7-3- Spectrométrie de résonance magnétique nucléaire :

Cette technique est utilisée en dernier lieu afin de visualiser le nombre et la position des protons, des carbones et d’établir les corrélations ¹H-¹³C sur les cartes bidimensionnelles (HMBC, HSQC). La RMN permet de vérifier et de confirmer les approches structurales déduites à partir des données précédentes. Cette méthode exige de plus grande quantité de produit. Cependant, l’échantillon analysé peut être récupéré après la réalisation du spectre.

• La RMN du proton : Cette méthode permet :

-la localisation des protons.

-la détermination du modèle d’oxygénation.

-la détermination du nombre et de la position des groupements méthoxyles.

-la détermination du nombre, la nature et la position des sucres présents (Markham 1982, Pawan 1992).

L’exadeuterodiméthyl sulfoxide (DMSO-_d6) est le solvant de choix pour la plupart des flavonoides (aglycones et glycosides) (Markham 1982, Markham et Geiger 1993).

La position des signaux, leur forme traduisant les couplages entre les protons ainsi que la fréquence de la constante de ces couplages permettent de déterminer les protons de la molécule flavonique.

 Les protons du noyau A :

Le spectre d’un flavonoide di substitué en 5 et 7 donne deux doublets résonnants aux champs 6 à 7,1 ppm et 6,3 à 6,5 ppm correspondants aux protons H-6 et H-8. Leur constante de couplage est de 2,5 Hz. La localisation de ces protons (H-6 et H-8) dépend de la nature des substituant en C-5 et C-7(Markham et Geiger 1993).

Les déplacements chimiques des protons du noyau A sont représentés dans le tableau-4.

Tableau-4 : Données RMN-H¹(déplacements chimiques et constantes de couplage) des protons du noyau A. Nature du flavonoide H-5 H-6 H-8 5,7-OH - 6,0-6,2 ppm (d, J = 2,5 Hz) 6,3-6,5 ppm (d, J = 2,5 Hz) 5-OH, 7-OR - 6,2-6,4 ppm (d, J = 2,5 Hz) 6,5-6,9 ppm (d, J = 2,5 Hz) 5, 7, 8-OR (R=H, sucre) - 6,3 ppm (s) - 7-OR 8,0 ppm (dd, J = 9,0 et 2,5 Hz) 6,7-7,1 ppm (d, J = 2,5 Hz) 6,7-7,0 ppm (d, J = 2,5 Hz)  Protons du noyau B :

Le déplacement chimique des protons du noyau B se situe entre 6,7-7,9 ppm. Ce déplacement est basé sur les substituants du noyau B et le degré d’oxydation du noyau C. Les protons H-2’, H-6’ et H-3’, H-5’ apparaissent à 7,7-8,1 ppm et 6,5-7,1 ppm sous forme de doublet avec une constante de couplage de 8,5 Hz en cas d’une monosubstitution en C-4. Le déplacement chimique des protons du noyau B sont représentés dans le tableau-5.

Tableau-5 : Données RMN-H¹ (déplacements chimiques et constantes de couplage) des protons du noyau B. Flavonoides H-2’, H-6’ H-3’, H-5’ Flavone (4’-OH) 7,7-7,9 ppm d (J = 8,5 Hz) 6,5-7,1 ppm d (J = 8,5 Hz) Flavonol (4’-OH) 7,9-8,1 ppm d (J = 8,5 Hz) 6,5-7,1 ppm d (J = 8,5 Hz) 3’, 4’-di-OH 7,2-7,3 ppm d (J = 2,5 Hz) 7,3-7,9 ppm dd (J = 2,5 et 8,5 Hz) - 6,7-7,1 ppm d (J=8,5 Hz) 3’,4’,5’-tri-OH 6,5-7,5 ppm (s) -  Protons de l’hétorocycle :

Le proton d’une flavone apparaît comme un singulet entre 6 et 7 ppm. Ce proton très souvent le signal du proton H-6 ou H-8 dans le cas d’une oxygénation en 5, 6, 7 ou 5, 7, 8.

 Les protons de la partie osidique :

Les protons de la partie osidique se situent entre 3,5 et 4 ppm. Par contre, le proton anomérique H-1’ apparaît entre 4,2 et 6 ppm. L’intégration du signal, proportionnelle au nombre de protons, permet de déterminer le nombre de sucres. La constante de couplage du proton anomérique permet de déterminer l’anomère α ou β du sucre une fois sa nature déterminée (Markham et Geiger 1993).

 Les protons méthoxylés :

La présence d’un ou de plusieurs méthoxyles sur le squelette flavonique se traduit par l’apparition d’un ou de plusieurs singulets situés entre 3,5 et 4,1 ppm.

La position de ces méthoxyles sur la structure flavonique peut être déterminée par l’emploi de deux solvants différents. L’observation du déplacement du signal correspondant aux méthoxyles permet de les positionner (Mabry et al 1970).

• La RMN du carbone :

Cette technique donne des informations sur le squelette carbonique de la molécule par exemple :

-détermination du nombre de carbone et de leur environnement. -identification des liaisons C- et O- sucres.

Les résonances des carbones des flavones et flavonols ont lieu entre 9 et 185 ppm (Markham 1982). Les valeurs de déplacement chimique des carbones nucléaires des flavonoides sont

influencées par leur densité électronique. Les carbonyles (4, C=O, acyle) résonnent à des champs faibles entre 170 ppm et 210 ppm, les carbones aromatiques oxygénés résonnent entre 130 et 165 ppm et les carbones aromatiques non oxygénés résonnent entre 90 et 135 ppm

(Markham 1982). Tandis que les hydrocarbones et autres carbones aliphatiques résonnent entre 0-110 ppm. Les groupements méthoxyles et les C-méthyles résonnent entre 55-61 ppm et 16-18 ppmrespectivement(Pawan 1992).

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Chapitre-IV :