CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODE D’ETUDE
1.5. Les différents examens praticables dans le laboratoire
1.5.3. Section de la Biochimie
Dans cette section, se réalisent les examens biochimiques à savoir : glycémie, urémie, créatininémie, uricémie, cholestérolémie total et HDL, les triglycérides, glucorrachie, Protidémie, Calcémie, magnésémie, bilirubinémie totale et conjuguée, ionogramme transaminases (TGO ; TGP), ainsi qu’une partie des examens sérologiques notamment CRP, ASLO, sérodiagnostique de Widal et Felix (SDW), les hépatites.
2. MATERIEL D’ETUDE 2.1. Matériel biologique
Il s’agissait des échantillons de sang prélevés dans des tubes secs sans gel séparateur.
2.2. Equipements
Le réfrigérateur, la centrifugeuse (BENCH-TOP CENTRIFUGE) et le spectrophotomètre semi-automatique Rayto RT-9200 ont été utilisés.
2.3. Consommables
Les marqueurs, tubes secs stériles sans gel séparateur, aiguilles vacutainer 21Gx1-1/4 (0,8x32mm), garrots, sparadraps, alcool de 70°, coton hydrophile, eau de javel, les cônes, les micropipettes (de 100 µL, de 20 µL et de 1000 µL), le compresse stériles et les portoirs nous ont servi.
2.4. Réactifs
Cholestérol total (Lot : LIQ466 ; Ref : 41021 ; Exp : 2020-01) : SPINREACT
Cholestérol-HDL (Lot : H119 ; Ref : 1001095 ; Exp : 2020-01) : SPINREACT
13 Réalisé par : Séibo ISSA
triglycérides (Lot : 183C ; Ref : 1002380 ; Exp : 2020-03) : SPINREACT
Contrôle commerciale de marque ELITech.
3. METHODE D’ETUDE
3.1. Type d’étude
Il s’agit d’une étude analytique menée du 23 Juillet au 21 Septembre 2018.
3.2. Echantillonnage
L’échantillonnage a été effectué systématiquement à partir du début du deuxième mois de stage jusqu’à l’obtention de la taille de l’échantillon.
3.3. Population d’étude
La population d’étude était constituée des PVVIH sous antirétroviraux venues au laboratoire du Centre Hospitalier Universitaire Départemental du Borgou et de l’Alibori pour des analyses biochimiques.
3.4. Choix des sujets 3.4.1. Critères d’inclusion
Ont été incluses dans cette étude, les personnes vivant avec le VIH sous ARV.
3.4.2. Critères d’exclusion
Sont exclues de cette étude, les PVVIH qui ne sont pas sous traitement et les sujets séronégatifs.
3.5. Collecte des données
Les prélèvements sanguins ont été effectués à jeûn de 8 à 10 heures sur un tube sec sans gel séparateur. Ces échantillons de sang sont ensuite acheminés immédiatement au laboratoire pour le dosage des paramètres lipidiques.
3.6. Analyse des échantillons 3.6.1. Phase pré-analytique
Prélèvement d’échantillons de sang total
Centrifuger les échantillons à 5000t/minute pendant 5 minutes
Réunir le reste du matériel de travail et attendre que les réactifs soient à la température du laboratoire
Allumer et rincer le spectrophotomètre
Profil lipidique des personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux au Centre Hospitalier Universitaire
Départemental du Borgou et de l’Alibori 2018
14 Réalisé par : Séibo ISSA
3.6.2. Phase analytique
Dosage du cholestérol total
Méthode : Enzymatique en point final couplée à la colorimétrie.
Principe :
Le cholestérol contenu dans les lipoprotéines est sous forme libre et estérifié. Les esters de cholestérol contenus dans le sérum sont hydrolysés par le cholestérol estérase (CE). Ainsi le cholestérol libéré est oxydé par le cholestérol oxydase (CHOD) en delta-4-cholestène-3-one avec formation de peroxyde d'hydrogène. En présence de peroxydase (POD), le peroxyde d'hydrogène formé effectue le couplage oxydatif d'un phénol et d'une 4-aminoantipyrine pour former un dérivé de la quinonéimine de couleur rouge. L'intensité de la coloration est directement proportionnelle à la concentration de cholestérol et est mesurée par photométrie à 500 nm.
Esters cholestérol+ H2O Cholestérol + Acides gras Cholestérol + O2 Cholest-4-ène-3-one + H2O2
2H2O2 + Phénol + 4-Aminophénazone Quinonéimine + 4H2O
Longueur d’onde : 505nm (500-550)
Cuvette : 1cm d’éclairage
Température : 37°C
Utiliser l’eau distillée pour régler le spectrophotomètre sur zéro Tableau I : Mode opératoire du dosage du cholestérol total
Blanc Etalon Echantillon
Réactif (mL) 1,0 1,0 1,0
Etalon (µL) .. 10 ..
Echantillon (µL) .. .. 10
Mélanger et incuber pendant 10 minutes. Lire l’absorbance (A) de l’étalon contre le blanc du réactif. La couleur est stable au moins 60 minutes.
CE CHO D
POD
15 Réalisé par : Séibo ISSA
Dosage du cholestérol-HDL
Méthode : Enzymatique en point final couplée à la colorimétrie.
Principe :
La technique de dosage du cholestérol total s'intéresse au cholestérol contenu dans toutes les lipoprotéines. Pour doser une fraction particulière, des artifices techniques sont utilisés. Les lipoprotéines de très faible densité (VLDL) et faible densité (LDL) du sérum ou du plasma se précipitent avec le phosphotungstate en présence d’ions magnésium. Après leur centrifugation, le surnageant contient les lipoprotéines de hautes densité (HDL). La fraction de cholestérol-HDL est déterminée en employant le réactif de dosage du cholestérol total.
Tableau II : Précipitation du sérum pour le dosage du cholestérol-HDL Prélever dans des tubes à centrifuger :
Réactif (µL) 100
Echantillon (mL) 1,0
Mélanger et laisser reposer 10 minutes à température ambiante. Centrifuger 15 min à 5 000 tours par minutes. Recueillir le surnageant et doser le HDL-cholestérol en suivant le même mode opératoire que celui de la détermination du cholestérol total.
Dosage des triglycérides
Méthode: Enzymatique en point final couplée à la colorimétrie.
Principe :
Les triglycérides contenus dans le sérum en présence d'une lipase donnent du glycérol et des acides gras. Le glycérol sous l'action d'une glycéro-kinase donne le glycérol-3 phosphate. Ce dernier en présence de la glycérol-3-phosphate oxydase (GPO) donne le dihydroxyacétone et du peroxyde d'hydrogène. En présence de peroxydase, le peroxyde d'hydrogène effectue le couplage oxydatif du parachlorophénol et de la 4-aminoantipyrine (4-AAP) pour former un dérivé de la quinonéimine de couleur rouge. L'intensité de la coloration est directement proportionnelle à la concentration en triglycérides et est mesurée par photométrie à 505 nm.
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Départemental du Borgou et de l’Alibori 2018
16 Réalisé par : Séibo ISSA
Tableau III : Mode opératoire du dosage des triglycérides
Blanc Calibration Contrôle Dosage
Réactif (mL) 1,0 1,0 1,0 1,0
Eau distillée (µL) 10 … … …
Standard (µL) … 10 … …
Sérum contrôle (µL) ... … 10 …
Echantillon (µL) … … … 10
Mélanger et lire les absorbances (A) après 11 minutes et 30 secondes d’incubation.
3.6.3. Phase post-analytique
Au cours de cette étape, on transcrit les résultats dans les différents cahiers de paillasses, sur les bons d’examens et nos fiches d’enquêtes.
3.7. Analyses statistiques
Les données issues des manipulations ont été saisies et enregistrées à l’aide d’Excel 2013 et le logiciel Microsoft Word 2013.Les calculs statistiques ont été réalisés à l'aide du logiciel SPSS version 22. Les résultats sont présentés sous forme de Moyenne ± écartype. Le test de Chi2 et le test ANOVA ont été utilisés pour comparer ces résultats et les variations sont jugées significatives pour p < 0,05.
Lipase
GPO
Peroxydas e Glycérol kinase
CHAPITRE III : RESULTATS ET DISCUSSION
Profil lipidique des personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux au Centre Hospitalier Universitaire
Départemental du Borgou et de l’Alibori 2018
18 Réalisé par : Séibo ISSA
1. RESULTATS
La présente étude a porté sur 44 personnes vivant avec le VIH (PVVIH) sous antirétroviraux (ARV).
1.1. Caractéristiques de la population d’étude 1.1.1. Répartition en fonction du sexe
La population d’étude était composée de 25% de sexe masculin contre 75% de sexe féminin avec un sexe ratio H/F égal à 0,33 (figure 3).
Figure 3 : Répartition des PVVIH en fonction du sexe 1.1.2. Distribution selon l'âge
Les sujets de cette étude étaient âgés de 6 à 69 ans avec une moyenne d’âge de 36,09±15,96 ans. La tranche d’âge la plus représentée était celle de 20 à 40 ans soit 54,55% (figure 4).
75%
25%
Féminin Masculin
19 Réalisé par : Séibo ISSA
Figure 4 : Répartition de la population d’étude en classe d’âge 1.2. Profil des paramètres lipidiques
1.2.1. Fréquence des différents niveaux de concentration
Les différentes valeurs des paramètres lipidiques ont été regroupées selon qu’elles soient basses, normales ou élevées. L’hypercholestérolémie totale, l’hypocholestérolémie-HDL et l’hypertriglycéridémie étaient observées respectivement chez 36,36% ; 11,36% et 4,54%. Un risque athérogène a été observé chez 4,55% des PVVIH (figure 5).
X : moyenne ; SD : écartype ; CT : cholestérol total ; HDL-c : Cholestérol-HDL ; TG : Triglycérides ; I.A : Indice d’athérogénicité
Figure 5 : Distribution des différents paramètres lipidiques selon le niveau de concentration 6,82
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Départemental du Borgou et de l’Alibori 2018
20 Réalisé par : Séibo ISSA
1.2.2. Comparaison des paramètres évalués
Les sujets d’étude présentaient en moyenne des valeurs normales pour les différents paramètres lipidiques étudiés. Les valeurs moyennes du cholestérol total, de HDL-cholestérol, des triglycérides et de l’indice d’athérogénicité étaient respectivement 1,79±0,56 g/L ; 0,76±0,32 g/L ; 0,95±0,43 g/L ; 2,64±1,10 g/L
Tableau IV : Valeurs moyennes des paramètres lipidiques
Paramètres X±SD Min Max
1.3. Profil lipidique en fonction de la durée et du type de traitement
1.3.1. Influence de la durée du traitement sur la variation des paramètres lipidiques
L’impact de la durée du traitement sur la variation des paramètres lipidiques a été mis en évidence par comparaison du profil lipidique des PVVIH dont la durée du traitement était inférieure ou égale à un an contre ceux dont le traitement avait durée plus d’un an. Il ressort du tableau V que la durée du traitement n’influençait pas la variation du profil lipidique de la population d’étude (p > 0,05).
Tableau V : Influence de la durée du traitement sur la cholestérolémie, la triglycéridémie et l’indice d’athérogénicité
21 Réalisé par : Séibo ISSA
1.3.2. Influence du type de traitement sur la variation des paramètres évalués
Les concentrations sériques de chaque paramètre lipidique ont été distribuées selon le type de traitement antirétroviral et comparées entre elles à l’aide du test ANOVA (analyse of variance). Il ressort du tableau VI que le type de traitement n’influait pas sur la variation des paramètres lipidiques des sujets (p > 0,05).
Tableau VI : Influence du type de traitement sur la cholestérolémie, la triglycéridémie et Ritonavir ; ATV : Atazanavir ; NVP : Névirapine.
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22 Réalisé par : Séibo ISSA
2. DISCUSSION
Les paramètres lipidiques tels que le cholestérol total, le HDL-cholestérol et les triglycérides chez les personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux ont été déterminés. L’objectif était d’analyser l’effet du traitement antirétroviral sur le profil lipidique des PVVIH.
La population d’étude était dominée par le sexe féminin avec 75% des sujets soit un sexe ratio Homme/Femme (H/F) égal à 0,33. Cette prédominance féminine a été retrouvée dans la plupart des études menées sur le VIH, notamment celle de Karakodjo qui a obtenu un sexe ratio H/F de 0,37 en 2011 au Mali (Karakodjo, 2011). Les observations faites par Sawadogo et al. en 2014 au Burkina-Faso ont rapporté un sexe ratio de 3,8 en faveur des femmes (Sawadogo et al., 2014). Les femmes sont probablement plus susceptibles d’être infectées par le VIH au cours de n’importe quel genre de rapport sexuel que les hommes en raison de facteurs biologiques (zones de muqueuses exposées durant les rapports sexuels sont plus étendues, plus grande quantité de fluides transférés par l’homme, plus forte teneur en virus des fluides sexuels transmis par les hommes, microdéchirures des tissus du vagin ou du rectum). Par ailleurs, les jeunes femmes sont plus particulièrement susceptibles d’être infectées car dans certaines régions, les normes de genre permettent aux hommes d’avoir plus de partenaires sexuels que les femmes. La grande surface de contact génital, les infections récurrentes et bien d’autres facteurs socio-économiques rendent donc les femmes plus vulnérables à cette infection (OMS, 2009). Ce constat peut être aussi lié à la prédominance du sexe féminin dans la population en générale.
La moyenne d’âge de la population d’étude était de 36,09±15,96 ans. Ces résultats sont proches de ceux rapportés par Alassani et al., (40,7±9,71 ans) à Porto-Novo en 2016 (Alassani et al. 2016). La tranche d’âge la plus représentée était celle de 20 à 40 soit 54,55%
des sujets. Karakodjo au Mali en 2011 a obtenu une tranche d’âge de 22 à 40 comme la plus représentée (Karakodjo, 2011). Ces résultats prouvent que le VIH frappe la tranche d’âge sexuellement active et économiquement productive. C’est donc une catastrophe socio-économique.
L’hypercholestérolémie totale, l’hypocholestérolémie-HDL et l’hypertriglycéridémie étaient observées respectivement chez 36,36% ; 11,36% et 4,55% des sujets, valeurs différentes de celles rapportées par Alassani et al. en 2016 (41,39% ; 27,87% et 18,03%) à Porto-Novo (Alassani et al. 2016) et de celles obtenues par Sawadogo et al., (12,5% ; 12% et 24%) en 2014 au Burkina-Faso (Sawadogo et al., 2014). La différence des caractéristiques générales
23 Réalisé par : Séibo ISSA
des différentes populations d’études (taille de l’échantillon surtout) et de la combinaison thérapeutique prédominante pourrait expliquer ces observations.
Les personnes vivant avec le VIH sous traitement antirétroviral présentaient en moyenne des taux sériques normaux pour les différents paramètres lipidiques étudiés. Ainsi, le cholestérol total était égal à 1,79±0,56 g/L; HDL-cholestérol égal à 0,76±0,32 g/L et triglycérides égal à 0,95±0,43 g/L. Ces résultats sont en accord avec ceux obtenus par Alassani et al. (1,90±0,37 g/L ; 0,66±0,14 g/L et 0,85±0,25 g/L) à Porto-Novo en 2016 (Alassani et al. 2016).
L’efficacité de la multithérapie (trithérapie) hautement active sous laquelle tous les sujets de l’étude étaient, pourrait expliquer ce constat. Le nombre très peu élevé de sujets à risque athérogène (2/44) soit 4,55% en est une preuve.
Par ailleurs, la durée du traitement et le type d’antirétroviraux n’influaient sur le niveau sérique des paramètres lipidiques évalués. C’est donc un bon signe en faveur de l’utilisation des ARV. En 2005, les travaux de Hosein ont rapporté des résultats similaires aux nôtres lors d’une étude menée aux Etats-Unis sur un groupe de sujets sous multithérapie. En effet, cette étude avait révélé que sur 37 000 PVVIH soignées aux Etats-Unis entre 1995 et 2001, le pourcentage d’entre elles ayant succombé aux complications de maladies cardiovasculaires était très faible et diminuait au fil du temps. En outre, une analyse approfondie portant sur 1 000 PVVIH qui prenaient des inhibiteurs de la protéase depuis au moins quatre ans n’a permis de constater aucune augmentation significative des complications cardiovasculaires ou de la mortalité liée à ces derniers (Hosein, 2005). Le traitement antirétroviral présenterait donc une influence non significative sur le profil lipidique des personnes vivant avec le VIH.
Toutefois, cette étude analytique n'a permis de faire qu'une photographie des paramètres lipidiques de chaque individu pendant l'étude. Il n’a pas permis de suivre l'évolution des paramètres lipidiques pendant une durée un peu plus longue afin d’évaluer les effets secondaires rapportés dans la littérature.
CONCLUSION ET SUGGESTIONS
25 Réalisé par : Séibo ISSA
CONCLUSION
Cette étude prospective de type analytique relative à la détermination du profil lipidique des PVVIH sous traitement antirétroviral a été menée au Centre Hospitalier Universitaire Départemental du Borgou et de l’Alibori. Au terme de ce travail, une variation très peu significative du profil lipidique des personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux a été observée. Le risque athérogène très faible, la non influence de la durée du traitement et du type d’antirétroviraux sur le profil lipidique des personnes vivant avec le VIH permet de conclure que l’utilisation des antirétroviraux au cours de l’infection par le VIH entrainerait moins de complications cardiovasculaires. Bien que l’échantillon soit limité, le présent travail montre l’intérêt de l’utilisation de la multithérapie antirétrovirale (trithérapie) dans la prise en charge des personnes vivant avec le VIH.
SUGGESTIONS A l’issue de cette étude, nous suggérons :
A la direction de CIPEC-B/A
De faciliter l’accès aux dossiers des personnes vivant avec le VIH à ceux qui veulent faire les recherches afin de permettre des études plus fiables sur les effets secondaires des ARV.
Aux prescripteurs
De tenir compte des troubles lipidiques dans la prescription des examens de routines lors du suivi de la prise en charge des PVVIH.
Aux bailleurs de fonds et autorités sanitaires
Favoriser la réalisation de ce type d’étude par un soutien financier conséquent.
REFERENCES
27 Réalisé par : Séibo ISSA
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Profil lipidique des personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux au Centre Hospitalier Universitaire
Départemental du Borgou et de l’Alibori 2018
28 Réalisé par : Séibo ISSA
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TABLE DES MATIERES
Profil lipidique des personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux au Centre Hospitalier Universitaire
Départemental du Borgou et de l’Alibori 2018
30 Réalisé par : Séibo ISSA
DEDICACE ... v
REMERCIEMENTS ... vi
HOMMAGES ... viii
SIGLES ET ABREVIATIONS ... ix
LISTE DES TABLEAUX ... x
CHAPITRE I : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE ... 2
1. VIRUS DE L’IMMUNODEFICIENCE HUMAINE (VIH) ... 3
1.1. Classification taxonomique ... 3
1.2. Structure du virus ... 3
1.3.Epidémiologie ... 4
1.4.Physiopathologie du syndrome de l’immunodéficience acquise (SIDA) ... 4
1.5.Transmission ... 4
1.1.1.Transmission sexuelle ... 4
1.1.1. Transmission par voie sanguine ... 5
1.1.2.Transmission mère-enfant (TME) ... 5
1.6.Diagnostic ... 5
2.ANTIRETROVIRAUX ... 5
3.LIPIDES ... 6
3.1.Définition ... 6
3.2.Rôle biologique des lipides ... 6
3.2.1.Rôle énergétique ... 6
3.2.2.Rôle structural ... 7
3.2.3.Rôle fonctionnel ... 7
31 Réalisé par : Séibo ISSA
4.ANTIRETROVIRAUX ET LIPIDES ... 7
CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODE D’ETUDE………...8
1.CADRE ... 9
1.4.Présentation du service de laboratoire de biologie clinique ... 10
1.5.Les différents examens praticables dans le laboratoire ... 11
1.5.1.Section hématologie-Parasitologie ... 11
1.5.2.Section Bactériologie-Parasitologie ... 12
1.5.3.Section de la Biochimie ... 12
2.MATERIEL D’ETUDE ... 12
Profil lipidique des personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux au Centre Hospitalier Universitaire
Départemental du Borgou et de l’Alibori 2018
32 Réalisé par : Séibo ISSA
3.6.Analyse des échantillons ... 14
3.6.1.Phase pré-analytique ... 14
3.6.2.Phase analytique ... 14
3.6.3.Phase post-analytique ... 16
3.7.Analyses statistiques ... 16
CHAPITRE III : RESULTATS ET DISCUSSION ... 17
1.RESULTATS ... 18
1.1.Caractéristiques de la population d’étude ... 18
1.1.2.Répartition en fonction du sexe ... 18
1.1.3.Distribution selon l'âge ... 18
1.2.Profil des paramètres lipidiques ... 19
1.2.1.Fréquence des différents niveaux de concentration ... 19
1.2.2.Comparaison des paramètres évalués ... 20
1.3.Profil lipidique en fonction de la durée et du type de traitement ... 20
1.3.1.Influence de la durée du traitement sur la variation des paramètres lipidiques ... 20
1.3.2.Influence du type de traitement sur la variation des paramètres évalués ... 21
2. DISCUSSION ... 22
CONCLUSION ET SUGGESTIONS ... 24
REFERENCES ... 26
TABLE DES MATIERES ... 29