rapport aux autres facteurs du modèle) et comparées par un test de t de Student.
8.2. Résultats
La composition de la matière grasse du lait en acides gras présents à plus de 0,05% de la somme des esters méthyliques est présentée dans le tableau 44. Les acides gras décelés en traces (<
0,05%) sont: C 13:0antéiso, C 13:0iso, C 14:0antéiso, C 14:0iso, C 15:1, C 16:0iso, C 17:1, C 18:2 9cis 11 cis, C 18:3(n-6), C 20:5(n-3), C 22:0 et C 24:0.
Globalement la matière grasse du lait des vaches ingérant des pommes de terre est plus riche en acides gras courts et moyens(< 17 carbones) et plus pauvre en acides gras longs. (tableau 44).
Tableau 44 : Effet du concentré amidon sur la composition de la matière grasse du lait (% de la MG)
Blé Pdt ETR Effet
AG courts 10,2 11 ,4 1,0 p < 0,01
AG moyens 56,3 58,8 2,2 p < 0,01
AG longs 33,5 29,9 2,5 p < 0,01
Les observations faites sur les différents acides gras confirment les résultats enregistrés pour les différents groupes d'acides gras : la matière grasse des vaches ingérant des pommes de terre contient significativement plus d'acides gras courts et moyens et surtout plus d'acides gras saturés de ce groupe. La matière grasse des laits des vaches ingérant du blé est plus riche en acides gras longs et insaturés même si cet effet n'est pas systématique pour tous les acides gras (tableau 45).
Par ailleurs la proportion plus élevée pour les acides gras insaturés dans la matière grasse des vaches ingérant du blé est indifférente de la nature des isomères cis ou trans.
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Tableau 45 : Effet de la nature du concentré amidon sur le profil de la matière grasse du lait(% de la MG)
PARTIE EXPERIMENTALE
Tableau 46 : Effet de la nature du concentré amidon de la ration sur les rapports des acides gras saturés 1 acides gras monoinsaturés du lait
Rapport Blé Pdt ETR Effet
10:0/10:1 11,2 10,0 1,1 p < 0,01
14:0/14:1 8,2 8,3 0,7 NS
15:0/15:1 154 64 137 p < 0,10
16:0/16:1 14,5 16,6 1,6 p < 0,01
17:0/17:1 5,6 6,1 0,8 P< 0,10
18:0/18:1 0,26 0,30 0,03 P< 0,01
20:0 1 20:1 1,2 2,8 1,9 P< 0,05
La richesse de la matière grasse du lait en acides gras longs insaturés des vaches ingérant du blé est illustrée par le rapport saturé 1 monoinsaturé (tableau 46) systématiquement plus faible pour les acides gras à plus de 15 carbones.