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Protocole d’amplification du virus OsHV1 à partir des échantillons de huitres Quantification d’ADN du virus OsHV

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Academic year: 2021

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Protocole d’amplification du virus OsHV1 à partir des échantillons de huitres

Quantification d’ADN du virus OsHV-1 par PCR quantitative Sybr® green sur les ADN extraits à partir des tissus (sans TD) d’huitres. La concentration des ADN extraits est ajustée à 5ng/µl.

DP-F (OsHVDPFor) : 5’-ATT GAT GAT GTG GAT AAT CTG TG-3’

DP-R (OsHVDPRev) : 5’-GGT AAA TAC CAT TGG TCT TGT TCC-3’

Utiliser le kit Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QPCR MasterMix Ref 600883, Agilent

Effectuer une gamme étalon par dilution de l’ADN plasmidique à 1.10E7 copies ADN/µL fourni par le LNR, LGPMM La Tremblade, Ifremer (dilution de 1.10E5 à 1.10E1, copies/µL)

Le fragment généré est de 197pb.

Publications de référence :

Webb SC, Fidler A and Renault T, 2007. Primers for PCR-based detection of ostreid herpes virus-1 (OsHV-1): Application in a survey of New Zealand molluscs. Aquaculture, 272, 126-139.

Références

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