Résultats et discussion des études :

a Cholestérol plasmatique et poids corporel

Les niveaux de poids corporel, le cholestérol plasmatique total et de triglycérides de souris déficiente en apo E traités avec BM-573, ASA ou une combinaison des deux médicaments (tableau 19) n'étaient pas significativement différents des animaux de contrôle.

Tableau 19 :

semaines Vehicule BM-573 ASA ^BM-573/ ASA Triglycerides (mg/dL) 15 44.2 ± 4.5 57 ± 5.1 39.5 ± 6.2 53.2 ± 3.9 26 64.2 ± 10.5 63.7 ± 6.3 78.3 ± 10.5 72 ± 6.2 Cholesterol (mg/dL) 15 310.2 ± 23.3 287.2 ± 5.5 276 ± 15.3 239 ± 23.4 26 421 ± 35.2 428 ± 42.1 348.3 ± 17.8 394.7 ± 16.1 HDL cholesterol (mg/dL) 15 126.2 ± 4.7 116.7 ± 13.1 117.7 ± 11.8 115.2 ± 16.5 26 158 ± 19 160.7 ± 20.5 138.2 ± 8.1 136 ± 13.6 LDL cholesterol (mg/dL) 15 203.2 ± 13 194 ± 6.25 177.5 ± 9.7 160 ± 21.42 26 244 ± 27.3 208 ± 22.9 261 ± 18.4 233 ± 57.5 Le poids corporel (g) 15 23.2 ± 0.9 22.4 ± 1.1 23.1 ± 1.3 22.9 ± 1.2 26 27.5 ± 1.3 28 ± 1 28.4 ± 0.9 28.5 ± 1.2

b. Effet sur les lésions athéroscléreuses

BM-573 inhibe le développement de lésions athérosclèreuses aortiques.en comparaison avec les ASA Aucune différence significative dans le développement des lésions n’a été observée entre les souris témoins et le groupe traité par ASA comme le montre la figure35.. Dans le groupe BM-573 et dans le groupe traité avec les deux médicaments, une réduction significative dans les zones de lésions athéroscléreuses a été observée. La zone de lésion en moyenne par la méthode d'analyse face à des souris témoins était de 9,8 ± 0,3% à 15 semaines (Fig. 35B) et 13,2 ± 1,2% à 26 semaines (Fig. 37D). Le traitement de 9 ou 20 semaines avec BM-573 a montré une taille des lésions significativement réduite en moyenne de 1,1 ± 0,3% (Figure 37B) et 2,8 ± 0,8% (Fig. 37D) aux semaines 15 et 26 , respectivement. Le traitement avec de l'AAS pour la même période n'a aucun effet significatif sur la superficie des lésions. Le traitement avec la combinaison BM-573 et ASA a montré une taille sensiblement réduite en moyenne de la lésion de 0,76 ± 0,2% (15 semaines d'âge) et de 3,1 ± 0,3% (26 semaines d'âge). [204]

Figure 37 : comparaison des tailles de lésions athéroscléreuses avant et après BM 573 et /ou

C Les concentrations plasmatiques de sICAM-1, s-VCAM-1, MCP-1 et TXB2 :

Les concentrations plasmatiques de sICAM-1 et sVCAM-1, des souris déficientes en apo E traitées par BM 573 avaient des niveaux plasmatiques significativement plus bas de sICAM-1 (345,1 ± 23 ng / mL à 15 semaines et 412,2 ± 17,2 ng / mL à 26 semaines) par rapport aux souris témoins (600,12 ± 3,7 ng / mL à 15 semaines et 630,23 ± 52,46 ng / mL à 26 semaines) figures36A. Il n'y avait pas d'effet significatif de l'AAS sur les niveaux de sICAM-1 (647,5 ± 21,1 ng / mL et 671,5 ± 27,7 ng / mL à 15 et 26 semaines, respectivement). Une diminution significative de niveaux sICAM-1 a été constatée chez les souris recevant la thérapie combinée. Des résultats similaires ont été obtenus avec la quantification sVCAM-1 pour les souris déficientes en Apo E traitées BM-573- comme le montre la Figure 38B. Ces souris avaient des niveaux plasmatiques significativement plus bas de sVCAM1 (544 ± 5,6 ng / mL et 692 ± 14,3 ng / mL à 15 et 26 semaines, respectivement) comparativement aux souris témoins à 15 semaines (729,7 ± 22,7 ng / ml) et 26 semaines (873 ± 42,9 ng / mL). Il n'y avait pas d'effet significatif de l'AAS sur le niveau sVCAM-1 (734,25 ± 56,3 ng / mL et 857,5 ± 8,9 ng / mL à 15 et 26 semaines, respectivement). La thérapie combinée de ces souris a donné un niveau de sVCAM-1 moindre par rapport aux souris témoins seulement à 15

Figure 38 : Les concentrations plasmatiques de sICAM-1, s-VCAM-1, MCP-1

et TXB2 chez des souris déficientes en apo E traitées par BM 573

Les lésions athéroscléreuses de l'apo E-/ - à 15 et 26 semaines pour 9 ou 20 semaines de traitement avec les BM-573 ou la combinaison avec l'AAS a entraîné une diminution de VCAM-1 et ICAM-1 ; pendant que l'administration unique de l'ASA n'a eu aucun effet sur ces deux molécules d'adhésion. [204]

D. Expression de l’ adhérence de molécule d'ARNm dans HSVECs :

La stimulation des récepteurs TP avec U-46619 et 8-iso-PGF2 (agonistes de BM573) a augmenté les taux d'ARNm de l'ICAM-1 (3,5 et 2,6 fois, respectivement (figure 39B)) et VCAM-1 (3,6 et 3,2 fois, respectivement (Fig. 39D) ; alors qu’un prétraitement avec la BM-573 (1 pM) 2 h avant l'addition d'agonistes TP aboli complètement la régulation positive de l'ICAM-1 et VCAM-1 ARNm avec des valeurs semblables à celles des témoins. Aucun effet n'a été observé avec l'AAS.

BM-573, mais pas AAS, entraine une diminution significative des lésions athèrogénes comme on a démontré par l'analyse macroscopique. Les deux traitements ont inhibé la synthèse TXB2 seule mais seulement BM-573 et la thérapie combinée ont été en mesure de réduire d'une part, les concentrations plasmatiques intracellulaires des molécules d'adhésion-1 (sICAM-1) et molécule d'adhésion cellulaire vasculaire-1 (s-VCAM-1) et d'autre part, l'expression de ces protéines dans la racine aortique de l'Apo E. Ces résultats ont été confirmés dans les cultures de cellules endothéliales provenant de cellules endothéliales humaines de la veine saphène (HSVECs). Dans ces cellules, BM-573 ont également empêché l'augmentation de l'expression d'ARNm de l'ICAM-1 et VCAM-1 induite par l'U-46619 et 8-iso-PGF2. Ces résultats montrent que la combinaison d'une molécule antagoniste des récepteurs Tp et l'inhibition de la thromboxane synthase est plus efficace pour retarder l'athérosclérose chez les souris déficientes en Apo E-/ - souris que l'inhibition de la formation de TXA2 unique. [204]

Les effets des modulateurs des récepteurs TP ont également été étudiés sur l'expression des molécules d'adhésion par les cellules endothéliales provenant de veines saphènes humaines. En effet, la plupart des études antérieures ont utilisé des cellules endothéliales dérivées de la veine ombilicale (HUVEC) [205] and [206]. Néanmoins, ce choix peut être critiqué pour le fait que ces cellules sont dérivées de tissus de foetus et ont d'importantes différences fonctionnelles par rapport à l'endothélium vasculaire des adultes. D'autre part, les veines saphènes ont un plus grand intérêt clinique car elles sont couramment utilisées pour les traitements chirurgicaux pour assurer le pontage de l'artère. En outre, plusieurs

patients ont besoin d'une chirurgie de dérivation secondaire en raison du développement de l'athérosclérose des lésions dans le greffon. Dans cette étude, on a montré pour la première fois que les deux U-46619 et 8-iso-PGF2 alpha ont été en mesure d'augmenter ICAM-1 et VCAM niveaux d'ARNm-1 dans HSVECs avec une efficacité comparable. La dose de 1 uM de 8-iso-PGF2 alpha a été utilisée dans cette étude. Toutefois, les niveaux de base de 8-iso-PGF2 alpha ont été rapportés à être dans la gamme nanomolaire dans la circulation des personnes en bonne santé. Néanmoins, dans des conditions pathologiques, ces concentrations peuvent augmenter de 100 à 200 fois [207] and [208]. La concentration de 8-iso-PGF2 alpha utilisé dans cette étude est donc plus proche des niveaux pathologiques décrits précédemment.

En outre, on a pu observer une réduction marquée de l'expression de l'ARNm après un prétraitement avec BM-573, mais pas avec AAS. Ces données confirment l'extension aux cellules endothéliales de la veine saphène du paradigme actuel qui genére la TXA2 et isoprostane in situ qui pourraient agir sur les cellules endothéliales aortiques pour induire l’expression de ICAM-1 et VCAM-1, ce qui amplifie l'athérogenèse. Par conséquent, il est tentant de spéculer que les récepteurs TP pourraient être impliqués dans le développement de l'athérosclérose dans les veines saphènes utilisées afin de contourner la promotion de la dysfonction endothéliale dans le greffon.

Sur la base de ces résultats, nous concluons que l'antagonisme des récepteurs TP combiné à l'inhibition de la TXS par BM-573 est capable de retarder le développement de l'athérosclérose chez les souris déficientes en Apo E, par au moins la diminution de l'expression des protéines d'ICAM-1 et VCAM-1 dans la plaque et donc diminuer leur concentrations plasmatiques. Cette hypothèse est étayée par des études in vitro réalisées sur HSVECs. Par conséquent, un antagoniste mixte des TP / inhibiteur de TXAS tels que BM-573 pourrait être intéressant, non seulement comme un outil thérapeutique pour traiter ou prévenir l'athérosclérose dans les premiers stades de l'athérosclérose, mais aussi en prévention secondaire des complications thrombotiques aigues de l'athérosclérose, [209]. En outre, BM-573 est un antagoniste des récepteurs TP réversible, qui n'affecte pas la synthèse des prostaglandines (comme l'AAS) et n'a pas besoin de biotransformation avant de devenir actif (tels que les thiénopyridines). Par conséquent, il est théoriquement prévu que le profil d'innocuité de ce médicament serait très intéressant en comparaison avec des agents antiagrégants plaquettaires classiques, qui présentent bien connu des effets indésirables tels que les troubles gastro-intestinaux ou de saignements et dont la résistance a été décrite.

C. Nouvelle molécule S18886