CHAPITRE I : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE
2. ANTIRETROVIRAUX
Depuis l’utilisation des multithérapies antirétrovirales, l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine (VIH) est devenue une maladie chronique. Les progrès dans le domaine du traitement antirétroviral (ARV) ont entrainé l’amélioration de la prise en charge des patients, de la qualité et de l’espérance de vie. Les antirétroviraux sont des molécules virostatiques inhibant la réplication virale à différentes étapes du cycle du VIH. Le traitement antirétroviral associe 3 ou plus de molécules. Les antirétroviraux sont classés selon leur mode d’action en 4 classes (Ammari, 2013).
Inhibiteurs nucléosidiques et nucléotidiques de la transcriptase (INTI)
Inhibiteurs non nucléosidiques de la TI (INNTI)
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Inhibiteurs de la protéase (IP)
Inhibiteurs d’intégrase
Inhibiteurs de fusion
Inhibiteurs des récepteurs CCR5
Figure 2 : Cycle du VIH et cibles des antirétroviraux 3. LIPIDES
3.1. Définition
Ce sont des molécules organiques insolubles dans l’eau et solubles dans les solvants organiques comme le benzène, le chloroforme, l’éther. Ils sont caractérisés par la présence dans leur noyau d’au moins un acide gras. Les dérivés polyisopréniques (cholestérol, stéroïdes, vitamine D) sont rattachés aux lipides en raison de leur insolubilité dans l’eau. Il existe une distinction entre lipides simples (l'hydrolyse libère un alcool et un ou plusieurs acides gras) et lipides complexes (l'hydrolyse libère non seulement un alcool et des acides gras mais aussi de l'acide phosphorique, des oses, l'azote) (Touitou, 2005).
3.2. Rôle biologique des lipides 3.2.1. Rôle énergétique
Les lipides représentent environ 20% du poids du corps. Les acides gras sont des substrats énergétiques particulièrement pour les muscles squelettiques, le muscle cardiaque et le foie (Collège des enseignants de nutrition, 2010-2011).
7 Réalisé par : Séibo ISSA
3.2.2. Rôle structural
Les lipides contribuent à l’architecture membranaire des cellules. La bicouche lipidique est essentiellement construite de lipides complexes dont 70 à 80% sont représentés par les phospholipides. Le cholestérol est également un élément constitutif important (Collège des enseignants de nutrition, 2010-2011).
3.2.3. Rôle fonctionnel
Les rôles fonctionnels des lipides sont entre autres la synthèse des eicosanoïdes, la modulation de l’expression des gènes et la régulation de la transmission membranaire du signal (Collège des enseignants de nutrition, 2010-2011).
4. ANTIRETROVIRAUX ET LIPIDES
La multithérapie antirétrovirale a un impact spectaculaire sur la santé des personnes vivant avec le VIH (PVVIH) grâce à la suppression du VIH et au rétablissement du système immunitaire qu’elle favorise. Par conséquent, les PVVIH sont moins sujettes aux infections liées au SIDA et vivent plus longtemps que par le passé. Mais la multithérapie a un côté sombre : les effets secondaires. Il se peut que ces effets secondaires soient partiellement exacerbés par les effets de l’infection au VIH et le vieillissement. Les effets secondaires les plus troublants sont regroupés dans un seul syndrome appelé lipodystrophie. Cette dernière comprend plusieurs manifestations et symptômes physiques ainsi que des perturbations métaboliques qui se révèlent dans les analyses de laboratoire (Boccara et al., 2005).
Les changements physiques associés à la lipodystrophie sont les suivants :
disparition de la graisse sous-cutanée, qui provoque l’émaciation des membres, des fesses, du visage et l’augmentation du volume du ventre;
augmentation du volume des seins chez les femmes.
Les tests de laboratoire peuvent révéler les anomalies suivantes :
augmentation des taux de lipides (graisses) tels que les triglycérides et le « mauvais » cholestérol (LDL-cholestérol);
augmentation de la glycémie et du taux d’insuline;
diminution du taux du « bon » cholestérol (HDL-cholestérol).
La combinaison de ces changements physiques notamment l’augmentation du volume du ventre et de l’augmentation des taux de lipides, de sucre et d’insuline fait augmenter le risque de maladies cardiovasculaires (MCV) pour les PVVIH touchées.
CHAPITRE II : CADRE, MATERIEL ET
METHODE D’ETUDE
9 Réalisé par : Séibo ISSA
1. CADRE
1.1.Cadre institutionnel
L’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi (EPAC) qui à l’origine était nommée Collège Polytechnique Universitaire (CPU) est créée en février 1977 pour répondre à un besoin de formation technique au niveau de l’enseignement supérieur. L’enseignement à l’EPAC est organisé en deux secteurs : le secteur industriel et le secteur biologique dans lequel s’est déroulée notre formation au département de Génie de Biologie Humaine.
1.2.Cadre technique
1.2.1. Présentation du CHUD-B/A
1.2.1.1.Historique
Créé en 1959, le Centre Hospitalier Universitaire Départemental du Borgou et de l’Alibori a connu plusieurs mutations de statuts. Ainsi, de Poste d’Assistance Médicale de la Circonscription de Parakou, il est devenu Centre Hospitalier Provincial du Borgou (CHPB) en 1985, puis en 1990, Centre Hospitalier Départemental du Borgou et de l’Alibori (CHD-B/A) selon le décret N°90-347 du 14 novembre 1990 portant statut des Centres Hospitaliers Départementaux et Formations Sanitaires assimilées. A l’avènement de la Faculté de Médecine de l’Université de Parakou, il est érigé en espace universitaire depuis Août 2014 sous l’appellation de Centre Hospitalier Universitaire Départemental du Borgou et de l’Alibori (CHUD-B/A).
D’une capacité d’accueil de 360 lits, le CHUD-B/A a pour mission d’accueillir et de soigner les malades. Il fait désormais partie intégrante de l’espace Hospitalo-universitaire du Bénin.
Dès lors, le Centre accomplit désormais trois missions essentielles que sont : la mission de soin, la mission de formation et la mission de recherche. L’actuel Directeur est le Maître de Conférences Agrégé Antoine Dodji MENSAH. Formation Médico-Sociale (EFMS) ; à l’Ouest par l’école primaire publique la Montagne.
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10 Réalisé par : Séibo ISSA 1.3. Organigramme
Le CHUD-B/A est composé de deux grands secteurs : le secteur administratif et le secteur médicotechnique.
Le secteur administratif Il est constitué de deux services :
le Service des Affaires Administratives et Economiques (SAAE) ;
et le Service des Affaires Financières (SAF).
Le secteur médicotechnique
Il est dirigé par un chef médicotechnique et regroupe les services ci-après :
le Service d’Anesthésie, de la Réanimation et des Urgences (SARU) ;
le Service de Gynécologie-Obstétrique ;
le service de Kinésithérapie et d’Appareillage Orthopédique (SKAO) ;
le Service de Chirurgie ;
le Service Social ;
le Service de Médecine Interne ;
le Service de Pédiatrie ;
le Service d’Oto- Rhino-Laryngologie (ORL) ;
le Service de Laboratoire de biologie clinique où s’est déroulé notre stage;
le service d’Imagerie Médicale;
le service d’ophtalmologie;
le service de pharmacie hospitalière
1.4.Présentation du service de laboratoire de biologie clinique
Le laboratoire du CHUD-B/A est situé sur l’étage du bâtiment principal de l’hôpital et dispose d’une salle de prélèvement sanguin, d’une salle de prélèvement bactériologique, de deux salles de gardes, d’un secrétariat, de trois salles de manipulation, d’un magasin et des toilettes.
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Il est dirigé par un Médecin clinico-chimiste/biologiste moléculaire assisté par un surveillant général.
Les prélèvements se font tous les jours ouvrables de 8 heures à 10 heures et les analyses des échantillons commencent à partir de 10 heures. Les prélèvements biologiques effectués sont ensuite répartis dans les trois sections que compte le laboratoire:
Section Hématologie-Parasitologie
Section Bactériologie-Parasitologie
Section Biochimie-Sérologie
Toutes ces sections occupent chacune une salle. Les examens de parasitologie et de sérologie sont répartis dans les autres sections. Pour le reste des examens sérologiques, le CIPEC et la banque de sang disposent chacun d’un laboratoire leur permettant de les effectuer. Les résultats sont disponibles à partir de 16 heures. Pour les jours fériés et la garde, seuls les prélèvements d’urgence venant des différents services sont analysés. Chaque section de laboratoire est dirigée par un ingénieur des travaux qui est chargé de gérer le personnel et de veiller à la bonne exécution de l’ensemble des prestations de la section. Au laboratoire du CHUD-B/A, la permanence est assurée du lundi au vendredi de 8 heures à 16 heures et la garde de 16 heures au lendemain 8 heures. Les jours fériés, les gardes se font de 8 heures au lendemain 8 heures. Deux (02) techniciens assurent la garde par jour ; l’un en biochimie et l’autre en hématologie.
1.5.Les différents examens praticables dans le laboratoire
1.5.1. Section hématologie-Parasitologie
La section d’hématologie du laboratoire du CHUD /B-A s’occupe de la réalisation de plusieurs examens comme :
la Numération Formule Sanguine (NFS) et celle des plaquettes
la vitesse de sédimentation (VS)
la Numération des globules blancs
la Numération des réticulocytes
L’examen parasitologique réalisé dans cette section est la goutte épaisse et la densité parasitaire pour le diagnostic du paludisme.
1.5.2. Section Bactériologie-Parasitologie
La section de la bactériologie constitue l’une des sections du laboratoire qui s’occupe du diagnostic des infections bactériennes à travers divers examens à savoir :
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l’Examen Cytobactériologique des Urines avec antibiogramme : ECBU + ATB
l’Examen Cytobactériologique Bactériologique du liquide céphalo-rachidien (LCR) (ECB du LCR)
l’ECB du prélèvement vaginal (PV) plus antibiogramme (PV+ ATB)
l’ECB des liquides de ponction (pleural, d’ascite) + ATB
l’ECB du pus + ATB
l’ECB du prélèvement urétral (PU) + ATB
la coprologie parasitaire
le spermogramme + antibiogramme
la spermoculture + antibiogramme
NB : L’ECBU + ATB et l’ECB du LCR étaient les plus couramment réalisés.
1.5.3. Section de la Biochimie
Dans cette section, se réalisent les examens biochimiques à savoir : glycémie, urémie, créatininémie, uricémie, cholestérolémie total et HDL, les triglycérides, glucorrachie, Protidémie, Calcémie, magnésémie, bilirubinémie totale et conjuguée, ionogramme transaminases (TGO ; TGP), ainsi qu’une partie des examens sérologiques notamment CRP, ASLO, sérodiagnostique de Widal et Felix (SDW), les hépatites.
2. MATERIEL D’ETUDE 2.1. Matériel biologique
Il s’agissait des échantillons de sang prélevés dans des tubes secs sans gel séparateur.
2.2. Equipements
Le réfrigérateur, la centrifugeuse (BENCH-TOP CENTRIFUGE) et le spectrophotomètre semi-automatique Rayto RT-9200 ont été utilisés.
2.3. Consommables
Les marqueurs, tubes secs stériles sans gel séparateur, aiguilles vacutainer 21Gx1-1/4 (0,8x32mm), garrots, sparadraps, alcool de 70°, coton hydrophile, eau de javel, les cônes, les micropipettes (de 100 µL, de 20 µL et de 1000 µL), le compresse stériles et les portoirs nous ont servi.
2.4. Réactifs
Cholestérol total (Lot : LIQ466 ; Ref : 41021 ; Exp : 2020-01) : SPINREACT
Cholestérol-HDL (Lot : H119 ; Ref : 1001095 ; Exp : 2020-01) : SPINREACT
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triglycérides (Lot : 183C ; Ref : 1002380 ; Exp : 2020-03) : SPINREACT
Contrôle commerciale de marque ELITech.
3. METHODE D’ETUDE
3.1. Type d’étude
Il s’agit d’une étude analytique menée du 23 Juillet au 21 Septembre 2018.
3.2. Echantillonnage
L’échantillonnage a été effectué systématiquement à partir du début du deuxième mois de stage jusqu’à l’obtention de la taille de l’échantillon.
3.3. Population d’étude
La population d’étude était constituée des PVVIH sous antirétroviraux venues au laboratoire du Centre Hospitalier Universitaire Départemental du Borgou et de l’Alibori pour des analyses biochimiques.
3.4. Choix des sujets 3.4.1. Critères d’inclusion
Ont été incluses dans cette étude, les personnes vivant avec le VIH sous ARV.
3.4.2. Critères d’exclusion
Sont exclues de cette étude, les PVVIH qui ne sont pas sous traitement et les sujets séronégatifs.
3.5. Collecte des données
Les prélèvements sanguins ont été effectués à jeûn de 8 à 10 heures sur un tube sec sans gel séparateur. Ces échantillons de sang sont ensuite acheminés immédiatement au laboratoire pour le dosage des paramètres lipidiques.
3.6. Analyse des échantillons 3.6.1. Phase pré-analytique
Prélèvement d’échantillons de sang total
Centrifuger les échantillons à 5000t/minute pendant 5 minutes
Réunir le reste du matériel de travail et attendre que les réactifs soient à la température du laboratoire
Allumer et rincer le spectrophotomètre
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3.6.2. Phase analytique
Dosage du cholestérol total
Méthode : Enzymatique en point final couplée à la colorimétrie.
Principe :
Le cholestérol contenu dans les lipoprotéines est sous forme libre et estérifié. Les esters de cholestérol contenus dans le sérum sont hydrolysés par le cholestérol estérase (CE). Ainsi le cholestérol libéré est oxydé par le cholestérol oxydase (CHOD) en delta-4-cholestène-3-one avec formation de peroxyde d'hydrogène. En présence de peroxydase (POD), le peroxyde d'hydrogène formé effectue le couplage oxydatif d'un phénol et d'une 4-aminoantipyrine pour former un dérivé de la quinonéimine de couleur rouge. L'intensité de la coloration est directement proportionnelle à la concentration de cholestérol et est mesurée par photométrie à 500 nm.
Esters cholestérol+ H2O Cholestérol + Acides gras Cholestérol + O2 Cholest-4-ène-3-one + H2O2
2H2O2 + Phénol + 4-Aminophénazone Quinonéimine + 4H2O
Longueur d’onde : 505nm (500-550)
Cuvette : 1cm d’éclairage
Température : 37°C
Utiliser l’eau distillée pour régler le spectrophotomètre sur zéro Tableau I : Mode opératoire du dosage du cholestérol total
Blanc Etalon Echantillon
Réactif (mL) 1,0 1,0 1,0
Etalon (µL) .. 10 ..
Echantillon (µL) .. .. 10
Mélanger et incuber pendant 10 minutes. Lire l’absorbance (A) de l’étalon contre le blanc du réactif. La couleur est stable au moins 60 minutes.
CE CHO D
POD
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Dosage du cholestérol-HDL
Méthode : Enzymatique en point final couplée à la colorimétrie.
Principe :
La technique de dosage du cholestérol total s'intéresse au cholestérol contenu dans toutes les lipoprotéines. Pour doser une fraction particulière, des artifices techniques sont utilisés. Les lipoprotéines de très faible densité (VLDL) et faible densité (LDL) du sérum ou du plasma se précipitent avec le phosphotungstate en présence d’ions magnésium. Après leur centrifugation, le surnageant contient les lipoprotéines de hautes densité (HDL). La fraction de cholestérol-HDL est déterminée en employant le réactif de dosage du cholestérol total.
Tableau II : Précipitation du sérum pour le dosage du cholestérol-HDL Prélever dans des tubes à centrifuger :
Réactif (µL) 100
Echantillon (mL) 1,0
Mélanger et laisser reposer 10 minutes à température ambiante. Centrifuger 15 min à 5 000 tours par minutes. Recueillir le surnageant et doser le HDL-cholestérol en suivant le même mode opératoire que celui de la détermination du cholestérol total.
Dosage des triglycérides
Méthode: Enzymatique en point final couplée à la colorimétrie.
Principe :
Les triglycérides contenus dans le sérum en présence d'une lipase donnent du glycérol et des acides gras. Le glycérol sous l'action d'une glycéro-kinase donne le glycérol-3 phosphate. Ce dernier en présence de la glycérol-3-phosphate oxydase (GPO) donne le dihydroxyacétone et du peroxyde d'hydrogène. En présence de peroxydase, le peroxyde d'hydrogène effectue le couplage oxydatif du parachlorophénol et de la 4-aminoantipyrine (4-AAP) pour former un dérivé de la quinonéimine de couleur rouge. L'intensité de la coloration est directement proportionnelle à la concentration en triglycérides et est mesurée par photométrie à 505 nm.
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Tableau III : Mode opératoire du dosage des triglycérides
Blanc Calibration Contrôle Dosage
Réactif (mL) 1,0 1,0 1,0 1,0
Eau distillée (µL) 10 … … …
Standard (µL) … 10 … …
Sérum contrôle (µL) ... … 10 …
Echantillon (µL) … … … 10
Mélanger et lire les absorbances (A) après 11 minutes et 30 secondes d’incubation.
3.6.3. Phase post-analytique
Au cours de cette étape, on transcrit les résultats dans les différents cahiers de paillasses, sur les bons d’examens et nos fiches d’enquêtes.
3.7. Analyses statistiques
Les données issues des manipulations ont été saisies et enregistrées à l’aide d’Excel 2013 et le logiciel Microsoft Word 2013.Les calculs statistiques ont été réalisés à l'aide du logiciel SPSS version 22. Les résultats sont présentés sous forme de Moyenne ± écartype. Le test de Chi2 et le test ANOVA ont été utilisés pour comparer ces résultats et les variations sont jugées significatives pour p < 0,05.
Lipase
GPO
Peroxydas e Glycérol kinase
CHAPITRE III : RESULTATS ET DISCUSSION
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1. RESULTATS
La présente étude a porté sur 44 personnes vivant avec le VIH (PVVIH) sous antirétroviraux (ARV).
1.1. Caractéristiques de la population d’étude 1.1.1. Répartition en fonction du sexe
La population d’étude était composée de 25% de sexe masculin contre 75% de sexe féminin avec un sexe ratio H/F égal à 0,33 (figure 3).
Figure 3 : Répartition des PVVIH en fonction du sexe 1.1.2. Distribution selon l'âge
Les sujets de cette étude étaient âgés de 6 à 69 ans avec une moyenne d’âge de 36,09±15,96 ans. La tranche d’âge la plus représentée était celle de 20 à 40 ans soit 54,55% (figure 4).
75%
25%
Féminin Masculin
19 Réalisé par : Séibo ISSA
Figure 4 : Répartition de la population d’étude en classe d’âge 1.2. Profil des paramètres lipidiques
1.2.1. Fréquence des différents niveaux de concentration
Les différentes valeurs des paramètres lipidiques ont été regroupées selon qu’elles soient basses, normales ou élevées. L’hypercholestérolémie totale, l’hypocholestérolémie-HDL et l’hypertriglycéridémie étaient observées respectivement chez 36,36% ; 11,36% et 4,54%. Un risque athérogène a été observé chez 4,55% des PVVIH (figure 5).
X : moyenne ; SD : écartype ; CT : cholestérol total ; HDL-c : Cholestérol-HDL ; TG : Triglycérides ; I.A : Indice d’athérogénicité
Figure 5 : Distribution des différents paramètres lipidiques selon le niveau de concentration 6,82
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1.2.2. Comparaison des paramètres évalués
Les sujets d’étude présentaient en moyenne des valeurs normales pour les différents paramètres lipidiques étudiés. Les valeurs moyennes du cholestérol total, de HDL-cholestérol, des triglycérides et de l’indice d’athérogénicité étaient respectivement 1,79±0,56 g/L ; 0,76±0,32 g/L ; 0,95±0,43 g/L ; 2,64±1,10 g/L
Tableau IV : Valeurs moyennes des paramètres lipidiques
Paramètres X±SD Min Max
1.3. Profil lipidique en fonction de la durée et du type de traitement
1.3.1. Influence de la durée du traitement sur la variation des paramètres lipidiques
L’impact de la durée du traitement sur la variation des paramètres lipidiques a été mis en évidence par comparaison du profil lipidique des PVVIH dont la durée du traitement était inférieure ou égale à un an contre ceux dont le traitement avait durée plus d’un an. Il ressort du tableau V que la durée du traitement n’influençait pas la variation du profil lipidique de la population d’étude (p > 0,05).
Tableau V : Influence de la durée du traitement sur la cholestérolémie, la triglycéridémie et l’indice d’athérogénicité
21 Réalisé par : Séibo ISSA
1.3.2. Influence du type de traitement sur la variation des paramètres évalués
Les concentrations sériques de chaque paramètre lipidique ont été distribuées selon le type de traitement antirétroviral et comparées entre elles à l’aide du test ANOVA (analyse of variance). Il ressort du tableau VI que le type de traitement n’influait pas sur la variation des paramètres lipidiques des sujets (p > 0,05).
Tableau VI : Influence du type de traitement sur la cholestérolémie, la triglycéridémie et Ritonavir ; ATV : Atazanavir ; NVP : Névirapine.
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2. DISCUSSION
Les paramètres lipidiques tels que le cholestérol total, le HDL-cholestérol et les triglycérides chez les personnes vivant avec le VIH sous antirétroviraux ont été déterminés. L’objectif était d’analyser l’effet du traitement antirétroviral sur le profil lipidique des PVVIH.
La population d’étude était dominée par le sexe féminin avec 75% des sujets soit un sexe ratio Homme/Femme (H/F) égal à 0,33. Cette prédominance féminine a été retrouvée dans la plupart des études menées sur le VIH, notamment celle de Karakodjo qui a obtenu un sexe ratio H/F de 0,37 en 2011 au Mali (Karakodjo, 2011). Les observations faites par Sawadogo et al. en 2014 au Burkina-Faso ont rapporté un sexe ratio de 3,8 en faveur des femmes (Sawadogo et al., 2014). Les femmes sont probablement plus susceptibles d’être infectées par le VIH au cours de n’importe quel genre de rapport sexuel que les hommes en raison de facteurs biologiques (zones de muqueuses exposées durant les rapports sexuels sont plus étendues, plus grande quantité de fluides transférés par l’homme, plus forte teneur en virus des fluides sexuels transmis par les hommes, microdéchirures des tissus du vagin ou du rectum). Par ailleurs, les jeunes femmes sont plus particulièrement susceptibles d’être infectées car dans certaines régions, les normes de genre permettent aux hommes d’avoir plus de partenaires sexuels que les femmes. La grande surface de contact génital, les infections récurrentes et bien d’autres facteurs socio-économiques rendent donc les femmes plus vulnérables à cette infection (OMS, 2009). Ce constat peut être aussi lié à la prédominance du sexe féminin dans la population en générale.
La moyenne d’âge de la population d’étude était de 36,09±15,96 ans. Ces résultats sont proches de ceux rapportés par Alassani et al., (40,7±9,71 ans) à Porto-Novo en 2016 (Alassani et al. 2016). La tranche d’âge la plus représentée était celle de 20 à 40 soit 54,55%
La moyenne d’âge de la population d’étude était de 36,09±15,96 ans. Ces résultats sont proches de ceux rapportés par Alassani et al., (40,7±9,71 ans) à Porto-Novo en 2016 (Alassani et al. 2016). La tranche d’âge la plus représentée était celle de 20 à 40 soit 54,55%