Finalement, nous nous sommes intéressés à l’impact d’une forte dose de 6 Gy de rayonnement ionisant sur la réponse des gènes du BER dans chacune des lignées Gorlin 4 h après irradiation (Figure 27-C).
Dans un premier temps, nous nous sommes concentrés sur les réponses statistiquement significatives entre chaque lignée Gorlin irradiée à 6 Gy et la lignée normale ayant reçue la même dose de RI. Ainsi, l’expression du gène UNG est fortement diminuée dans les fibroblastes Gorlin par rapport aux fibroblastes normaux avec des valeurs allant de 0,22 ± 0,03 (GM01552, p = 2,56E-06) à 0,28 ± 0,03 (GM03300, p =1,27E-05). Le niveau d’ARN messager du gène MYH est aussi réduit dans les lignées primaires Gorlin par rapport à la lignée GM00730. Les valeurs varient de 0,30 ± 0,07 pour la lignée GM01552 (p = 0,0127) à 0,38 ± 0,03 pour la lignée GM03300 (p = 0,0213). En ce qui concerne l’expression d’OGG1, elle varie de 0,34 ± 0,04 (GM03300, p = 0,0008) à 0,53 ± 0,01 (GM01552, p = 0,0164) pour les lignées Gorlin. Le niveau d’expression du gène APE1 diminue drastiquement dans les trois lignées Gorlin par rapport à la lignée normale après une irradiation de 6 Gy (de 0,09 ± 0,01 (GM03300, p = 1,386E-05) à 0,31 ± 0,01 (GM01552, p = 6,34E-05)). Comme pour les résultats obtenus au niveau basal, aucune différence significative n’est retrouvée en ce qui concerne l’expression de la polymérase β. En revanche, une forte diminution est observée dans l’expression de XRCC1 pour toutes les lignées Gorlin. Les valeurs varient de 0,43 ± 0,01 pour la lignée GM03300 (p = 3,1918E-05) à 0,49 ± 0,02 pour la lignée GM02098 (p = 0,0009). Enfin, aucune différence n’est retrouvée dans l’expression du gène de la ligase III exceptée pour la lignée GM01552 (0,48 ± 0,03 ; p = 0,0208).
102 Gène GM00730 GM01552 GM02098 GM03300 0,1Gy /0Gy 2Gy /0Gy 6Gy /0Gy 0,1Gy /0Gy 2Gy /0Gy 6Gy /0Gy 0,1Gy /0Gy 2Gy /0Gy 6Gy /0Gy 0,1Gy /0Gy 2Gy /0Gy 6Gy /0Gy MYH OGG1 APE1 Polβ XRCC1 LigIII
Tableau 4 : Rapports entre les expressions des principaux gènes du BER :
0,1Gy/0Gy ; 2Gy/0Gy et 6Gy/0Gy pour chacune des lignées étudiées respectivement. Ce
rapport permet d’analyser la réparation absolue. Trois expériences indépendantes ont été réalisées (n = 3). Le test de Student a été réalisé afin de déterminer les différences statistiquement significative. Les cases vertes correspondent à une sous-expression. A l’inverse, les cases rouges correspondent à une sur-expression. Enfin, les cases jaunes correspondent à une absence de modulation de l’expression des gènes. Nous avons choisi de représenter dans ce tableau uniquement les gènes présentant un intérêt de par leurs modulations. Les autres gènes étudiés, non présent ici, ne montrent aucune différence d’expression après irradiation.
On s’aperçoit que la sous-expression des acteurs du BER après irradiation touche principalement la lignée normale. Ainsi, les lignées Gorlin paraissent être moins affecté par une exposition aux rayonnements γ.
103
3) Etude de la stimulation de la voie BER par
différentes doses de rayonnements
Nous avons ensuite utilisé ces mêmes données afin d’étudier la stimulation de la voie BER dans chacune des lignées en analysant cette fois ci le rapport lignée irradiée/même lignée non irradiée. A nouveau, nous nous sommes intéressés à trois doses de rayonnements ionisants : 0,1 Gy ; 2 Gy et 6 Gy.
L’impact d’une faible dose d’irradiation de 0,1 Gy a donc été analysé (Tableau 4). Ainsi, APE1 (p = 0,0089), XRCC1 (p = 0,0220) et LigIII (p = 0,0003) sont réduits après irradiation dans la lignée normale. De la même manière, l’expression de la Polβ (p = 0,0081), de XRCC1 (p = 0,0042) et de la LigIII (p = 0,0152) sont réduits après irradiation dans la lignée GM01552. Enfin, l’expression d’OGG1 est significativement diminuée après une faible dose de RI dans la lignée GM03300 (p = 0,0127).
Dans un deuxième temps, l’effet d’une dose standard de 2 Gy a été analysé (Tableau 4). Les gènes MYH (p = 0,0098), APE1 (p = 0,0077), Polβ (p = 0,0089) et LigIII (p = 0,0019) sont réduits après irradiation dans la lignée normale. De la même manière, l’expression de MYH (p = 0,0474), de la Polβ (p = 0,0238) et de XRCC1 (p = 0,0380) est réduite après irradiation dans la lignée GM01552. L’expression de APE1 (p = 0,0153) et de la LigIII (p = 0,0198) est significativement diminuée dans la lignée GM02098 après une irradiation de 2 Gy. Enfin, XRCC1 (p = 0,0309) est sous exprimé après irradiation dans la lignée GM03300.
Enfin, nous avons étudié l’impact d’une forte dose d’irradiation en comparant le résultat obtenu après une dose de 6 Gy par rapport au résultat de la même lignée à un niveau basal (Tableau 4). Ainsi, MYH (p = 0,0263), OGG1 (p = 0,0434), APE1 (p = 0,0280), XRCC1 (p = 0,0019) et LigIII (p = 0,0001) sont réduits après une forte dose d’irradiation dans la lignée GM00730 considéré comme saine. En ce qui concerne la lignée GM01552, les résultats permettent de mettre en évidence la diminution de l’expression de XRCC1 (p = 0,0363). De la même manière, l’expression de APE1 (p = 0,0267) et de XRCC1 (p = 0,0006) est réduite après irradiation dans la lignée GM02098. Enfin, la lignée GM03300 présente une diminution de OGG1 (p = 0,0054) ainsi que de XRCC1 (p = 0,0006) après exposition à une dose de 6 Gy de rayonnement γ.
104
Figure 28 : Le principe de la biopuce plasmide. Des plasmides contenant des
quantités contrôlées de lésions de l’ADN sont incubés en présence d’extrait nucléaire à 0,4 mg/mL et de nucléotides fluorescents. Plus les protéines de réparation spécifiques à un dommage seront présentes, plus ce dernier pourra être réparé et donc mené à l’incorporation de nucléotides fluorescents. Ce test miniaturisé permet la lecture facile du phénotype réparation de l’ADN.
D’après Millau et al. (199).
Extrait nucléaire 0,4 mg/mL Lésions de l’ADN Incorporation de la fluorescence Phénotype de la réparation de l’ADN
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de la lignée normale GM00730. Ainsi, les lignées Gorlin, possédant déjà une défense très faible au niveau basal, paraissent être moins affectées par une exposition aux rayonnements γ.