IMPORTANCE DE L’EXAMEN DU SEDIMENT URINAIRE CHEZ LES PATIENTS SOUFFRANT D’UNE PATHOLOGIE GLOMERULAIRE AU CNHU-HKM

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REPUBLIQUE DU BENIN

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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI I*******

CENTRE AUTONOME DE PERFECTIONNEMENT

RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION

POUR L’OBTENTION DU DIPLOME DE LICENCE PROFESSIONNELLE THEME

JURY

Pr Dorothée A. KINDE-GAZARD : Présidente Dr Jean Robert KLOTOE : Membre Dr Victorien DOUGNON : Membre

Année académique : 2016-2017 1^ère Promotion

Présenté et soutenu le 5 décembre 2017 par :

David Chabi I. BIAOU

Tuteur : Sous la supervision de :

Département :

Génie de Biologie Humaine

Option : Analyses Biomédicales

IMPORTANCE DE L’EXAMEN DU

SEDIMENT URINAIRE CHEZ LES PATIENTS SOUFFRANT D’UNE PATHOLOGIE

GLOMERULAIRE AU CNHU-HKM

Monsieur Augustin KOUKPOLIYI

Ingénieur biomédical Surveillant du Laboratoire de Parasitologie du CNHU-HKM

Prof. Dorothée Akoko KINDE GAZARD

Professeur titulaire de Parasitologie-Mycologie Chef Service adjointe du service de Microbiologie du

CNHU-HKM

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Importance du sédiment urinaire chez les patients souffrant d’une pathologie glomérulaire au CNHU-HKM

REPUBLIQUE DU BENIN

*-*-*-*-*

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

-*-*-*-*-*-

UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI -*-*-*-*-*-

ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI -*-*-*-*-*-*-

CENTRE AUTONOME DE PERFECTIONNEMENT -*-*-*-*-*-*-

DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE -*-*-*-*-*-*-*-*-

1^ère PROMOTION DE LICENCE PROFESSIONNELLE

DIRECTEUR DE L’EPAC Pr Mohamed SOUMANOU

DIRECTEUR ADJOINT DE L’EPAC Pr Clément AHOUANNOU

DIRECTEUR DU CAP Pr Christophe AWANTO

CHEF DU DEPARTEMENT : Dr S. Pascal ATCHADE

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LISTE DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

I- ENSEIGNANTS PERMANENTS

N° NOM et Prénoms Matières enseignées

1. AHOYO Théodora Angèle Microbiologie Médicale /Santé Publique et Hygiène Hospitalière

2. AKOWANOU Christian Physique

3. AKPOVI D. Casimir Biologie cellulaire/Physiologie Humaine/Biochimie Métabolique

4. ALAMOU Eric Biostatistique

5. ALITONOU Guy Alain Chimie Organique 6. ANAGOA. Eugénie Biochimie Clinique 7. ATCHADE Pascal Parasitologie/Mycologie

8. BANKOLE Honoré S. Bactériologie Médicale et Notion de Virologie 9. DOUGNON Victorien Déontologie Médicale/Méthodologie de la Recherche 10. FAH Lauris Histologie Générale /Immuno-hématologie

11. FANOU Brice Assurance-Qualité en Biologie Médicale 12. HOUNSOSSOU Hubert Anatomie Générale

13. KLOTOE Jean Robert Equipements Biomédicaux/Santé et Sécurité au laboratoire, Cytologie sanguine et Hémostase 14. LOKO S. Frédéric Biochimie Analytique

15. LOZES Evelyne Immunologie Générale/Immunopathologie Générale 16. SEGBO A. G. Julien Biochimie Structurale/Biologie Moléculaire/ Biologie

Moléculaire Appliquée

17. SENOU Maximin Hémopathies/Histologie Appliquée 18. TCHOBO Fidèle Paul Chimie Organique

19. YADOULETON Anges Entomologie Médicale 20. YEHOUENOU Boniface Microbiologie Générale II- ENSEIGNANTS NON PERMANENTS

N° NOM et Prénoms Matières enseignées

1. AGBANNON Tiburce Gestion des entreprises et gestion hospitalière 2. AGOSSOU Gilles Législation et Droit du Travail

3. DESSOUASSI D. Noël Biophysique des Solutions 4. HOUNNON Hippolyte Mathématiques

5. KOUNASSO Gabriel Informatique Générale

6. YOVO K. S. Paulin Pharmacologie Générale/Toxicologie Générale

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ePrésenté et soutenu par David BIAOU i DEDICACE

 A DIEU tout puissant, toi qui par amour as voulu que je sois aujourd’hui à ce stade, je te présente le fruit de tes grâces.

 A mon Feu père Gabriel BIAOU et ma mère Madeleine BIAOU :

Aucun mot ne saurait exprimer ma profonde gratitude et mes sincères reconnaissances envers vous ! Vos prières et vos sacrifices m’ont comblé tout au long de mon existence. Puisse DIEU vous bénir ! Amen !

 A mon épouse Elisabeth BIAOU. Pour avoir consenti tant de sacrifices, veuilles trouver à travers ce travail l’accomplissement de l’un de tes souhaits.

 A mes enfants Nadine, Sergio, Aurel, Esther, Prince : ceci pour vous inciter à donner le meilleur de vous-mêmes afin de faire mieux que moi.

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Présenté et soutenu par David BIAOU ii REMERCIEMENTS

- A mes chefs : Professeur Sévérin ANAGONOU, Professeur Dorothée KINDE- GAZARD, Professeur Aurore HOUNTO, Professeur Dissou AFFOLABI, Docteur Yollande SISSINTO, Docteur Abel WAKPO.

- Aux surveillants du laboratoire de Microbiologie du CNHU-HKM : Monsieur Augustin KOUKPOLIYI et Madame Bernadette EKPANGBO.

- Au personnel des cliniques universitaires de Pédiatrie et de Néphrologie/Hémodialyse, notamment, Docteur Francis LALYA, Docteur Bruno AGBOTON, Docteur Jacques VIGAN et Docteur Eric AYADJI.

- A tous les enseignants de notre département et tous les moniteurs des travaux pratiques ;

- A tout le personnel du Centre Autonome de Perfectionnement, - A mes collègues du service de Microbiologie du CNHU-HKM ; - A tous mes camarades de promotion.

- A mes tantes et oncles en guise de témoignage ;

- A mes frères et sœurs pour votre attention et vos conseils ; - A Madame Angèle BIAOU, Pour son soutien sans faille.

- A monsieur Bouraïma BELLO. Infiniment merci

- A tous ceux qui de près ou de loin ont contribué à la réalisation de ce travail Recevez mes profondes gratitudes.

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Présenté et soutenu par David BIAOU iii HOMMAGES

 A notre superviseur Pr Dorothée Akoko KINDE-GAZARD

Recevez, professeur, toute notre profonde gratitude à travers ce travail que vous avez accepté de diriger avec abnégation, rigueur scientifique, professionnalisme, disponibilité constante et compétence. Vous n'avez ménagé aucun effort pour faire aboutir ce travail dans une parfaite ambiance familiale malgré vos multiples occupations. Sincère merci à vous.

 A notre tuteur Augustin KOUKPOLIYI

Nous vous remercions d’avoir accepté de conduire ce travail. Nous avons pu apprécier vos grandes qualités humaines et professionnelles ; la richesse et la clarté de vos connaissances qui font de vous un tuteur estimé par tous. Veuillez recevoir cher tuteur, l’expression de notre respect et de notre profonde gratitude.

 Au Président du jury

C’est un véritable honneur que vous nous faites en acceptant de présider le jury chargé de juger notre travail malgré votre agenda très chargé. Nous vous remercions de votre enseignement et nous vous sommes très reconnaissant de bien vouloir porter intérêt à ce travail. Convaincu que ce travail sera rehaussé par vos critiques et suggestions, nous vous prions de trouver ici Monsieur le Président du jury, l'expression de nos sincères remerciements.

 Aux Membres du jury

En acceptant de juger ce travail, vous manifestez la volonté de faire avancer la science en général et la biologie humaine en particulier. Vos critiques et remarques serviront à améliorer ce travail dans le fond et dans la forme puis ouvriront la voie à d’autres recherches complémentaires dans le domaine. Recevez ici l’expression de notre profonde gratitude.

..

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Présenté et soutenu par David BIAOU iv

Liste des abréviations acronymes et sigles ASLO Anticorps antistreptolysine O

CNHU-HKM Centre National Hospitalier et Universitaire Hubert Koutoukou MAGA CPU Collège Polytechnique Universitaire

Da Dalton

ECBU Examen cytobactériologique urinaire EPAC Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi, FSS Faculté des Sciences de la Santé

G.R. Globules rouges

HIV Human Immunodeficiency Virus

HLM hématies et leucocytes par minute HPF

I.S.B.A Institut des Sciences Biomédicales Appliquées IC intervalles de confiance

INMeS Institut National Médio-Sanitaire

Mg Milligramme

Ml Millilitre

mm³ Millimètre cube

n Effectif

p Probabilité

PAP

pH Potentiel hydroélectrique

pK

RCF Relative centrifugal force SDW Sérodiagnostic de Widal-Felix

TPHA Treponema Pallidum Haemagglutination Assay VDRL Veneral Diseases Research Laboratory

% Pourcentage

°C Degré Celsius

µl Microlitre

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Présenté et soutenu par David BIAOU v Liste des tableaux

Tableau I : Répartition des sujets en fonction du pH des urines ... 20

Tableau II : Répartition des sujets en fonction des caractéristiques biochimiques des urines à la bandelette réactive ... 21

Tableau III : Répartition des sujets en fonction de la cristalliurie et de la cylindriurie ... 22

Tableau IV : Répartition des sujets en fonction de la présence de cellules sanguines ... 22

Tableau V : Répartition des sujets en fonction des caractéristiques bactériologiques ... 22

Tableau VI Répartition des sujets en fonction des anomalies tubulaires ... 23

Tableau VII : Comparaison des deux techniques ... 23

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Présenté et soutenu par David BIAOU vi Liste des figures

Figure 1 : Vue microscopique d’un cylindre muqueux (400X) ... 4

Figure 2 : Vue microscopique d’un cylindre granuleux (400X) ... 5

Figure 3 : Vue microscopique d’un cylindre cellulaire (400X) ... 5

Figure 4 : Vue en microscopie à contraste de phase de quelques cristaux dans les urines (400X) ... 6

Figure 5 : Procédure de la bandelette réactive ... 13

Figure 6 : Composantes de contraste de phase sur un microscope ... 16

Figure 7 : Répartition des sujets selon le sexe ... 20

Figure 8 : Répartition des sujets selon l’âge ... 20

Figure 9 : Répartition des sujets selon la densité des urines ... 21

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Présenté et soutenu par David BIAOU vii RESUME

Objectif : Le sédiment urinaire permet de mettre en évidence les différents éléments dont la présence en nombre témoigne d’une pathologie ou non chez un être humain. Sa pratique a été abandonnée dans nos centres hospitaliers.

Méthodes : La présente étude prospective a pour objectif de relancer cette technique au Centre Hospitalier Universitaire de Cotonou du 1^er août au 31 octobre 2017. Vingt échantillons d’urines provenant de patients des services d’hémodialyse, et l’urologie et de la pédiatrie ont été examinés en microcopie et par bandelette réactive.

Résultats : Le sédiment urinaire a permis de mettre en évidence des cristaux urinaires dans 45% des cas, des cylindres dans 40% des cas dont 89% étaient granuleux et 11% hyalins. Il a été également révélé des cellules tubulaires, des cellules transitionnelles superficielles et profondes dans les proportions respectives de 45%, 40% et 5% signalant une maladie rénale probable chez les patients. La mise en œuvre de cette technique dans notre laboratoire permettra sans nul doute de confirmer le diagnostic clinique effectué par les praticiens hospitaliers. L’utilisation des bandelettes réactives doit être associée à l’examen des sédiments urinaires.

Conclusion : L’examen du sédiment urinaire est une technique simple, efficace et utile au diagnostic des glomérulonéphrites en milieu hospitalier.

Mots clés : sédiment urinaire, glomérulonéphrite, cristaliurie, cylindriurie Abstract

Background: Urinary sediment allow the detection of different particles which presence in abnormal level can help diagnosis of kidney pathology, in patient admitted in hospital. Its practices had been abandoned in some health centers for unnamed reasons.

Methods: The present prospective study aims to restart this technique in the teaching hospital of Cotonou and had been undertaken from August 1^st toOctober31^st2017. Twenty samples of urines collected from patients of hemodialysis, urology and pediatrics services of the hospital had been examined by microcopy and reactive strips.

Results: Urinary sediment showed cristalliury in 45% cases, cylindriury in 40% cases with 89% granulous and 11% hyalin. Tubular cells, deep and superficial transition cells had been identified in the respective proportions of 45%, 40% and 5% showing probable kidney diseases among our patients. The starting of this technique in our laboratory should help better confirm clinical diagnosis made by hospital patricians. Reactive strips should be associated to urinary sediments.

Conclusion: Urinary sediment is a simple and efficient technique that is used to diagnosis glomerulonephritis in health-care setting.

Keywords: Urinary sediment, glomerulonephritis, cristaliury, cylindriury

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viii Présenté et soutenu par David BIAOU

SOMMAIRE

INTRODUCTION ... 1

I- GENERALITES ... 2

II- CADRE, MATERIEL ET METHODE D’ETUDE ... 10

III- RESULTATS ... 20

IV- DISCUSSION ... 25

CONCLUSION ... 30

SUGGESTIONS ... 32

REFERENCES ... 34

TABLE DES MATIERES ... 35

ANNEXES ... 38

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INTRODUCTION

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1 Présenté et soutenu par David BIAOU

INTRODUCTION

Le sédiment urinaire est un examen des urines qui consiste à mettre en évidence par une technique appropriée les différents éléments dont la présence en nombre témoigne d’une pathologie ou non chez un être humain. Contrairement à l’HLM (hématies et leucocytes par minute) ou compte d’ADDIS qui ne renseigne que sommairement sur l’état des reins, l’examen du sédiment urinaire fournit un éventail plus large d’informations complémentaires dans le diagnostic et la prise en charge des pathologies glomérulaires en particulier et de tout l’appareil génito-urinaire en général.

Sa mise en œuvre passe par l’examen biochimique à la bandelette réactive et se termine par l’examen microscopique en contraste de phase et à la lumière polarisée.

L’intérêt que suscite l’annonce de la possibilité de réalisation de cet examen dans notre structure hospitalière chez les praticiens hospitaliers, nous a inspiré à initier, avec l’accord de notre hiérarchie, une recherche préliminaire sur cette technique non encore maitrisée au Bénin.

L’objectif principal est de préciser l’importance de cette technique de diagnostic chez les patients souffrant d’une pathologie glomérulaire au CNHU-HKM.

Plus spécifiquement, nous allons :

- déterminer par cette technique les troubles urinaires chez les patients ; - comparer les résultats à l’examen clinique.

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GENERALITES

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I- GENERALITES

1.1. Sédiment urinaire

Le sédiment urinaire est l’ensemble des éléments figurés présents dans l’urine identifiés par l’examen microscopique du culot de centrifugation [FOGAZZI, 2010].

Les principaux constituants du sédiment urinaire sont : les hématies, les leucocytes, les cellules épithéliales, les diverses variétés de cylindres (hyalins, granuleux, leucocytaires, épithéliaux, cireux, hématiques, graisseux), les cristaux de tous genres. L’étude du sédiment urinaire, essentielle dans l’exploration d’une affection rénale et de la voie excrétrice urinaire, peut être faite de façon qualitative et quantitative.

1.2. Pathologie glomérulaire

Encore appelée glomérulonéphrite, une pathologie glomérulaire est une affection rénale qui peut être aiguë ou chronique. Les néphropathies glomérulaires ont une présentation et une évolution aiguë et/ou chronique. Elles sont parfois secondaires à une maladie générale (infection, maladie métabolique, maladie auto-immune, etc.). Mais, l’atteinte rénale peut être isolée.

1.3. Cellules du sédiment urinaire

Les cellules du sédiment urinaire peuvent appartenir au système réticulo-endothélial (leucocytes, macrophages) ou au système épithélial de recouvrement de l’appareil urinaire. Les cellules peuvent provenir du rein (glomérules), de l’épithélium et des voies urinaires basses.

Le milieu urinaire n'est pas favorable au maintien des structures cellulaires. La majorité des cellules subit des changements (dégénérescence, rupture...) qui font que l'aspect urinaire de la cellule peut être très différent de l'original. Et nous ne parlons pas des pathologies qui modifient profondément l'aspect cellulaire comme l'inflammation, la métaplasie, la néoplasie, etc.

1.3.1. Leucocytes

Les leucocytes ou globules blancs désignent l'ensemble des cellules incolores du sang. Ils représentent l’un des éléments figurés. Ces cellules appartiennent au système réticulo- endothélial. Les leucocytes se divisent, selon l'aspect du noyau, en deux catégories : les cellules mononuclées et les polynucléaires. Les lymphocytes et monocytes sont les principales cellules mononuclées tandis que les polynucléaires se subdivisent en neutrophiles, éosinophiles et

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basophiles. La présence de ceux-ci est souvent reliée à une pathologie sous-jacente car ces cellules ne sont pas courantes dans un sédiment urinaire normal.

1.3.2. Macrophages

Le macrophage est, après le fibroblaste, la cellule la plus abondante du tissu conjonctif.

Le macrophage activé est difficile à décrire parce que son aspect est très variable. Souvent, cette cellule se présente avec une multitude d'inclusions qui masquent ses propres structures. Les inclusions sont de plusieurs types, mais la gouttelette lipidique est la plus fréquente. Les macrophages se rencontrent souvent dans des inflammations aiguës. Un macrophage chargé de gouttelettes de gras biréfringentes est nommé, dans le contexte de l'analyse d'urine, un corps ovalaire graisseux.

1.3.3. Monocytes

Le nombre de monocytes urinaires est augmenté dans la néphrite interstitielle aiguë allergique, la glomérulonéphrite rapidement évolutive. Dans les nécroses, ceux-ci sont rares ou absents. Ces résultats ont été obtenus avec des colorations impliquant des anticorps monoclonaux.

1.3.4. Erythrocytes

L’érythrocyte ou globule rouge est le plus important (en nombre) de la lignée rouge des éléments figurés du sang. Normalement, on retrouve moins de 1,5 millions de globules rouges dans une urine de 24 heures. Ce nombre représente un décompte inférieur à 5 globules rouges par champ microscopique avec un objectif 40X. L'hématurie significative, c'est-à-dire un décompte supérieur à 5 globules rouges par champ microscopique, confirmée sur plus d'un spécimen, est normalement associée à une pathologie des voies urinaires. A l'examen microscopique, on peut distinguer deux types d'hématurie.

1.3.4.1. Hématurie isomorphique

Elle se caractérise par des érythrocytes normaux, c'est-à-dire légèrement colorés avec, la forme typique du globule rouge. Cette forme d'hématurie est le plus souvent associée à un problème des voies urinaires basses.

1.3.4.2. Hématurie dysmorphique

Le deuxième type d'hématurie, que l'on appelle dysmorphique ou glomérulaire, se caractérise par la présence d'une anisocytose très marquée, et surtout, d'un pourcentage élevé

(17)

(>40%) de dysmorphocytose. La dysmorphocytose se reconnaît par des formes bizarres et des protubérances de la membrane des érythrocytes.

1.4. Cylindres

Les cylindres sont composés d'une matrice homogène formée essentiellement de l’uromoduline ou mucoprotéine de Tamm-Horsfall, un polypeptide glycosylé de 616 acides aminés, de 14-15 nm de diamètre et contenant 30% d’hydrates de carbone. Cette protéine est produite dans la branche ascendante de l’anse de Henlé et dans la partie proximale du tube distal. Elle se compose de filaments qui s’assemblent en un réseau de mailles irrégulier et tridimensionnel («filet de pêche allongé»). Les monomères s’agrègent et se désagrègent en fonction du pH et de la force ionique. C’est l’une des rares protéines qui est produite par le rein et éliminée dans l’urine. C’est la protéine dominante dans l’urine normale avec une excrétion de 50-100 mg/ jour. Elle est en partie réabsorbée par le rein : sa concentration dans le plasma est de 50 à 350 µg/L. Son rôle physiologique et son propre mécanisme de contrôle ne sont pas très bien connus. Il joue sûrement un rôle dans le transport du sodium, dans la régulation de la réabsorption de l’eau et la protection contre les bactéries de l’épithélium tubulaire.

Des éléments figurés (érythrocytes, leucocytes, cellules épithéliales rénales), des protéines plasmatiques et des lipides peuvent être incorporés ou mélangés à la protéine de Tamm-Horsfall. Les cylindres sont les éléments du sédiment urinaire qui jouent le rôle le plus important pour le diagnostic clinique des maladies rénales. On distingue trois types de cylindres :

1.4.1. Cylindres muqueux, appelés aussi cylindres hyalins

Ils sont composés essentiellement de la mucoprotéine de Tamm-Horsfall.

Figure 1 : Vue microscopique d’un cylindre muqueux (400X) Source : [Fogazzi, 2014]

1.4.2. Cylindres contenant des protéines plasmatiques

Les protéines proviennent en majorité de la filtration glomérulaire mais aussi de la sécrétion tubulaire. Ce sont les cylindres cireux ou granuleux.

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Figure 2 : Vue microscopique d’un cylindre granuleux (400X) Source : [Fogazzi, 2014]

1.4.3. Cylindres cellulaires

Ils sont composés de cellules : érythrocytes, leucocytes ou cellules rénales, incorporées à la mucoprotéine de Tamm-Horsfall.

Figure 3 : Vue microscopique d’un cylindre cellulaire (400X) Source : [Fogazzi, 2014]

1.5. Les cristaux

On trouve régulièrement des cristaux dans l'urine après un certain temps et lorsqu'elle s'est refroidie. Il est important de distinguer de tels cristaux des cristaux observés dans divers états pathologiques.

1.5.1. Cristaux normaux

L'observation de cristaux normaux a une signification clinique quasi nulle :

- dans l'urine acide : acide urique, urate amorphe, oxalate de calcium

- dans l'urine alcaline : triple phosphate (ammonium magnésium), phosphate de calcium, carbonate de calcium et biurate d'ammonium.

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1.5.2. Cristaux pathologiques

Les cristaux pathologiques sont observés dans l'urine acide et neutre :

- Tyrosine : ces cristaux sont rares, incolores à jaune-brun, en forme d'aiguilles avec un aspect lisse.

- Leucine : ces cristaux présents dans l'urine acide, ils sont ronds avec des stries concentriques, jaune-brun avec parfois un aspect graisseux.

- Cystine : ces cristaux sont rares et se trouvent dans l'urine acide sous forme de plaques incolores de forme hexagonale avec en général deux côtés plus longs ou plus courts que les quatre autres. Ils sont souvent superposés et forment des rosettes ; présents chez des patients ayant une anomalie métabolique touchant le transport rénal de plusieurs acides aminés comme la cystine, la lysine, l'arginine et l'ornithine.

- Cholestérol : ces cristaux sont observés lors de protéinurie importante. Ce sont des plaques transparentes avec des bords et des angles bien marqués.

- Cristaux dus aux médicaments : ils sont fréquents lors de traitement à la sulfadiazine (en faisceaux), à l'acyclovir (biréfringents en forme d'aiguilles) et à la Vitamine C.

Beaucoup d'autres médicaments peuvent être à l'origine de cristaux de formes diverses.

Figure 4 : Vue en microscopie à contraste de phase de quelques cristaux dans les urines (400X)

Source : [Fogazzi, 2014]

1.6. Principaux types de sédiment

L’examen microscopique des culots de centrifugation permet d’établir une typologie des sédiments urinaires selon les pathologies. On distingue :

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1.6.1. Sédiment de néphropathie non spécifique

On observe typiquement les cylindres cellulaires, granuleux, cireux, hyalins ou cellules tubulaires. Ce type de sédiment est le plus courant. Il indique un problème sans plus de spécifications. On le rencontre souvent dans des cas d'insuffisance rénale.

1.6.2. Sédiment néphrotique

Ce type de sédiment s’observe lorsque la protéinurie est élevée (>3,5 g/j) et en cas de lipidurie importante. La présence de corps ovalaires graisseux, de corps biréfringents libres et de cylindres graisseux sont caractéristiques de ce sédiment.

Il est difficile d'évaluer la protéinurie à partir de la lecture à la bandelette. Un moyen consiste à mettre en parallèle la couleur de l'urine (pâle/ diluée, foncée/ concentrée) et la protéinurie. Ainsi une protéinurie moyenne avec un spécimen pâle représente une protéinurie importante. La lipidurie peut, selon le cas, se présenter comme des gouttelettes de lipides libres (corps biréfringents), ou incluses dans des cellules (corps ovalaires graisseux), ou dans un cylindre (cylindre graisseux).

1.6.3. Sédiment néphrétique

Ce type de sédiment se caractérise par la présence d'une hématurie glomérulaire avec un degré de dysmorphocytose élevée. Un sédiment qui montre une hématurie de ce type et une protéinurie devrait être balayé pour la recherche de cylindres érythrocytaires et hématiniques.

Avec la lumière polarisée, l'identification de la lipidurie est habituellement une tâche facile.

Cette présence est un indice important pour l'identification des cylindres érythrocytaires, car on les retrouve souvent ensemble dans des pathologies glomérulaires à sédiments mixtes.

1.6.4. Sédiment de nécrose tubulaire aiguë ischémique

Ce type de sédiment se caractérise par la présence de pigments hémoglobinuriques (ex.

méthémoglobines) dans la granulation des cylindres (pigmentés, Dirty Brown Cast).

Normalement, une nécrose ne donne pas uniquement des cylindres pigmentés mais s'accompagne d'une cellularité tubulaire importante ainsi que de cylindres cellulaires et cireux.

Les cylindres cireux sont normalement absents dans les premiers jours de l'insuffisance rénale aiguë.

1.6.5. Sédiment de néphrite interstitielle aiguë

La caractéristique principale de ce sédiment est la présence de cylindres leucocytaires et cellulaire (cellules tubulaires, fragments épithéliaux, leucocytes, bactéries).

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1.6.6. Sédiment de cystite

Une caractéristique de ce sédiment est l'adhérence des bactéries aux cellules transitionnelles et les leucocytes. L'image générale est celle d'une inflammation aiguë, sans atteinte rénale.

1.6.7. Sédiment de contamination

Ce type de sédiment est presque toujours retrouvé chez la femme. La présence de cellules pavimenteuses abondantes peut invalider les résultats des leucocytes et du sang, mais la présence de cylindres reste significative.

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CADRE, MATERIEL ET

METHODE D’ETUDE

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II- CADRE, MATERIEL ET METHODE D’ETUDE

2.1. Cadre d’étude

2.1.1. Cadre institutionnel

L’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi, ex CPU, est un établissement public à caractère scientifique. Il comporte onze (11) départements répartis en deux secteurs :

 Le secteur industriel

- Département de génie Electrique

- Département de génie Mécanique et Energétique - Département de génie Civil

- Département de génie informatique et télécommunication - Département de la Maintenance Biomédicale et Hospitalière - Département de Génie de la Technologie Alimentaire - Département de Génie chimique et procédés

 Le secteur biologique :

- Département de Génie de Biologie Humaine - Département de Génie de l’Environnement

- Département de Génie de l’Imagerie Médicale et de la Radiobiologie - Département de Production et Santé Animales

2.1.2. Cadre technique

Notre stage s’est déroulé dans le service de Microbiologie, plus précisément au Laboratoire de Parasitologie-Mycologie du Centre National Hospitalier Universitaire Hubert Koutoukou MAGA de Cotonou dans la période allant du 16 Avril au 16 août 2017.

Le CNHU-HKM est situé au niveau tertiaire de la pyramide sanitaire et construit sur une superficie de 10 hectares avec une capacité d’accueil de 642 lits au 31 décembre 2013. Il est situé dans le 12^ème arrondissement de la Commune de Cotonou. Il est limité :

- Au Nord et à l’Est par le camp militaire «GUEZO»,

- Au Sud par la Présidence de la République de laquelle il est séparé par l’avenue Jean Paul II qui mène à l’aéroport International Bernardin cardinal Gantin.

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- A l’Ouest par le Ministère de l’Intérieur, de la Sécurité Publique et des Cultes, la Faculté des Sciences de la Santé (FSS), de l’Institut des Sciences Biomédicales Appliquées (I.S.B.A.) et par l’Institut National Médio-Sanitaire (INMeS).

Le CNHU-HKM dispose de plusieurs services à savoir : - Les services administratifs,

- Les services médicaux et spécialités médicales

- Les services médicotechniques qui comprennent les services des laboratoires.

2.1.2.1. Présentation des laboratoires du CNHU-HKM

Le CNHU-HKM dispose de quatre services de laboratoires à savoir : - Le service de biochimie

- Le service d’hématologie,

- Le service d’immuno-hématologie (Banque de Sang)

- Le service de microbiologie composé de deux laboratoires à savoir : le laboratoire de parasitologie dans lequel, nous avons effectué notre stage.

2.1.2.2. Présentation du service de Microbiologie

Le service de Microbiologie est limité au Nord par le service de Réanimation, au Sud par le service de Dermatologie, à l’Est par le service de la Rééducation Fonctionnelle et à l’Ouest par le jardin botanique et le service de la Radiologie et celui des Grands Brûlés. Ce service partage le même bloc que le service de biochimie qui se trouve à gauche en entrant par le couloir du côté du service de la Dermatologie. Actuellement rénové, il est constitué de :

 un local pour l’accueil (remise des résultats, réception des échantillons)

 un couloir commun avec la biochimie,

 un secrétariat,

 le bureau du surveillant du laboratoire de Parasitologie-Mycologie,

 une grande paillasse centrale pour la lecture des lames

 une salle de garde commune avec le laboratoire de Bactériologie

 une laverie

 un magasin

 une hotte

 un grand laboratoire avec plusieurs sections : - section 1 : Goutte épaisse et Frottis sanguin

- section 2 : Coprologie parasitaire et sédiments urinaires - section 3 : Sérologies VIH, SDW, ASLO, TPHA-VDRL - section 4 : Sérologies Toxoplasmose ; Rubéole ; Chlamydiae - section 5 : Mycologie

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2.1.2.3- Fonctionnement du laboratoire

Le prélèvement

Le prélèvement des échantillons destinés aux différents laboratoires du CNHU-HKM s’effectue tous les jours ouvrables à partir de 07 h dans la salle de prélèvement dédiée à cet effet.

Après le prélèvement, un tri est fait et les échantillons biens étiquetés sont ramenés dans les différents laboratoires correspondants.

2.2-Matériel

Le matériel utilisé est composé de :

- microscope binoculaire à contraste de phase et à lumière polarisée - un bocal propre à large ouverture pour le prélèvement des urines.

- une centrifugeuse, - micropipettes, - lames et lamelles - pipette de transfert - cônes,

- portoirs, - compresses, - tubes coniques, - marqueurs, - stylos,

- cahiers de paillasse

- bandelette réactive (Micropoint^®, boîte de 100) - fiche de travail

2.3- Méthode d’étude 2.3.1- Type d’étude

Il s’agit d’une étude prospective qui s’est déroulée du 1^er aout au 31 octobre 2017, soit une durée de 3 mois.

2.3.2- Echantillonnage 2.3.2.1- Population d’étude

L’échantillonnage s’est fait au CNHU-HKM de Cotonou. Il inclut un total de 20 échantillons d’urines.

 Critères d’inclusion

- Urines de malades présentant une pathologie glomérulaire et/ou diabétique associée ou non à des œdèmes.

(26)

 Critères de non inclusion - Urines mal collectées

- Urines ayant séjourné plus de 4 heures ou conservées au réfrigérateur.

2.3.2.2- Procédure de la bandelette réactive

Il s’agit de tests chimiques et physico-chimiques. Les bandelettes réactives peuvent être à 9 ou 10 paramètres. Les tests sur bandelettes se font en trempant la bandelette rapidement « in and out » dans l’urine et en égouttant l’excès de spécimen sur le rebord du contenant puis en déposant la bandelette horizontalement sur du papier buvard. Il ne faut pas tremper la bandelette dans l’urine trop longtemps (> 1 seconde) car, les réactifs peuvent être élués des zones réactives.

Dépendante du volume, cette étape peut être reprise deux ou trois fois. Cependant, à chaque trempage, les réactifs élués contaminent le spécimen de sorte qu’après trois trempages dans le même spécimen le niveau de contaminant interfère avec les différentes réactions.

1) Sortir une bandelette et l’urine à analyser

2) Tremper la bandelette dans l’urine à la manière de in and out

3) Egoutter et observer les réactions 4) Lire les résultats Figure 5 : Procédure de la bandelette réactive

Source : Fogazzi, 2017

2.3.2.2. Paramètres de la bandelette réactive Les paramètres dosés sont :

(27)

 Densité ou poids spécifique

La densité absolue est définie comme étant le rapport Masse/Volume. La densité relative est le rapport, à volume égal, Poids _Urines/Poids _Eau.

 pH

Dépendant de la diète, le pH normal de la première urine du matin est acide. Un pH alcalin suggère une infection urinaire.

 Protéines

La zone réactive aux protéines est constituée de bleu de tétrabromophénol et d’un tampon à pH3,0. Le principe chimique est basé sur la coloration différentielle des indicateurs.

L'indicateur adsorbé sur une protéine a un pK différent (bleu à pH 3,0) de l'indicateur libre (jaune à pH 3,0).

 Corps cétoniques

La zone réactive pour les corps cétoniques utilise la réaction de Rotera modifiée aussi appelée test de Legal. Le tampon utilisé est du Na₂HPO₄. Du lactose est ajouté pour intensifier la coloration. Seul l’acétyl-acétate réagit significativement avec le réactif. La sensibilité est d'environ 100 mg/L.

 Sang

La zone réactive pour le sang contient un dérivé de la benzidine la tetraméthylbenzidine et un peroxyde organique ; l’hydroperoxyde de cumène. Au contact de l'eau le réactif organique libère du peroxyde qui, par l'activité pseudoperoxydase de l'hémoglobine, oxyde le dérivé de la benzidine en un complexe bleu. La bandelette réagit à la présence d'érythrocytes qui détecte l'hémoglobine libre et la myoglobine. La sensibilité du test est de 5 à 20 globules rouges/champ à 400X ou de 0,15 à 0,6 mg/L d'hémoglobine.

 Leucocytes

Les leucocytes, surtout les polynucléaires, sont connus pour posséder plusieurs estérases dont les estérases leucocytaires présentes dans les granules azurophiles des granulocytes et des monocytes. La zone réactionnelle des leucocytes contient un substrat, le carboxy-ester d'indoxyl, qui est hydrolysé par l’estérase leucocytaire libérant ainsi de l'indigo. Un réactif diazo est ajouté pour augmenter la coloration, ce qui permet une lecture après un temps raisonnable.

(28)

 Nitrites

Certaines bactéries sont capables de réduire les nitrates en nitrites. La majorité des bactéries à Gram négatif, impliquées dans l'infection des voies urinaires, sont réductrices.

Pour que ce test fonctionne il faut que la bactérie réduise les nitrates, que l'urine contienne une quantité appréciable de nitrate et que le temps de contact entre les bactéries et les nitrates soit suffisamment long. Un test négatif ne peut exclure une infection urinaire.

 Bilirubine et urobilinogène

Une hausse de la bilirubine dans l'urine est toujours associée à une hausse de la bilirubine conjuguée. Seule la bilirubine conjuguée accède à l’espace urinaire lors de la filtration glomérulaire. L'urobilinogène est détecté par la réaction d'Ehrlich. La réaction est positive avec l’urobilinogène, le porphobilinogène, l'acide p-aminosalicylique

2.3.2.3- Procédure de l’examen du sédiment urinaire

 Phase pré-analytique - Faire la toilette génitale

- Récolter des urines dans un bocal spécifique - Technique de prélèvement en milieu de jet

 Le temps entre le prélèvement et l’analyse.

Immédiatement après la miction mais un délai de maximum 4 heures l’urine est acheminée au laboratoire. Dans ce cas, il faut le conserver à température ambiante. .

 Le volume.

Le volume utile recommandé est de 10 ml.

 Phase analytique

- Identifier les échantillons et les analyser à la bandelette réactive.

- Centrifuger 10 ml d’échantillon à 2000 tours/minute pendant 10 minutes.

- Aspirer 9,5 ml du surnageant avec un aspirateur à eau ou une pipette de transfert

- Remettre doucement en suspension complète le culot (0,5 ml restant) avec une pipette de transfert

(29)

- Prélever et déposer à l’aide d’une micropipette 50 µl de la suspension sur une lame porte- objet recouverte d’une lamelle couvre-objet de dimension 32X24 mm (ou 30 µl du culot pour une lamelle de 22X22 mm).

- Observer, au microscope à contraste de phase les préparations au faible grossissement (100X) pour balayer la préparation. C’est à ce grossissement que les cylindres sont comptés sur 20 champs microscopiques. Le fort grossissement (400X) permet de confirmer les éléments observés mais représente le grossissement avec lequel sont observés les autres particules (cellules, cristaux, etc.).

- L’analyse des échantillons doit se faire dans un intervalle maximum de 3 heures suivant la collecte. Le plus tôt est le mieux.

- Pour passer d’un échantillon à un autre, il faut changer de pipette ou la rincer à l’eau désionisée,

- Par ailleurs, ne jamais utiliser le même cône pour deux échantillons.

lames de phase

Condenseur rotatif (faible grossissement) Condenseur rotatif (fort grossissement) Figure 6 : Composantes de contraste de phase sur un microscope Source : Photos tirées de Fogazzi, 2017

(30)

 Interprétation des résultats du sédiment

Leucocytes : L’estimation est semi-quantitative. On compte le nombre de leucocytes sur 10 champs au grossissement 400X et on fait la moyenne. Les leucocytes lysés ne sont plus visibles au microscope. Les leucocytes éliminés par les urines sont presque toujours des granulocytes.

Dans tous les cas, la présence de granulocytes suggère un processus inflammatoire dans le rein, les voies urinaires ou les organes génitaux.

Le résultat quantitatif de la bandelette réactive est préféré en raison de l’estérase libérée qui permet de les détecter.

Erythrocytes : On compte le nombre d’hématies sur 10 champs au grossissement 400X et on fait la moyenne. Il n’est pas possible de différencier l’hémoglobine de la myoglobine avec les bandelettes. Les hématies hémolysées ne sont plus visibles au microscope, mais l’hémoglobine libérée permet de les détecter avec la bandelette. Une macro-hématurie est visible à l’œil nu lorsque la présence de sang est supérieure à 0,5 ml par litre d’urine.

Microorganismes : On compte le nombre de microorganismes sur 10 champs au grossissement 400X et on fait la moyenne. Lorsque ce nombre est compris entre 0,5 à 2 / HPF, on parle de rares. Lorsqu’il est compris entre 2 à 5/HPF, on parle de quelques et lorsqu’il est supérieur à 5 / HPF, on parle de nombreux. La présence de bactéries dans le sédiment conduit à une culture soit sur un nouveau prélèvement spécifique. Quant aux levures pathogènes, elles sont souvent présentes chez les diabétiques, les immunodéprimés.

La présence de Trichomonas vaginalis signe une vaginite. Mais ce germe peut se retrouver chez l’homme. Il se présente comme une cellule géante (10 à 30 μm) se déplaçant par mouvements saccadés à l’aide de flagelles. Des œufs de Shistosoma haematobium peuvent également être rencontrés dans certaines urines.

Cellules épithéliales : Pour les cellules épithéliales, l’estimation est également semi- quantitative. On compte le nombre de cellules sur 10 champs au grossissement 400X et on fait la moyenne. Lorsque ce nombre est compris entre 0,5 à 2/HPF, 2 à 5/HPF ou supérieur à 5/HPF, on qualifie de rares, quelques ou nombreux.

Cylindres : Les cylindres sont rares lorsqu’ils sont de 1 à 4/lame ou quelques lorsqu’ils sont entre 5/lame ou moins de 1/HPF ou nombreux s’ils sont supérieurs à 1/HPF.

(31)

Cristaux : Quant aux cristaux, leur présence dépend de la composition, de la concentration et de l'acidité urinaires. Par exemple, l'acide urique tend à précipiter dans une urine acide (pH < 5,5) alors que les sels de phosphate précipitent en urine alcaline (pH > 7,0). La solubilité de l'oxalate de calcium est indépendante du pH urinaire. Les cristaux urinaires peuvent être observés chez des sujets normaux et n'ont habituellement pas de signification diagnostique. La seule exception majeure est la présence de cristaux de cystine avec leur forme caractéristique hexagonale.

Une numération de 2 cristaux par HPF, de 2 à 5/HPF et plus de 5/HPF est interprétée respectivement de « rares », « quelques » et « nombreux ».

 Principales causes d’erreur

- Erreur d’étiquetage. Erreur de transcription des résultats.

- Urines mal prélevées (délai de miction trop court ou trop long, contamination liée à une mauvaise toilette, etc.).

- Analyse de l’échantillon sur des urines non fraîches.

- Urines trop diluées ou trop concentrées.

- Urines avec un pH > 7,0 (cylindres détruits et leucocytes lysés).

- Urines avec d’abondants cristaux de phosphates amorphes - Urines mal conservées

2.4. Traitement et analyses des données

Les données sont saisies dans le logiciel Epi Data et l’analyse statistique est réalisée à l’aide du logiciel SPSS version 17.0.0. (SPSS Statistics). Les proportions des variables étaient calculées ainsi que les intervalles de confiance (IC) à 95 %. La valeur p <0,05 a été considérée comme statistiquement significative.

(32)

RESULTATS

(33)

Présenté et soutenu par David BIAOU 20

III- RESULTATS

3.1. Caractéristiques sociodémographiques des patients

Figure 7 : Répartition des sujets selon le sexe

60% des patients sont de sexe masculin contre 40% de femmes (figure 7).

Figure 8 : Répartition des sujets selon l’âge

L’âge moyen des patients est de 36,9 ans (IC95% =26,68-47,07). Plus de la moitié des patients (55%) avaient 36 ans ou plus (figure 8).

Tableau I : Répartition des sujets en fonction du pH des urines

pH .n %

5 2 10,0

6 13 65,0

6,5 2 10,0

7 3 15,0

Total 20 100

Le pH moyen des urines est de 6,1 (IC95% =5,8-6,3). La majorité des patients (85%) avaient une urine acide (tableau I).

40% 60%

Masculin Féminin

15,0%

5,0% 5,0%

20,0%

15,0%

20,0% 20,0%

0%

5%

10%

15%

20%

25%

<5 ans 5 à 15 ans 16 à 25ans 26 à 35 ans 36 à 45 ans 46 à 55 ans plus de 55 ans

Pourcentage (%)

Age

(34)

Figure 9 : Répartition des sujets selon la densité des urines

La densité moyenne des urines est de 1,022 (IC95% =1,012- 1,031) avec des extrêmes de 1,000 à 1,100. Plus du tiers des patients (36,9%) ont des urines dont la densité est supérieure ou égale à 1,025 (figure 9).

Tableau II : Répartition des sujets en fonction des caractéristiques biochimiques des urines

Variables .n %

Albuminurie

+++ ou ++ ou + 10 50

Traces 4 20

Négative 6 30

Hémoglobinurie

++ ou + 4 20

Négative 16 80

Estérase leucocytaire

++ et + 5 25

Traces 4 20

Négative 11 55

Glycosurie

Positive 8 40

Négative 12 60

Bilirubinurie

Positive 8 40

Traces 1 5

Négative 11 55

Urobilirubinurie

Absente 20 100

Positive 0 0

L’albuminurie est positive dans 70% des urines dont 50% en taux élevé et 20% en traces.

L’hémoglobinurie est positive chez 20% des patients. L’estérase leucocytaire est positive chez 45% d’entre eux. La glycosurie est positive chez 40% des patients, tandis que la bilirubinurie est positive dans 45% des cas (tableau II).

5,3%

31,6%

15,8%

10,5%

5,3%

26,3%

5,3%

0%

5%

10%

15%

20%

25%

30%

35%

1 1,01 1,015 1,02 1,025 1,03 1,1

densité

Pourcentage(%)

(35)

Tableau III : Répartition des sujets en fonction de la cristalliurie et de la cylindriurie

Variables .n %

Cristaux urinaires

+++ ou + 9 45

Absents 11 55

Cylindres

Absents 12 60

Présents 8 40

Types de cylindres

Granuleux 8 88,89

Hyalins 1 11,11

45% des sujets de l’étude présentent une cristaliurie positive et 40% une cylindriurie positive. Environ 89% des cylindres sont de type granuleux et 11% de type hyalins (tableau III).

Tableau IV : Répartition des sujets en fonction de la présence de cellules sanguines

Variables .n %

Globules rouges

+++ 1 5

+ 8 40

Absent 11 55

Globules blancs

Absents 12 60

Présents 8 40

Dans 45% des cas, les urines présentaient une hématurie anormalement positive et dans 40 % des cas, la leucocyturie est positive (tableau IV).

Tableau V : Répartition des sujets en fonction des caractéristiques bactériologiques

Variables .n %

Bactéries

Sévère (+++) 1 5

Modérée à faible (++ et +) 2 10

Négatives 17 85

Levures

+++ 1 5

Négatives 19 95

Autres germes (trichomonas, S. haematobium)

Positifs 0 0

Négatifs 20 100

Dans 15% des cas, les urines sont infestées par des bactéries et dans 5% des cas par des levures. Aucune urine n’est infectée par Trichomonas vaginalis ou par Shistosomas haematobium (tableau V).

Dans 45% des urines, on notait la présence de cellules tubulaires. Les cellules transitionnelles superficielles et profondes sont présentes dans les urines respectivement dans 40% et 5%

(tableau VI).

(36)

Tableau VI Répartition des sujets en fonction des anomalies tubulaires

Variables .n %

Cellules tubulaires

Présentes 9 45

Absentes 11 55

Cellules transitionnelles superficielles

Absentes 14 60

Présentes 6 40

Cellules transitionnelles profondes

Absentes 19 95

Présentes 1 5

Tableau VII : Comparaison des deux techniques

Paramètres Bandelette réactive Examen du sédiment

pH + -

densité + -

Albuminurie + -

Nitrites + -

Corps cétoniques + -

hémoglobinurie + -

Estérase leucocytaire + -

Glycosurie + -

Bilirubinurie + -

Urobilirubinurie + -

Cristaux - +

Cylindres - +

Lipides - +/-

Globules rouges - +

Globules blancs - +

Bactéries - +

Levures - +

Trichomonas, S. haematobium - +

Cellules tubulaires - +

Cellules transitionnelles superficielles - +

Cellules transitionnelles profondes - +

Comme le montre le tableau VII, la bandelette réactive et la microscopie du sédiment sont deux techniques complémentaires.

(37)

DISCUSSION

(38)

IV- DISCUSSION

Le sédiment urinaire est un examen de routine qui permet de révéler les troubles associés aux fonctions rénales. D’une part, les caractéristiques physico-chimiques des urines et d’autre part, leurs caractéristiques microscopiques sont combinées dans l’exploration du fonctionnement des reins. Une densité basse et/ou un pH basique causent très fréquemment la lyse des globules rouges et des globules blancs influençant la teneur en hémoglobine et en estérase leucocytaire détectable par bandelette. Une densité élevée et/ou un pH acide empêchant la lyse des érythrocytes et des leucocytes, faussent la bandelette. Un pH basique entraine une très faible agrégation des fibrilles tandis qu’un pH acide entraine une agrégation élevée des fibrilles.

La présente étude a pris en compte les deux sexes masculin et féminin, aussi bien des enfants que des adultes avec un âge moyen de 36,9 ans (IC95% =26,7-47,1) avec des extrêmes allant de 18 mois à 78 ans. A la bandelette, la densité moyenne des urines est de 1,022 (IC95% =1,012- 1,031). Le pH moyen des urines était de 6,1 (IC95% =5,8-6,3).

Dans la présente étude, la complémentarité des deux techniques a été mise en évidence.

Ainsi, l’utilisation de la bandelette a permis de révéler les pathologies telles que l’albuminurie (70%), l’hémoglobinurie (20%), leucocyturie (45%), glycosurie (40%), bilirubinurie (45%), urobilirubinurie (55%). Alors qu’en microscopie, des pathologies glomérulaires ont été diagnostiquées à des proportions élevées.

Ainsi, une cristaliurie (45%), une cylindriurie (40%), une hématurie (45%), une bactériurie (15%) et la présence de levures (5%) ont été détectées dans le sédiment urinaire.

En outre, il a été possible d’identifier dans 45% des urines, la présence de cellules tubulaires de cellules transitionnelles superficielles et profondes respectivement dans 40% et 5% des urines, signes évidents de maladies rénales.

Fogazzi GB et al (2008 et 2017) ont montré que l’analyse microscopique des urines est essentielle pour le diagnostic et la prise en charge des patients suspectés de maladies rénales et des infestions de l’appareil urinaire. Malgré la faible précision et la large variabilité inter- observation, la microscopie visuelle standardisée reste la méthode de référence pour l’examen des éléments suspects présents dans l’urine.

(39)

Le sédiment urinaire a permis d’identifier en particulier des éléments morphologiques spécifiques au parenchyme rénal (cylindres, érythrocytes déformés) ainsi que des cristaux. Ces mêmes observations avaient été faites également par Fogazzi GB en 2008.

La bandelette réactive se limite à l’identification de quelques paramètres (leucocytes, nitrites, globules rouges, etc.). La mise en évidence de la leucocyte-estérase reflète l’activité des polynucléaires dans les urines et détecte la leucocyturie avec une sensibilité de 75-96% et une spécificité de 94-98%.

La mise en évidence de nitrites se fait en présence de bactéries Gram- réduisant le nitrate en nitrite avec une sensibilité de 35-85% (test négatif en cas de bactériurie faible, de pollakiurie et de germes ne produisant pas d’uréase). Sa spécificité est de 95% pour la présence de bactéries mais on peut observer des faux positifs lorsque l’urine n'est pas conservée au froid. Une bandelette urinaire positive (leucocytes et/ou nitrites) accompagnant une symptomatologie d’infection urinaire non compliquée ne nécessite pas de confirmation du test par un sédiment urinaire.

Pour une leucocyturie pathologique (> 8 leucocytes/champ microscopique, le test est sensible pour la présence d’une infection des voies urinaires (95%), mais qui peut aussi être positif dans d’autres affections rénales (néphrite interstitielle, tuberculose, tumeur) et des voies excrétrices (calcul, hypertrophie de la prostate, infection non bactérienne). Le nombre de leucocytes varie en fonction de l’état d’hydratation et la durée de stagnation des urines dans la vessie.

Il est important que les néphrologues s’approprient l’examen du sédiment urinaire des patients en vue d’un diagnostic correct. En effet, une étude récente sur l’examen de l’urine de 26 patients souffrant d’insuffisance rénale sévère, auprès des personnels des laboratoires cliniques a montré leur incapacité à reconnaitre les particules importantes. Par ailleurs, une évaluation externe de la qualité des sédiments urinaires a montré que sur 268 à 325 seulement 63,9% ± 17,0% (entre 39,6% et 88,7%) des participants ont eu accès au diagnostic clinique. Parmi ceux- ci, 90,2% ± 8,5% ont pu indiquer le bon diagnostic (Fogazzi G B, 2014).

Importance du sédiment urinaire

L’identification des particules du sédiment urinaire et leur signification clinique par des professionnels qualifiés, pour améliorer le diagnostic des maladies des voies urinaires s’avère indispensable.

(40)

Les globules rouges isomorphiques (ou non glomérulaires) signe une hématurie d’origine non glomérulaire telle les calculs, le cancer de la vessie. Les globules rouges dysmorphiques (ou glomérulaires) signent une hématurie d’origine glomérulaire probable (ou une glomérulonéphrite). L’identification des globules rouges en forme d’anneau avec ou un ou plus de bourgeons internes et ou externes signe également une hématurie d’origine glomérulaire probable.

L’identification des globules blancs avec leurs noyaux lobulés et le cytoplasme granuleux, c'est-à-dire associés à des bactéries, signe une infection urinaire probable. En cas de présence de cellules squameuses, il s’agirait d’une contamination de l’urine par les secrétions génitale probable. L’identification des cellules épithéliales rénales tubulaires avec leur noyau bien évident signe des dommages des tubules rénaux et une maladie rénale.

Par contre, les cellules de transition profondes en amas avec leur forme en massue et leurs noyaux volumineux signent des dommages des couches profondes de l’uro-épithélium, une maladie urologique probable ou d’une sonde vésicale.

L’identification de cellules de transition superficielles en amas signe des dommages des couches superficielles de l’uro-épithélium ou maladie urologique possible.

Par contre les cellules épithéliales squameuses avec leur grande taille et leur petits noyaux en quantité élevée, indiquent une contamination de l’urine par les secrétions génitales.

La présence de gouttes lipidiques de taille différente avec leur aspect typique en « Croix de Malte » à la lumière polarisée, en général associée à une albuminurie sévère détectée à la bandelette réactive signe une maladie rénale probable. Il en est de même lorsque des cylindres contiennent beaucoup de gouttes lipidiques.

L’identification des cristaux de cholestérol avec leur forme en plaque et leurs contours très nets avec absence de croix de Malte à la lumière polarisée, associée à une albuminurie sévère, signe une glomérulonéphrite.

L’identification de corps ovalaires graisseux, c'est-à-dire un macrophage ou une cellule rénale tubulaire gorgé par les gouttes lipidique, avec aspect de croix de malte à la lumière polarisée souvent associée à une albuminurie sévère signe une maladie rénale probable.

(41)

La présence d’un cylindre hyalin avec une transparence typique associée à d’autres types de cylindres signe une glomérulonéphrite. Il en est de même pour les cylindres granuleux à granulations fines.

Lorsque le cylindre est cireux avec des contours très nets et dentelés bien distincts au grossissement 200X, le diagnostic d’une maladie rénale probable peut être posé. Un cylindre contenant des globules rouges ou cylindre érythrocytaire indique une hématurie d’origine rénale.

Lorsque le cylindre contient des cellules rénales tubulaires ou cylindre épithélial, il s’agirait des dommages des tubules des reins, donc d’une maladie rénale.

Un agrégat de cristaux d’acide urique avec leur forme caractéristique en « losange » et leur biréfringence forte et colorée à la lumière polarisée, avec persistance sur plusieurs échantillons du sujet indiquerait une urolithiase d’acide urique possible.

La présence de cristaux d’oxalate de calcium monohydraté ou bihydraté biréfringents avec leur forte biréfringence à la lumière polarisée avec une persistance sur plusieurs échantillons du même sujet indiquerait une urolithiase d’oxalate de calcium. La présence de cristaux de phosphate de calcium avec leur forme rosette et leur forte biréfringence à la lumière polarisée signe une urolithiase de calcium lorsqu’ils sont persistants sur plusieurs échantillons du même individu. Par contre les cristaux de phosphate triple avec leur forme la plus fréquente en couvercle de cercueil et leur biréfringence variable à la lumière polarisée sont associés à des infections urinaires dues à des bactéries comme Proteus ou Corynebacterium urealyticum et Ureaplasma urealyticum [Fogazzi G B 2014]. Tous ces éléments avec leur morphologie décrite ainsi sont observables au microscope à contraste de phase. Ce qui n’est guère possible par la bandelette réactive.

(42)

CONCLUSION

(43)

CONCLUSION

L’analyse d’urine est l’un des plus anciens tests et de base pour évaluer la présence, la sévérité et le cours des maladies rénales et de l’appareil urinaire. Par conséquent, lorsqu’un patient est examiné premièrement par un néphrologue, une investigation complète des urines devrait être demandée.

Le sédiment urinaire est un examen d’une grande utilité et doit être réalisé dans les formations sanitaires de notre pays en raison de sa simplicité et des informations qu’il offre aux néphrologues, urologues et pédiatres. La confrontation des résultats de cet examen doit être faite avec l’examen clinique en vue d’un bon diagnostic et une meilleure prise en charge des patients souffrant de pathologie de l’appareil urinaire depuis les reins jusqu’à l’urètre en passant par le bassinet, l’uretère et la vessie .

L’utilisation de bandelettes réactive, malgré sa rapidité, sa simplicité et son faible coût peut induire des erreurs diagnostiques. Elle doit être complétée par l’examen du sédiment urinaire. En effet, les cliniciens doivent être formés sur les principes et les limites de cette approche, qui permettent à l’utilisateur de détecter et d’obtenir une estimation approximative des concentrations d’un certain nombre d’analytes, dont l’albumine, le sang, les leucocytes, les parasites et les bactéries. De nos jours, le sédiment urinaire peut être réalisé dans les laboratoires centraux où plusieurs échantillons sont collectés et analysés quotidiennement, loin derrière les échantillons au lit du malade sans un équipement, une méthode correcte et un personnel qualifié afin d’aider les néphrologues à poser un diagnostic de qualité. «Le sédiment urinaire peut être considéré comme la biopsie liquide du rein ».

(44)

SUGGESTION

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SUGGESTIONS

A l’endroit des autorités de l’EPAC

- Poursuivre la formation des biologistes dans divers domaines du diagnostic biomédical

A l’endroit des autorités du CNHU-HKM et celles du service de Microbiologie

- Renforcer le plateau technique du laboratoire de Parasitologie-Mycologie en vue de la réalisation de l’examen du sédiment urinaire par la dotation de microscopes à contraste de phase;

- Rendre systématique la réalisation de l’examen du sédiment sur tout prélèvement urinaire à visée diagnostique.

A l’endroit des néphrologues, urologues et pédiatres

- Demander systématiquement l’examen du sédiment urinaire chez tout patient.

- Confronter les résultats de la bandelette réactive à ceux du sédiment urinaire réalisé au laboratoire avant toute prise de décision thérapeutique

A l’endroit des biotechnologistes du service de Microbiologie

- Élaborer une procédure opérationnelle standardisée (SOP) en vue de la standardisation de la technique d’examen du sédiment urinaire

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