22
l'activité ATS-D. Historiquement, les substances interférentes utilisées étaient des matières fécales ou de la mucine bovine. La mucine bovine a par exemple été utilisée à la concentration de 5 mg.mL-1 pour représenter le niveau protéique trouvé dans des sécrétions Humaines normales sans qu'il y ait de risque de contamination (Sattar S.A. et al., 1989). D'autres substances telles que du sang ou des concentrés d'érythrocytes, du sérum, du lait ou encore des extraits de levure ont été utilisées à cette fin.
Conditions environnementales et paramètres physico-chimiques
Les paramètres physico-chimiques tels que la température, le pH, la dureté de l'eau utilisée et la nature des électrolytes potentiellement présents jouent aussi un rôle considérable et doivent être maîtrisés pour obtenir des conditions reproductibles (Crémieux A., et al., 2001). Le contrôle de la qualité de l'eau est très important notamment pour la teneur en ions comme les ions calcium ou magnésium qui peuvent interagir avec les produits testés et influer sur leur activité. De plus, il semble important de tester différents lots de produits pour s'assurer de la reproductibilité des résultats.
Dans le cadre des tests sur support et considérant les grandes variations existant entre les virus quant à leur résistance au séchage, il est important connaître le taux de survie des virus testés après séchage pour permettre de définir au mieux les conditions environnantes (temps, température, humidité relative).
1.5 Le contexte normatif
1.5.1 Généralités
Le Comité Européen de Normalisation (CEN), et plus précisément le comité technique 216 "Antiseptiques et désinfectants chimiques" (CEN/TC 216), définit le contexte de l'évaluation de l'activité antiseptique et désinfectante des agents chimiques sur les différents micro-organismes et vise à unifier les méthodes pratiquées au sein des différents pays. Comme cela est prévu dans le cadre Européen, l'agence française de normalisation (AFNOR) retranscrit ces normes Européennes en normes Françaises.
La norme NF EN 14885 (AFNOR, 2006a) permet de définir le cadre général d'application de ces normes. Trois domaines d'application sont concernés : (i) le domaine de la médecine Humaine, qui nous intéresse tout particulièrement, (ii) le domaine vétérinaire et (iii) un troisième domaine comprenant les secteurs alimentaire, industriel, domestique et professionnel. Les secteurs relevant
1. L'antisepsie-désinfection : les agents et l'évaluation de leur activité antivirale 1.5 Le contexte normatif
23
du domaine de la médecine Humaine sont les hôpitaux et autres établissements médicaux dont les centres de soins dentaires, les infirmeries d'écoles, de crèches mais aussi le lieu de travail ou de domicile ainsi que des entreprises de services comme les blanchisseries ou les cuisines fournissant directement des produits pour le patient.
Les normes élaborées par ce comité spécifient les méthodes de laboratoire à utiliser pour tester l’activité des produits (désinfectants chimiques, antiseptiques) en vue d’appuyer les revendications leur prêtant des propriétés spécifiques, adaptées à leur application prévue, dans le domaine d'application choisi.
Elles ont pour objet : (i) de permettre aux fabricants de produits de choisir les normes à utiliser pour évaluer l'activité spécifique d'un agent chimique dans un domaine d'application particulier, (ii) de permettre aux utilisateurs du produit d’évaluer l’information fournie par le fabricant en fonction de l’usage prévu du produit et (iii) d’aider les organismes compétents à évaluer les revendications du fabricant.
Les essais sont classés en différentes catégories, i.e. essais de phase 1, 2 et 3 selon le niveau de preuve apporté (Tableau 1). Ainsi, pour pouvoir revendiquer qu'un produit a des propriétés ATS-D et qu'il peut être utilisé dans le domaine de la médecine Humaine, il faut le soumettre à des essais dépendants de normes spécifiques en fonction du type de produit, de son spectre d'activité (bactéricide, virucide, etc.) en vue d'une utilisation précise (Tableau 2). Il est également précisé qu'il n'est pas nécessaire de soumettre les produits devant être utilisés dans le domaine médical à des essais de phase 1 ; les normes spécifiques pour ces produits ne comportant que des essais de phase 2, étapes 1 et/ou 2.
1.5.2 Normes Européennes pour l'évaluation de l'activité virucide des ATS-D
Dans le cadre plus particulier de notre étude, pour revendiquer une activité virucide en médecine Humaine, il n'existe à ce jour qu'une seule norme Européenne, la norme NF EN 14476+A1 (AFNOR, 2007) alors qu'il en existe tout un panel pour évaluer l'activité antibactérienne. Il existe cependant deux autres normes pour tester les ATS-D antiviraux, une applicable au domaine vétérinaire, la norme NF EN 14675 (AFNOR, 2006b) et une applicable au domaine agro-alimentaire et industriel, la norme NF EN 13610 (AFNOR, 2003) mais faisant appel à des bactériophages, utilisés alors comme virus modèles.
1. L'antisepsie-désinfection : les agents et l'évaluation de leur activité antivirale 1.5 Le contexte normatif
24
Catégorie de l'essai Description et finalité Commentaire
Phase 1
Essais de suspension quantitatifs permettant d’établir qu’un produit a une activité bactéricide, fongicide ou sporicide, quelles que soient les conditions spécifiques d’usage prévu
Il n'existe pas à ce jour (et il n'en est pour l'instant pas prévu) d'essai de phase 1 permettant d'établir une activité virucide Phase 2
Phase 2, Etape 1
Essais de suspension quantitatifs permettant d’établir qu’un produit a une activité bactéricide, fongicide,
mycobactéricide, sporicide ou virucide simulant des conditions pratiques correspondant à l'usage prévu (temps de contact précis, présence de substances interférentes de type organiques…)
Phase 2, Etape 2
Autres essais de laboratoire quantitatifs simulant les conditions pratiques, par exemple des essais sur des surfaces, des instruments, des essais de lavage des mains et de friction des mains, en vue d'établir qu'un produit a une activité bactéricide, fongicide, mycobactéricide, sporicide ou virucide
Phase 3 Essais de terrain dans des conditions pratiques On ne dispose pas actuellement d'une
méthodologie validée pour ce type d'essai
Tableau 1 : Les différentes catégories d'essais permettant l'évaluation de l'activité d'un biocide
(AFNOR, 2006a)
Type et/ou destination du produit Phase, Etape Revendication d'activité Bactéricide Fongicide / Levuricide Mycobactéricide /
Tuberculocide Virucide Sporicide
Lavage hygiénique des mains
2,1 prEN12054 +++ +++ EN 14476 +++
2,2 EN 1499 +++ +++ +++ +++
Traitement hygiénique des mains par friction
2,1 prEN 12054 +++ +++ EN 14476 +++
2,2 EN1500 +++ +++ +++ +++
Désinfectants chirurgicaux pour les mains (lavage et friction)
2,1 prEN12054 +++ +++ +++ +++
2,2 EN 12791 +++ +++ +++ +++
Désinfection des surfaces 2,1 ++ ++ EN 14348 EN 14476 ++
2,2* ++ ++ ++ ++ ++ Désinfection des instruments 2,1 EN 13727 EN 13624 EN 14348 EN 14476 + 2,2* EN 14561 EN 14562 EN 14563 + + Traitement de l'eau 2,1 +++ +++ +++ +++ +++
Tableau 2 : Méthodes d'essais normalisées pour les revendications des produits à visée désinfectante dans le domaine de la médecine Humaine
(AFNOR, 2006a)
+ Sujet d'étude approuvé, ++ Aucun sujet d'étude actuellement approuvé mais des normes seront peut-être élaborées à cet effet, +++ il n'est pas prévu de développer un essai
1. L'antisepsie-désinfection : les agents et l'évaluation de leur activité antivirale 1.5 Le contexte normatif
25
La norme NF EN 14476+A1 décrit une méthode d’essai de phase 2, étape 1, pour l’évaluation de l’activité virucide des ATS-D chimiques utilisés en médecine Humaine, en fonction de l'utilisation potentielle du produit, i.e. la désinfection de surfaces et d'instruments, le lavage hygiénique ou chirurgical des mains ou encore la désinfection thermochimique.
Elle précise selon chaque utilisation potentielle les souches virales à tester, les températures, les temps de contact ou encore la nature des substances interférentes (Tableau 3). La méthode décrite a pour objet de déterminer l'activité de formulations commerciales ou de substances actives dans leurs conditions d'emploi. Cette norme fixe ainsi la méthodologie, les seuils pour les contrôles et pour la validation de la méthode.
Conditions d'essai Désinfectants de surfaces et d'instruments
Lavage et imprégnation hygiéniques des mains
Mode opératoire de désinfection chimiothermique
Virus d'essai Poliovirus et Adénovirus Poliovirus et Adénovirus Parvovirus
Température d'essai 20°C ± 1°C (sauf pour
désinfection chimiothermique)
20°C ± 1°C (sauf pour désinfection chimiothermique)
Conformément à la recommandation du fabricant,
mais n'excédant pas 60°C
Temps de contact
a) Obligatoire
b) Supplémentaire
60 min
5 min, 15 min, 30 min
1 min ou 30 s, si le fabricant recommande < 1 min
3 min
Conformément au temps de contact recommandé par le fabricant, mais n'excédant pas
60 min _ Substances interférentes a) Propreté et/ou b) Saleté 0,3 g.L-1 de BSA¤ et/ou 3,0 g.L-1 de BSA¤ + 3 mL d'érythrocytes PBS* _ 0,3 g.L-1 de BSA¤ et/ou 3,0 g.L-1 de BSA¤ + 3 mL d'érythrocytes
Tableau 3 : Conditions d'essai requises par la norme NF EN 14476+A1
(AFNOR, 2007)
* PBS : "Phosphate Buffered Saline" ou solution tamponnée au phosphate ¤ BSA : "Bovine serum albumin" ou albumine sérique bovine
Selon la norme Européenne NF EN 14476+A1, un produit est considéré comme ayant une activité ATS-D antivirale s'il induit une diminution de 4 log10 dans le titre viral après le temps de contact défini au début du test.
D'autres normes concernant l'étude de l'activité virucide sont actuellement à l'étude : (i) test concernant la désinfection des instruments utilisés en médecine Humaine (phase 2/étape 2), (ii) test
1. L'antisepsie-désinfection : les agents et l'évaluation de leur activité antivirale 1.5 Le contexte normatif
26
à visée vétérinaire pour évaluer l'activité virucide sur des surfaces non poreuses (phase 2/ étape 2) et une révision de la norme NF EN 14476+A1 prévue pour Avril 2013 (AFNOR, 2010).
1.5.3 Normes Américaines pour l'évaluation de l'activité virucide des ATS-D
De la même façon, l'organisme de normalisation Américain, l'ASTM ("American Society for Testing and Materials"), et plus précisément le comité E35, sous-comité E35.15, a élaboré pas moins de 45 normes pour évaluer l'activité ATS-D des agents chimiques, tous microorganismes confondus. Nous retrouvons parmi ces normes, les normes de base comme les tests en suspension mais également des normes proposant un cadre pour des évaluations pratiques comme différents tests sur support, des tests pour évaluer l'activité ATS-D des produits pour le lavage des mains, des produits nettoyants pour les toilettes ou encore des normes permettant l'évaluation de la formation de biofilms (liste non exhaustive). Concernant l'activité ATS antivirale, ce comité a établi six normes dont la liste est précisée dans le Tableau 4.
Code de la norme ASTM Intitulé de la norme Références
E1052-96 (révisée en 2002)
Méthode de test standard en suspension pour l'évaluation de l'efficacité des agents antimicrobiens contre les virus.
(ASTM, 2002b)
E1053-97 (révisée en 2002)
Méthode de test standard pour l'évaluation de l'efficacité des agents antimicrobiens destinée à la désinfection des surfaces environnementales inanimées.
(ASTM, 1997)
E1482-04 Méthode standard de neutralisation des agents virucides dans le cadre de l'évaluation de l'efficacité antivirale.
(ASTM, 2004)
E1838-02
Méthode de test standard pour la détermination de l'efficacité de l'élimination des virus par des agents de lavage et/ou de friction des mains faisant appel à la pulpe des doigts de volontaires adultes.
(ASTM, 2002b)
E2011-09
Méthode de test standard pour l'évaluation de l'activité antivirale de formulations destinées au lavage hygiénique et/ou à la friction des mains utilisant les mains entières.
(ASTM, 2009)
E2197-02
Méthode de test standard quantitative sur disque pour déterminer les activités bactéricide, virucide, fongicide, mycobactéricide et sporicide des agents chimiques liquides à visée germicide.
(ASTM, 2002a)
Tableau 4 : Liste des normes ASTM pour l'évaluation de l'activité ATS antivirale
Ces normes, comme les normes Européennes, posent les schémas de base des différents tests en indiquant notamment les souches virales recommandées ou encore la nature des matières organiques à ajouter pour mimer les conditions dites "sales". Cependant, bien qu'elles soient plus
1. L'antisepsie-désinfection : les agents et l'évaluation de leur activité antivirale