Méthodes de prélèvements :

Les méthodes de prélèvements adoptées pour le prélèvement à la recherche de la contamination croisée et microbienne ,et de l’agent nettoyant ont été développées et adaptées à chaque type de surface et ont fait l’objet d’une validation .

a. Prélèvements microbiologiques :

i- Matériel de prélèvement :

- Gélose de contact stérile - Bêcher stérile de 1litre.

- Eau stérile pour humidifier l’écouvillon

- Se référer à l’habillage stricte de la production avec les manchettes, le masque et les gants.

ii- Techniques de prélèvement :

Nous avons utilisé trois types de prélèvements à la recherche de la contamination microbiologique selon l’accessibilité des pièces à l’écouvillon (figure 6).

Figure 16 : Ecouvillons stériles ^{Figure 17 : Chalumeau pour créer} l’environnement stérile de prélèvement

Figure18 : Méthodes de prélèvements microbiologiques :

- Le prélèvement par gélose de contact est préférable vu que la boite de gélose qui a servi pour le prélèvement serait incubée directement sans traitement de l’échantillon, c’est donc la première technique dont on vérifie la possibilité d’utilisation si la surface concernée est plane et permet un contact tangentiel total avec la gélose.

- Le prélèvement par rinçage est réalisé dans un bêcher stérile, par l’eau purifiée de la façon suivante :

Rincer le bêcher avec lequel le prélèvement serait effectué ; ces eaux de rinçage sont le blanc de prélèvement relatif à la contamination propre à l’eau purifiée. Rincer la pièce à l’eau purifiée, récupérer ces eaux de rinçage et les amener au

laboratoire de microbiologie pour analyse.

- Le prélèvement par écouvillonnage consiste à racler la tige de coton sur la surface à prélever de façon homogène.

b. Prélèvements à la recherche de traces de l’agent de nettoyage :

Les traces de l’agent de nettoyage seront analysées dans des eaux de rinçage avec une méthode colorimétrique. La méthode nécessite 10 ml d’eau de rinçage, ainsi nous avons procédé comme suit :

- Rincer toutes les parties de l’équipement

- Récupérer les eaux de rinçage dans un bêcher propre - Emmener au laboratoire de contrôle pour analyse.

c. Prélèvements du traceur :

En se référant aux plans de prélèvements des deux traceurs (tableaux 11 et 12) , le type de surfaces à prélever détermine la méthode de prélèvement employée pour ce but.

L’écouvillonnage et le rinçage sont réalisés avec le solvant capable de solubiliser le traceur, dans le cas de l’Indométacine comme pour le Kétoprofène le solvant de prélèvement est l’éthanol 96°.

c1. Prélèvement par écouvillonnage

i) Matériel nécessaire :

L’Ecouvillon est en polyester spécifiquement conçu pour la validation du nettoyage en utilisant des techniques d'analyse (HPLC et spectroscopie visible).

Figure 19 : Matériel de prélèvement des traceurs :

ii) Support de prélèvement plan en inox ou téflon :

- Sur la partie de l’équipement ou la pièce à prélever ,la surface de prélèvement est délimitée à l’œil nu, généralement 100cm2

.

- Passé l’écouvillon sur la surface délimitée de manière identique, la plus recommandée est la suivante:

Passer l’écouvillon en stries parallèles rapprochées, en faisant tourner légèrement l’écouvillon mouillé sur la surface délimitée ;

Répéter l’échantillonnage de la même zone par des stries perpendiculaires aux premières ;

 Remettre l’écouvillon dans le flacon et faire casser la partie inférieure de l’écouvillon qui restera dans le flacon.

 Bouchonner les flacons puis les ramener au laboratoire de contrôle pour analyses.

Figure 20 : Méthode d’écouvillonnage d’une surface plane

iii) Support de prélèvement cylindrique en inox ou en PE (Flexibles) :

Les surfaces à écouvillonner ne sont pas toujours planes, il y a des vannes, des sorties de trémie et d’autres pièces sous forme cylindrique et dont l’écouvillonnage sera réalisé d’une façon différente.

L’écouvillon est imbibé de 0.4ml du d’éthanol 96° , ainsi on le fait passer de la façon suivante :

- Racler la paroi du cylindre en allant dans le sens de l’aiguille d’une montre.

- Repasser l’autre face de l’écouvillon sur la paroi du cylindre dans le sens contraire. - Remettre l’écouvillon dans le flacon et faire casser la partie inférieure de l’écouvillon

qui restera dans le flacon.

Figure 21 : Méthode d’écouvillonnage d’une surface cylindrique

c-2. Prélèvement par rinçage :

Au cours de la validation de nettoyage des équipements pour formes pâteuses, le prélèvement sur les équipements n’est pas toujours possible avec la méthode d’écouvillonnage à cause de l’inaccessibilité de certains points de prélèvements à l’écouvillon d’où le prélèvement par rinçage.

Le rinçage est appelé rinçage supplémentaire, car ce n’est pas une étape de rinçage propre au cycle de nettoyage de l’équipement, il consiste à rincer la partie à prélever de l’équipement avec l’éthanol 96° dont les traceurs sont solubles.

La pulvérisation du solvant de rinçage sur la surface de la pièce concernée, le trempage de la pièce dans un volume connue du solvant de prélèvement, ce sont les deux techniques utilisées en tenant compte des paramètres suivants :

- Solvant de prélèvement : ETHANOL 96°

- Le volume de prélèvement a fait l’objet d’une validation, sachant qu’un petit volume du solvant est toujours préférable afin d’éviter la dilution des résidus du traceur .

- L’utilisation de la pulvérisation ou du trempage dépend de l’accessibilité et la configuration des pièces :

Quand c’est une pièce de petite taille, qui peut être trempée dans un petit volume d’éthanol dans un petit bêcher ; la méthode de prélèvement est le trempage ;le temps de contact a été validé .

Quand la pièce est non démontable, ou de grande taille qui doit être trempé dans un grand volume de solvant, nous avons préféré le rinçage par pulvérisation, cette méthode consiste à appliquer une force détachant les traces collées sur la pièce par la force de pulvérisation.

Tableau 37 : Prélèvements par rinçage supplémentaire

Points de prélèvements Méthode de rinçage

supplémentaire ^{Mode opératoire} - Cuve B  Emulseur + Sortie  Grille de filtration - Remplisseuse C  Doseur + chambre dosage - Pulvérisation du solvant de prélèvement

- Pulvériser un volume connu de l’éthanol sur la surface prédéterminée de la pièce. - Récupérer la solution de rinçage

dans un décalitre inox propre puis l’analyser.

- Remplisseuse K Injecteur

- Trempage de la pièce

- Tremper la pièce dans un bêcher rempli de 20 ml d’éthanol - Laisser en contact 5 min - Retirer la pièce et analyser la

 Le rinçage supplémentaire des pièces par l’éthanol 96° pour le prélèvement est suivi par une étape de nettoyage des pièces pour éliminer ses traces qui peuvent y rester.

Le nettoyage des pièces suit les étapes suivantes :

- Application de l’eau de ville et du détergent A 3% sur la pièce

- Rinçage de la pièce avec l’eau puis un dernier rinçage à l’eau purifiée.

Une validation de l’élimination des traces d’éthanol 96° a fait l’objet des essais décrits dans le paragraphe suivant.