TPL3GEN

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Les Travaux Pratiques à l’Université Oran1-Ahmed Ben Bella

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département de Biologie

Licence L3 Génétique Semestre

S6

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T.P. N°01

 Matière: Biologie Moléculaire

 Intitulé : Mise en évidence du corpuscule de BARR

 Protocole :

 Principe: Pour la mise en évidences des anomalies chromosomiques de nombre liées au chromosome sexuel X.

 Méthodologie (succincte) : Soit un prélèvement à partir de la muqueuse buccale ou sanguin traité au rouge carmin qui montre un corps dense accolé à la face interne de l’enveloppe nucléaire : il s’agit du chromosome X inactif.

Produits chimiques Consommable /Verrerie Petits Matériels

Rouge carmin (poudre)

Orcéine (poudre)

May-Grunwald-Giemsa

Acide acétique glacial

Ethanol absolu Ether éthylique Violet de crésyl Xylène Fuchsine basique Formaldéhyde à 35 ou 37% Formol saturée 35 ou 45% Méthanol Acide chlorhydrique Becher : 20 ml et 50 ml Lames et lamelles

Barres magnétiques pour agitation

05 Bac de coloration

02 boites d’abaisse langue

02 Pissette Plaque chauffante agitatrice Bec bensen Frigo 05 Microscopes 01 Balance de précision

T.P. N°02

 Intitulé : Culture de cellules sanguines et établissement d’un caryotype

 Protocole :

 Principe: Apprendre à maîtriser les cultures cellulaires à partir de cellules indépendantes dans le but d’établir un caryotype.

 Méthodologie (succincte) : Afin de maîtriser la classification des chromosomes à partir d’une plaque métaphasique, l’étudiant réalisera : une culture cellulaire, un blocage métaphasique, un choc hypotonique, une fixation et enfin une coloration de cette plaque.

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Giemsa

Acide acétique glacial

Méthanol

Colchicine [10 µg/ml]

Phytohémagglutinine P

Phytohémagglutinine M

Le sérum de veau fœtal

Penicillin [10 000 UI/ml] et Streptomycin [10 mg/ml)

Ethanol absolu

KCl : chlorure de potassium

Milieu de culture "RPMI 1640 medium liquid [1X]

L-Glutamine solution [200 mM]

 Lames et lamelles.

 Tubes en verre à fond rond avec bouchon (capacité 10 ou 15 ml).  Pipettes Pasteur en verre.

 Poires pour pipettes Pasteurs en caoutchouc.  Papier filtre  Pissettes  Un paquet de seringues de 05 ml Etuve Bain-marie Frigo Centrifugeuse pour (tube à fond rond ou conique de 10 ou 15 ml) 05 microscopes Balance de précision

T.P. N°03

 Intitulé : Protocole d’extraction d’ADN

 Protocole :

 Principe: Apprendre à manipuler la molécule d’ADN dont le but d’entreprendre des études dans divers domaines : médicale, biologique, agro-alimentaire, biotechnologie.  Méthodologie (succincte) : Dans ce protocole, l’étudiant maîtrisera les étapes de la lyse

des membranes plasmiques, de la lyse de l’enveloppe nucléaire, la déprotéinesation et la précipitation de la molécule d’ADN.

Produits chimiques Consommable_/Verrerie Petits Matériels

Tris

Acide chlorhydrique

Nacl

SDS (Sodium Dodecyl Sulfate)

 EDTA disodique Saccharose Chlorure de magnésium : MgCl2, 6H2O Triton X100 NaOH (soude)

Chlorure de sodium NaCl

Perchlorate de sodium Chloroforme - Ethanol absolu Agarose Tubes Falcon en propylène (capacité 50 ml) Tubes Falcon en propylène (capacité 15 ml) Pipettes Pasteur en verre Eprouvette 50 ml/100 ml/1000 ml Becher : 50 ml/100 ml/1000 ml Pissette Micropipettes Frigo Bain-marie Balance de précision

Centrifugeuse avec godet (tubes falcon 50 ml et 15 ml)

Etuve

Plaque chauffante agitatrice

Barres magnétiques

Vortex

Dispositif pour électrophorèse horizontale et verticale + générateur

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Acrylamide/bis acrylamide

Phosphate mono-sodique : NaH2PO4, 2H2O

Phosphate di-sodique anhydre : Na2HPO4

Phosphate di-sodique hydraté : Na2HPO4, 12H2O

KH2PO4