Synthèse des résultats et vérification des hypothèses générales

Hypothèses générales :

Deux hypothèses principales ont été énoncées dans cette thèse :

1) Les monomères cycliques d’acides gras (MCAG) modifient le métabolisme lipidique au foie tout en altérant des marqueurs associés à la stéatose hépatique non alcoolique chez le rat.

2) Les réponses métaboliques aux MCAG diffèrent selon les lipides présents dans la diète.

Objectif général :

Déterminer les effets des MCAG sur la réponse lipidique et inflammatoire, et le stress oxydant, marqueurs associés à la stéatose hépatique, chez le rat et vérifier si ces effets sont modulés par les lipides alimentaires.

En vue d’atteindre l’objectif général et de vérifier les deux hypothèses générales de cette thèse, nous avons utilisé un modèle animal (rat Wistar mâle) nourri avec quatre différentes diètes purifiées : huile de canola (CO), huile de canola et MCAG (CC), huile de soya (SO) et l’huile de soya et MCAG (SC). La mesure de la réponse lipidique s’est faite par la détermination des profils lipidiques hépatiques par chromatographie liquide haute performance (HPLC), des profils des lipides et lipoprotéines plasmatiques

grâce à des kits commerciaux, des profils des acides gras hépatiques et plasmatiques par chromatographie sur phase gazeuse (GC). La mesure de la réponse inflammatoire a été réalisée par la mesure des cytokines inflammatoire (IL-6 et CRP) et des enzymes de la fonction hépatique, soit l’alanine transaminase (ALT) et l’aspartate transaminase (AST) à l’aide des kits commerciaux. L’évaluation du stress oxydant a été réalisée par la mesure de deux isoprostanes (15-F2t-IsoP et son métabolite, le 2,3-dinor- 15-F2t-IsoP) et d’un neuroprostane (4(RS)-F4t-NeuroP) dans le foie, le plasma et l’urine. Pour mesurer ces marqueurs du stress oxydant, nous avons eu recours à la chromatographie liquide en tandem avec la spectrométrie de masse (micro-LC-MS/MS). Brièvement, après broyage du foie et hydrolyse des isoprostanes estérifiés (cas du foie et du plasma), l’extraction des isoprostanes a été faite à l’aide d’une colonne SPE. Après la micro-LC-MS/MS, la quantification des isoprostanes a été réalisée grâce au logiciel MultiQuant. La modulation des effets des MCAG par des lipides alimentaires a été réalisée par la vérification statistique des interactions significatives entre les types d’huiles et la dose des MCAG (0,0 ou 0,5% des lipides alimentaires totaux).

Certains résultats obtenus dans cette étude ont confirmé les observations faites dans des études antérieures sur les effets des MCAG. Comme Iwaoka et Perkins (Iwaoka & Perkins, 1976), Siess et collaborateurs (Siess et al., 1988) et Lamboni et collaborateurs, nous avons observé que les MCAG induisent une accumulation des lipides dans le foie des rats (Lamboni et al., 1998). Nos résultats, en accord avec ces études antérieures, indiquent donc que, bien purifiés, les MCAG augmentent les taux des lipides hépatiques, indépendamment de la qualité des lipides alimentaires. Par ailleurs, l’hépatomégalie observée antérieurement (Iwaoka & Perkins, 1976; Siess et al., 1988) n’a pas été reproduite dans la présente étude. Martin et collaborateurs (Martin et al., 2000) ont observé une baisse d’acides gras

monoinsaturés (AGMI) avec les MCAG, alors que dans notre étude la différence concernant les AGMI était due au facteur « huile » et non aux MCAG. La différence dans les doses de MCAG et l’utilisation comparative de deux huiles dans la diète de base dans la présente étude pourraient expliquer ces différences. En effet, l’utilisation de deux huiles dans la présente étude a fait ressortir l’effet accentué des MCAG en présence d’huile de soya sur les marqueurs inflammatoires et de stress oxydatif. Ces résultats divergents suggèrent que la forme dans laquelle les MCAG sont administrés aux rats ainsi que le choix d’huile utilisée dans la diète de base sont des facteurs à prendre en compte pour évaluer les effets des MCAG.

Les données plasmatiques et urinaires, les lipides fécaux, les isoprostanes et neuroprostanes, les interactions entre les MCAG et les huiles végétales constituent les contributions novatrices de cette étude. Concernant les données plasmatiques, nous avons observé que les MCAG induisent plus de cholestérol total, moins de cholestérol des HDL et d’alanine transaminase (ALT). Aucun effet des MCAG n’a été observé sur les TG, glucose, l’insuline et le CRP plasmatiques. Une concentration élevée de l’IL- 6 a été observée chez les rats nourris avec l’huile de soja supplémentée de MCAG (SC), alors qu’une concentration élevée d’aspartate transaminase (AST) et un ratio AST/ALT élevé ont été observés chez les rats nourris avec l’huile de canola et MCAG (CC). Les rats nourris avec les MCAG manifestent des concentrations élevées en isoprostanes, mais ceux nourris avec la diète SC avaient de taux plus élevés comparés à ceux nourris avec la diète CC. Nos résultats plasmatiques -en particulier les concentrations inchangées de glucose et insuline- permettent de suggérer que l’hyperinsulinémie n’est pas la cause de l’accumulation des TG dans les foies des rats nourris aux MCAG.

Ces résultats montrent que l’objectif principal de ce projet de recherche a été atteint. Quant à la vérification de l’hypothèse générale, nos résultats montrent que les MCAG induisent l’accumulation des TG dans le foie tout en réduisant les concentrations hépatiques de la phosphatidylcholine. Cependant, nous n’avons pas été en mesure de déterminer le mécanisme précis par lequel cet effet des MCAG est exercé. En effet, nos résultats ont montré que les MCAG n’ont pas affecté l’activité de la phosphatidyléthanolamine N-méthyle transférase (PEMT) et l’expression de la CT-a, les deux enzymes impliquées dans la synthèse de la PC. Nos résultats indiquent des changements dans les profils en cholestérol total et cholestérol de HDL plasmatiques induits par les MCAG, mais ces derniers n’ont pas affecté les TG plasmatiques. Les concentrations plasmatiques élevées d’isoprostanes chez les rats nourris avec les MCAG indiquent un effet des MCAG sur l’induction du stress oxydant, mais cet effet est exacerbé par l’huile de soya (diète SC), riche en acide linoléique. Quant aux cytokines inflammatoires, il a été constaté une élévation des concentrations plasmatiques de l’IL-6 chez les rats SC, alors que les MCAG n’ont pas affecté les taux de CRP plasmatique. Concernant les concentrations plasmatiques de l’IL-6 et les isoprostanes, nous avions observé des interactions entre le type de lipides alimentaires et la dose des MCAG. Ces interactions statistiques indiquent donc que les effets des MCAG sur certains processus pathophysiologiques peuvent être modulés par les lipides alimentaires. Si donc, les MCAG induisent une accumulation des TG dans le foie indépendamment du type des lipides alimentaires, il n’en va pas de même concernant l’inflammation, le stress oxydant et certains acides gras plasmatiques (voir Fig. 5.2 pour les détails des acides gras concernés). En conclusion, nos deux hypothèses générales ont été vérifiées partiellement et certains de nos résultats ont permis de les réajuster.

Il convient à présent de discuter ces résultats plus en détail en lien avec les hypothèses et objectifs spécifiques énoncés dans le troisième chapitre de ce travail.