Résultats

2.1 Validation de la souris C57BL/6 âgée de 18 mois comme modèle d’arthrose

Ce modèle n’ayant été que rarement utilisé auparavant, nous avons tout d’abord voulu vérifier que les souris de 18 mois développent bien de l’arthrose, en les comparants à des souris de 6 mois, qui n’ont pas encore développé la maladie. Pour cela, nous avons réalisé des coupes histologiques, que nous avons comparé à des radiographies prises des mêmes articulations (figure 40). Des sections colorées à la Safranin-O sont représentées en figure 40A, B, D et E. Les figures 40A et B sont représentatives d’une articulation de souris de 6 mois ; le cartilage articulaire est coloré en rouge, donc riche en PG, et les ménisques sont de taille normale. En revanche, les coupes d’articulations de souris de 18 mois (figure 40D et E) montrent un élargissement des ménisques (flèche rouge en figure 40D), ainsi qu’une perte de coloration, qui reflète une perte de MEC, voire une érosion complète du cartilage articulaire (flèche noire en figure 40E). Les radiographies des mêmes articulations (figure 40C et F) montrent un élargissement important et une déformation des ménisques chez les souris de 18 mois (flèche rouge), ainsi qu’une sclérose de l’os sous-chondral (flèche blanche), la formation d’ostéophytes et des calcifications des ligaments (visibles en figure 41A).

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Figure 40 : Sections histologiques frontales d’articulations de souris C57BL/6 colorées à la Safranin-O, et radiographies correspondantes. A-B-C = souris de 6 mois ; D-E-F = souris de 18 mois. Les flèches rouges indiquent un élargissement des ménisques, la flèche noire l’érosion du cartilage articulaire, et la flèche blanche la sclérose de l’os sous-chondral

2.2 Validation des méthodes non invasives utilisées pour évaluer la progression de l’arthrose

L’utilisation de la radiographie et du CatWalk® n’ayant jamais été validée chez la souris C57BL/6 vieillissante, nous avons d’abord réalisé une étude longitudinale du score radiologique d’arthrose et des paramètres de marche évalués par le CatWalk® chez des souris à différents âges (6, 10, 18 et 22 mois).

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Etude radiologique : Des images radiologiques représentatives des articulations postérieures des souris pour chaque score radiologique sont rassemblées en figure 41A. Le scoring de chacune des articulations nous a permis d’observer une diminution globale des scores 0-1 entre 6 et 22 mois, et une augmentation des scores 2-3 avec l’âge. Les scores 4-5 et 6-7 augmentent à 18 mois et à 22 mois, alors que les scores 8-9 ne sont détectés que chez les souris de 22 mois (figure 41B). Nous avons de plus caractérisé l’évolution de chaque critère radiologique dans les différents groupes de souris, et on observe une augmentation de chacun des paramètres avec l’âge (figure 41C).

Figure 41 : Analyse radiologique de la progression de l’arthrose chez la souris C57BL/6 mâle vieillissante. (A) Radiographie représentatives de chaque score radiologique. (B) Scores radiologiques déterminés pour chaque groupe de souris (6, 10, 18 et 22 mois). (C) Evolution de chaque critère radiologique avec l’âge : ménisques (M), ostéophytes (OF), sclérose de l’os sous- chondral (SS), hauteur de l’espace articulaire (JS) et calcifications (C)

Etude de la démarche : L’analyse de la démarche avec le système CatWalk® a été réalisée chez les souris de 6 mois et les souris de 18 mois au début de l’étude afin d’identifier les paramètres affectés dans ce modèle d’arthrose. Le logiciel est capable

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de générer une cinquantaine de paramètres, dont 2 ont été significativement modifiés dans notre modèle d’arthrose : Max Contact At (%), qui augmente avec l’âge et qui représente le temps, dans la phase de contact avec la plaque, au bout duquel la phase de freinage se transforme en phase de propulsion (figure 42A) ; et Max Intensity At (%), qui diminue avec l’âge et représente le temps, depuis le début de l’enregistrement, au bout duquel l’intensité maximum est mesurée (figure 42B). L’évolution de ces paramètres démontre que les pattes des souris âgées/arthrosiques restent plus longtemps en contact avec la plaque et avec plus d’intensité.

Figure 42 : Paramètres de la démarche de souris C57BL/6 de 6 et 18 mois évalués grâce au système CatWalk®. Deux paramètres sont statistiquement modifiés dans ce modèle : Max Contact At (%) (A) et Max Intensity At (%) (B). * = p<0.05 (ANOVA suivi d’un test post-hoc Student- Newman-Keuls)

2.3 Evaluation de l’effet anti-arthrosique du mélange in vivo

Etude radiologique : La figure 43A montre que les scores radiographiques d’arthrose ne sont pas statistiquement différents au début de l’étude (souris de 18 mois) entre les 2 groupes de souris. Cependant, après 4 mois de traitement, le score radiographie des articulations des souris non traitées augmente significativement, indiquant une dégradation de l’articulation, alors que le score chez les souris traitées n’augmente pas, suggérant un ralentissement de la progression de l’arthrose dû au traitement. En effet, on observe une diminution significative du score radiographie entre les souris de 22 mois traitées par rapport aux souris non traitées.

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Etude de la marche : Le système CatWalk® n’a pas révélé de différence significative entre les 2 groupes de souris au début de l’étude (souris de 18 mois) pour les 2 paramètres évalués (figure 43B et C). Néanmoins, bien que le paramètre Max Contact augmente chez les souris traitées et non traitées, cette augmentation est moins importante chez les souris traitées, et sa valeur est statistiquement différente de celle des souris non traitées (figure 43B). En revanche, le traitement n’a pas montré d’effet significatif sur le paramètre Max Intensity (figure 43C). Ces résultats nous montrent que cette technique peut révéler des différences de certains paramètres de la marche entre des souris de 6 mois, qui n’ont pas encore développé d’arthrose, et de 18 mois avec une arthrose modérée, mais qu’il est plus difficile de révéler des modifications subtiles de la marche, comme c’est le cas dans cette étude. Un traitement plus long aurait peut-être permis de détecter des différences significatives sur un plus grand nombre de paramètres.

Figure 43 : Effet du traitement sur le score radiologique d’arthrose des souris C57BL/6 vieillissantes (A), et sur les paramètres évalués par le CatWalk® : le Max Contact At (B) et la Max Intensity (C). Les histogrammes noirs représentent les souris au début de l’étude, et les hachurés à la fin de l’étude. * = p<0.05 (ANOVA suivi d’un test post-hoc Student-Newman-Keuls)