Matériel et méthodes
IV- 3-3-3- En présence de kappa-élastine:
Le tissu conjonctif participe au maintien des fonctions vitales de l’organisme. Il est composé de cellules et de matrice extracellulaire. La protéolyse de la matrice extracellulaire est un phénomène observé au cours de l’invasion cellulaire, de l’inflammation ou au cours des maladies dégénératives liées au vieillissement (oséoarthrose, athéro-artériosclérose).
Les enzymes protéolytiques impliquées ont été identifiées. Ces enzymes appartiennent à 4 classes de protéases : sérine, cystéine, aspartyl et métalloprotéinases. Les métalloprotéinases matricielles (MMPs) et les sérines proteinases du système plasminogène/ plasmine ont été les plus étudiées (Dano et al 1999). L’activation des MMPs entraîne la dégradation des composants extracellulaire et génère des peptides capables de régler l’activité cellulaire. La fixation de ces peptides à la surface des cellules est responsable d’importants effets biologiques différents de ceux produits par les protéines intactes. Les propriétés de ces peptides libérés ont donné naissance au concept « matrikine » (Maquart et al 1999).
L’élastine, une des protéines de la matrice extracellulaire est retrouvée en quantité importante dans de nombreux tissus comme les poumons, la peau et également l’endothélium vasculaire. La dégradation de cette protéine par des enzymes spécialisées, nommées élastases, entraîne la libération de peptide d’élastine dans l’espace extracellulaire. De nombreuses études ont montré que ces peptides sont capables de moduler plusieurs activités cellulaires et méritent donc le nom de matrikine (Fulop et al 1998).
Des études relativement récentes ont montré l’influence de ces peptides dérivés de l’élastine sur différents types cellulaires (monocytes, lymphocytes, cellules musculaires lisses, fibroblastes et cellules cancéreuses). Les travaux de Brassart et al 2001 ont montré que les peptides d’élastine et plus particulièrement la kappa-élastine stimule l’expression des MMPs telles que la MMP-1 et la MMP-3 au niveau des fibroblastes du derme humain en culture. Dans cette partie de notre travail nous avons étudié l’effet de la propolis (fraction active et produits isolés) sur l’expression de la MMP-3 après stimulation de son expression par la kappa-élastine, peptide dérivé de l’élastine.
• Culture cellulaire et traitement :
Les FDH sont cultivés jusqu’à 80% de confluence dans du DMEM contenant 10% de sérum de veau fœtal (SVF) dans des plaques de 6 puits (5. 105 cellules/ puit). Les plaques sont incubées à 37°C sous atmosphère contrôlé contenant 5% (V/V) de CO2 pendant une nuit. Après confluence, le milieu de culture est éliminé. Les cultures cellulaires sont ensuite rincées deux fois avec du PBS et incubées pendant 24 heures dans un milieu sans sérum contenant 50 µg/ml de kappa-élastine en absence ou en présence de 10 µg/ml de propolis (fraction et produits isolés). Le milieu de culture est ensuite récupéré. Enfin, la génération de la MMP-3 active est analysée par Western blot.
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