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Table des matières Introduction

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Academic year: 2021

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Texte intégral

(1)

Table des matières

Introduction ... ... 3

I Trypanosoma cruzi, parasite responsable de la maladie de Chagas ... ... 3

1.1 La maladie de Chagas ... ... ... 3

1.1.1 Une situation sanitaire en progrès mais pas encore maîtrisée dans les pays endémiques ... ... 3

1.1.2 Une situation préoccupante en particulier sur le continent Nord-Américain ... ... ... 3

1.2 Les vecteurs ... ... ... 4

1.2.1 Les modes de transmission ... ... ... 4

1.2.2 Manifestation clinique... ... ... 6

1.3 Des solutions et des traitements existent… mais des efforts restent à réaliser ... ... ... 6

1.3.1 Traitements thérapeutiques ... ... ... 6

1.3.2 Campagne d’éradication des triatomes ... ... ... 7

II Trypanosoma cruzi, un parasite au cycle de vie complexe... ... 8

2.1 Stade épimastigote (figure 15a) ... ... ... 8

2.2 Stade trypomastigote métacyclique (figure 15b) ... ... ... 8

2.3 Stade amastigote (figure 15c) ... ... ... 9

2.4 Stade trypomastigote (figure 15b) ... ... ... 9

III Voie endocytaire de Trypanosoma cruzi ... .... 10

3.1 Généralités chez les mammifères ... ... ... 10

3.2 Voie endocytaire chez T. cruzi ... ... 12

3.2.1 Organisation ultra structurale de l’endocytose chez les trypanosomes ... ... ... 12

3.2.2 Les différents types de mécanismes d’endocytose ... ... ... 20

IV La glycosylation des protéines ... . ... 24

4.1 La N-glycosylation ... ... ... 24

4.1.1 Généralités ... ... ... 24

4.1.2 La voie du mannose-6-phosphate ... ... ... 26

4.2 La O-glycosylation ... ... ... 26

V Les lectines animales ... ... 33

5.1 Les lectines de type C ... ... ... 34

5.1.1 Mise en évidence ... ... ... 34

5.1.2 Evolution du domaine CTLD ... ... ... 35

5.1.3 Conformation du domaine ... ... ... 36

Résultats ... .. 42

(2)

II Localisation des glycoprotéines reconnues par la TL et la GSLII chez

Trypanosoma cruzi ... . .. 44

2.1 Localisation des glycoprotéines reconnues par la TL par microscopie optique ... ... ... 44

2.2 Localisation des N-glycanes reconnus par la GSLII chez Trypanosoma cruzi ... ... ... 46

2.3 Localisation des carbohydrates reconnus par la TL par microscopie électronique ... ... ... 46

III Identification par spectrométrie de masse des glycoprotéines fixées par la TL

et la GSLII ... ... ... 48

3.1 Analyse statistique sur les protéines identifiées ... ... ... 48

3.1.1 N-glycosylation ... ... ... 48

3.1.2 Comparaison des profils protéiques enrichis par les deux lectines ... ... ... 48

3.1.3 Classement des protéines identifiées selon leur fonction et leur analyse comparative à deux études protéomiques sur Trypansoma cruzi ... ... ... 49

3.2 Analyse des protéines hypothétiques ... ... ... 51

IV Caractérisation de la C-type lectin-like chez Trypanosoma cruzi ... . ... 53

4.1 Caractérisation des domaines CTLD de TcCLB.503855.50 ... ... ... 53

4.2 Expression et localisation de la lectine de type C (TcCLB.503855.50) chez Trypanosoma cruzi... .. ... 54

4.3 Caractérisation des 3 domaines CTLD de la lectine de type C (TcCLB.503855.50) ... ... ... 55

V Caractérisation des C-type lectin-like chez Trypanosoma brucei ... . ... 58

5.1.2 Caractérisation des domaines lectines ... ... ... 60

5.1.3 Organisation génomique des familles de lectine chez Trypanosoma brucei brucei ... ... ... 60

Discussion ... ... 69

I Débat sur la spécificité des lectines ... ... 69

II Identification protéomique des glycoprotéines de Trypanosoma cruzi enrichies

via la TL et la GSLII ... ... .... 71

III Association des N-glycanes complexes de type pNAL avec la voie endocytaire

chez Trypansoma cruzi et Trypanosoma brucei ... ... ... 73

IV Rôle des N-glycanes de type pNAL chez Trypanosoma cruzi et Trypanosoma

brucei brucei ... ... ... 74

V Rôle potentiel des lectines de type C chez Trypanosoma cruzi et Trypanosoma

brucei ... ... ... 78

(3)

Matéries et méthodes ... . .. 83

I- Culture des parasites ... . .. 83

1.1- Trypanosoma cruzi ... ... ... 83

1.1.1 Epimastigotes ... ... ... 83

1.1.2 Métacycliques trypomastigotes ... ... ... 83

1.1.3 Trypomastigotes ... ... ... 83

1.1.4 Amastigotes ... ... ... 84

2- Trypanosoma brucei brucei ... ... 84

2.1 Forme sanguicole... ... ... 84

2.2 Suivi de la croissance des parasites mutants sous ARN interférence en souris ... ... ... 84

II- Observation en microscopie optique à épifluorescence ... . ... 84

1- Microscopie optique à épifluorescence ... ... ... 84

2- Microscopie électronique ... ... ... 85

3- Endocytose de la transferrine conjuguée ... ... ... 86

III- Travaux sur les protéines ... ... 86

1- Western Blot ... ... ... 86

2- Lectine blot ... ... ... 86

3- Production des protéines recombinantes ... ... ... 87

3.1 Construction des plasmides d’expression ... ... ... 87

3.2 Expression et purification des protéines recombinantes ... ... ... 87

IV Enrichissement des glycoprotéines chez Trypanosoma cruzi ... ... 88

V Identification des protéines par LC-MS

2

... . ... 89

VI Traitement à la PNGase F ... ... 89

VII Production des anticorps... . ... 90

VIII Analyse bioinformatique des protéines d’intérêt ... . ... 90

IX Travaux génomiques ... ... 90

1- Etiquetage des lectines ... ... ... 90

2- Mutagenèse dirigée ... ... ... 91

3- Southern Blot ... ... ... 92

4- Construction pour l’invalidation des différents groupes de gènes de lectines par recombinaison ... ... 92

Références bibliographiques

Annexe

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