Exploration du métabolisme lipidique

Exploration du métabolisme lipidique

lipidique

Pr. Layachi Chabraoui

Faculté de Médecine et de Pharmacie de Rabat

Cours de 2ème année de Médecine 2010-2011

1- Lipides et lipoprotéines

• Lipides plasmatiques:

– Cholestérol, – Triglycérides – Phospholipides

Insolubles dans l’eau

– Phospholipides

• Apoprotéines: AI, AII, B₄₈, B₁₀₀, CI, CII, CIII….

S’associent aux lipides et avec les Phospholipides permettent la solubilisation de TG et du CT

LIPOPROTEINES

1-1- Structure des lipoprotéines

CE Phospholipides P

Cholestérol libre ( CL)

TG CE

P

1-2-Classification des lipoprotéines

• Ultracentrifugation:

Chylomicrons VLDL

LDL HDL

Densité

< 0,99

0,99 -1,006 1,019-1,063 1,063- 1,21

Lipides 98% (TG 90%) 90% (TG 60%) 75% (CT 50%) 55% (CT 45%)

Protéines Apo B48,A,C Apo B, D, E Apo B100 Apo AI, (AII)

• Electrophorèse:

HDL 1,063- 1,21 55% (CT 45%) Apo AI, (AII)

- +

Dépôt

Chylomicrons

Pré β

lipoprotéines

α

lipoprotéines β

lipoprotéines

Composition des lipoprotéines

Chylomicrons

TG Phospho Apo CL CE

VLDL

TG

Phospho Apo

1er trim.

2e trim.

3e trim.

LDL

TG Phospho Apo CL CE

HDL

Apo CL CE

Composition des LDL

TG PL

35%

PL

Apo CL CE

35%

10%

10% 20%

25%

1-3- Métabolisme des lipoprotéines

Les Chylomicrons

– formés dans l’entérocyte à partir des produits de la digestion des lipides (AG, monoglycéries,

la digestion des lipides (AG, monoglycéries, lysophospholipides).

– → circulation lymphatique puis sang: Action de la LPL (muscle et tissu adipeux) → AG +

remnants

1-3- Métabolisme des lipoprotéines

Les VLDL

TG endogènes (foie) → circulation sanguine:

action de la LPL et de la LCAT → AG + IDL (densité entre 1,006 et 1,019)

IDL (densité entre 1,006 et 1,019)

Les IDL (remnants) →→→→ captation (récepteurs) et dégradation par le foie

→→→

→ transformation en LDL (lipase hépatique)

1-3- Métabolisme des lipoprotéines

Les LDL

Proviennent des VLDL (IDL)

Riches en cholestérol (transport)

Récepteurs LDL (ApoB/E): foie et autres tissus LDL oxydés: Récepteurs éboueurs (scavenger)

des macrophages

1-3- Métabolisme des lipoprotéines

Les HDL

Chylomicrons

Remnants

LPL

AG +

VLDL

HDL

Cholestérol

Récepteurs AG + IDL

LPL

Transport "reverse"

du cholestérol

Remnants HDL discoïdes

Cholestérol Ester Phospholipides

Cholestérol

HDL₃

HDL₂

AI LCAT

LCAT

Foie

Récepteurs foie

2- Exploration du métabolisme lipidique

Prélèvement

sujet à jeun depuis 12 heures+++

Sérum ou plasma hépariné Sérum ou plasma hépariné

Aspect du sérum Jaune citrin (clair)

Lactescent ou opalescent Réexamen après une nuit à 4°C

2- Exploration du métabolisme lipidique

Dosage des Triglycérides

TG AG + Glycérol

Lipase ATP

Glycérol Kinase

1

Kinase 2

ADP Glycérol P DH

P di OH Acétone Glycérol P

NAD⁺ NADH⁺

3

Mesure DO à 340 nm

2- Exploration du métabolisme lipidique

Dosage du Cholestérol

CE CL Cholesténone

Chol. Estérase Chol. Oxydase +

+ H₂O₂ Formazan réduit

incolore Peroxydase Formazan oxydé

coloré H₂O

Mesure DO

2- Exploration du métabolisme lipidique

Dosage du Cholestérol HDL Méthode indirecte (TP)

• Précipitation des LDL et VLDL (lipoprotéines

contenant l’ApoB) par le sulfate de dextan de haut PM ou par le phosphotungstate de sodium + MgCl₂

• Centrifugation

• Dosage du C-HDL dans le surnageant

Méthodes directes

(Ex: Complexer les lipo non HDL par Ac anti β-lipo)

Le Cholestérol LDL

Calcul par la formule de Friedewald:

C-LDL = CT – (C-HDL + TG/5) en g/l

2- Exploration du métabolisme lipidique

C-LDL = CT – (C-HDL + TG/5) en g/l Condition de validité: TG < 3,5 g/l

Dosage direct: 4 nouvelles méthodes ont été validées en 2005 (Article: Anales de Biologie Clinique)

Valeurs usuelles

• CT: 1,40 à 2 g/l

2- Exploration du métabolisme lipidique

• TG: 0,50 à 1,50 g/l

• C-HDL: 0,40 à 0,65 g/l

• C-LDL: 0,70 à 1,60 g/l

Electrophorèse des lipoprotéines Lipidogramme

• De moins en moins étudié

• Electrophorèse en milieu alcalin qui sépare les

2- Exploration du métabolisme lipidique

• Electrophorèse en milieu alcalin qui sépare les différentes lipoprotéines:

- +

Dépôt

Chylomicrons

Pré β

lipoprotéines 10 à 15%

α lipoprotéines 30 à 35%

β lipoprotéines 50 à 60%

Dosage des Apoprotéines

• Méthodes immunologiques: (Anticorps) Immunoprécipitation en milieu liquide ou

2- Exploration du métabolisme lipidique

Immunoprécipitation en milieu liquide ou sur gel:

ApoAI (HDL): 0,70 à 2 g/l ApoB (LDL): 0,50 à 1,30 g/l Lp (a) (LDL): < 0,30 g/l

Appréciation du risque athérogène

• Rapports:

C-LDL / C-HDL < 3,5 ApoB / ApoAI < 3,5

2- Exploration du métabolisme lipidique

ApoB / ApoAI < 3,5

C-LDL et seuils d’intervention

1,9 g/l si aucun facteur de risque 1,6 g/l si un facteur de risque

1,3 g/l si deux facteurs de risque 1 g/l si pathologie coronarienne

3- Classification des hyperlipoprotéinémies

• ↑ des TG et ou du CT

• ↑ du Cholestérol surtout le C-LDL car athérogène +++

• Hyperlipoprotéinémies secondaires

• Hyperlipoprotéinémies familiales (primaires)

Hyperlipoprotéinémies primaires

Classification Internationale (Fredrickson)

Fréquence Aspect du

sérum CT TG Lipoprot

IIa fréquent Clair +++ ^{N LDL}

IIb fréquent opalescent ++ + LDL,VLDL

IIb III

fréquent rare

opalescent opalescent

++

++

+ ++

LDL,VLDL Broad β

I IV

V

très rare fréquent

rare

lactescent opalescent

lactescent

N ou + N ou + N ou +

+++

++

+++

Chylo VLDL

VLDL Chylo

Classification selon De Gennes Fredrickson

Hypercholestérolémies essentielles

1 ) Forme mineure : expression biologique permanente, manifestations cardiovasculaires occasionnelles

2) Forme majeure : xanthomatose tendineuse hypercholestérolémique familiale (XTHF)

3) Forme monstrueuse de XTHF

IIa

Hyperlipidémies mixtes

CT/TG > 2,5

CT/TG ≤≤≤≤ 2,5 TG/CT _≤≤≤≤ 2,5

Hyperlipidémies mixtes

1) Forme mineure: expression biologique permanente, quelques manifestations cardiovasculaires

2) Forme majeure avec ou sans xanthomatose

IIb III Hypertriglycéridémies majeures

• Formes exogènes dépendantes des graisses (LPL↓)

• Formes endogènes indépendantes des graisses ( glucido- dépendantes ou éthanolodépendantes, (LPL normale)

• Formes exogènes et endogènes

I IV

V

TG/CT > 2,5

CT/TG ≤≤≤≤ 2,5 TG/CT _≤≤≤≤ 2,5

Hyperlipoprotéinémies secondaires

Types selon

Fredrickson CT TG

Pathologies métaboliques Diabète

Insuffisance rénale Hyperuricémies

Syndrome néphrotique

IV ou IIb

IIb ou IV

N ou +

+

+

+

Syndrome néphrotique IIb ou IV + +

Pathologie Hormonale

Hypothyroïdies IIa ou IIb ++ N ou ++

HyperLipoProtéinemies latrogènes

Contraceptifs stéroïdiens Beta-Bloquants

Diurétiques thiazidiques Corticoïdes

IIb ou IV IV IIb IV ou IIb

N ou + N

+ N ou +

+ + + +

Hypolipoprotéinémies

Secondaires

• Hyperthyroïdies

• Malnutrition

• Malnutrition

• Insuffisance hépatocellulaires Primaires

• Maladie de Tangier: absence des α lipo

• Maladie de Bassen Kornzweig: Abétalipo

Sphingolipidoses

• Anomalies héréditaires du métabolisme des sphingolipides qui sont des lipides complexes tissulaires: système nerveux

• Structure de base = sphingosine: alcool

• Structure de base = sphingosine: alcool aminé à 18 atomes de carbone

• La substitution de la fonction amine en 2 par un AG en C18 à 26 → Céramide

• La substitution de la fonction alcool en 1 donne 4 types de composés:

1. Sphingomyélines =

Céramide lié au phosphorylcholine 2. Cérébrosides =

Céramide + Oligosaccharide 3. Sulfatides =

Cérébrosides sulfatés 4. Gangliosides =

4. Gangliosides =

Cérébrosides + molécules d’acide sialique

Ces sphingolipides sont catabolisés par des enzymes spécifiques.

Le déficit d’une enzyme entraîne l’accumulation du

sphingolipide non dégradé et détermine une sphingolipidose

Sphingolipidose Enzyme déficient Sphingolipide accumulé

GM1 Gangliosidose GM2 Gangliosidose

Tay-Sachs Sandhof

Maladie de Fabry

β Galactosidase

Hexosaminidase A H^ases A et B

α Galactosidase A

GM1 ganglioside GM2 ganglioside

Globotriaosylcéramide Maladie de Gaucher

Maladie de Farber Leucodystrophie métachromatique Maladie de Krabe Maladie de

Niemann-Pick

Glucocérébrosidase Céramidase acide Arylsulfatase A

Galactosylcéramidase

Sphingomyélinase

Glucosylcéramide Céramide

Sulfatide

Galactosylcéramide Sphingomyéline