Anticorps anti-ADN

Les d'anticorps anti-ADN peuvent être dirigés contre des complexes simples brins (anti-ADNsb), double brin (anti-ADNdb), ADN-A, ADN-B, ADN-Z, ADN-ARN, etc. Dans le LED, les anticorps anti-ADNdb hélicoïdal B (ADN-B), qui est initialement non immunogène. On trouve à la fois des anti-ADNsb et des anti-ADNdb chez une proportion significative de patients. Les anti-ADNdb sont les plus importants en raison de leur spécificité et de leur rôle pathogène possible. On pense que les anti-ADNdb forment des complexes avec des fragments de nucléosomes, qui proviennent de processus de destruction cellulaire. Comme décrit dans la pathogenèse, la disponibilité du matériel nucléosomique peut induire la formation d'anti-ADNdb [111]-[117].

Les anti-ADN sont essentiels dans le diagnostique et la surveillance du LED. Ils sont présents chez 70% (60-83%) des patients. Sa spécificité atteint 95% -97% [113].

Si un test AAN est négatif, un test anti-ADN n'est généralement pas indiqué, sauf si la suspicion clinique est élevée. Les anti-ADNdb sont particulièrement utiles pour confirmer le diagnostique chez les patients dont les présentations suggèrent une probabilité de pré-test raisonnable [113].

Il existe un sous-groupe de patients atteints de LED avec des niveaux élevés d'anti-ADNdb, mais sans activité clinique significative, c'est-à-dire sérologiquement actifs mais asymptotique [111].

Les techniques de détermination de ces anticorps ont une sensibilité et une spécificité variées. Il existe trois tests principaux. Ces tests sont réalisés par ordre de spécificité croissante : test ELISA, immunofluorescence indirecte sur Crithidia luciliae et enfin test de Farr. Chaque laboratoire définit une valeur de

-Le test ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) est un test

immuno- enzymatique présentant une très forte sensibilité associée à une faible spécificité rendant ce test uniquement utilisable devant un contexte clinique évocateur de LED. Il possède aussi l’avantage d’avoir un faible coût de revient. Le principe de ce test est d’utiliser une microplaque contenant des puits recouverts d’ADN bicaténaire. On dépose alors le sérum du patient dans ces puits et on laisse incuber. Puis dans une seconde étape, on effectue un lavage des puits avant d’y ajouter des anticorps anti-immunoglobulines humaines marqués par une enzyme. Enfin dans une dernière étape, après avoir effectué un nouveau lavage des puits, on ajoute un substrat incolore de l’enzyme qui génèrera un produit coloré. La lecture s’effectuera via un spectrophotomètre avec une proportionnalité entre l’intensité lumineuse lue et la quantité d’anticorps présente (Figure 19).

Figure 18: Principe du test immuno-enzymatique ELISA [120].

-Le test d’immunofluorescence indirecte sur Crithidia luciliae : Ce test

présente une bonne spécificité ainsi qu’un coût très faible. Le principe est le même que le test utilisé pour la recherche des AAN. On utilisera comme substrat initial un protozoaire flagellé : Crithidia luciliae. Ce parasite a la particularité de posséder un kinétoplaste riche en ADN bicaténaire qui peut être comparé à une mitochondrie. Les anticorps anti-ADN natif viendront alors se fixer sur cet ADN bicaténaire. Cette technique permet un dosage semi-quantitatif des anticorps. Cependant il a des inconvénients comme : la présence de faux positifs liés à la présence d’anticorps anti-histones, la spécificité inférieure à celle du test de

-Le test de Farr ou test radio-immunologique : Constitue le test de

référence à l’heure actuelle pour sa forte spécificité. Cette technique va utiliser de l’ADN double brin marqué par un radio-isotope. Dans une première étape le sérum du patient sera mis à incuber avec cet ADN double brin marqué. Si le sérum contient des anticorps anti-ADN natif il se formera alors des complexes immuns. La seconde étape consiste à ajouter un réactif capable de précipiter les CI qui sont alors récupérés après centrifugation, cette étape servant à éliminer le surnageant contenant de l’ADN double brin marqué, non lié à un anticorps. La dernière étape consiste à effectuer la lecture par mesure de la radioactivité du précipité, laquelle présente une proportionnalité entre la mesure observée et le taux d’anticorps anti- ADN natif. Il est à noter que bien que cette méthode soit la méthode de référence, ce test présente des inconvénients liés à l’emploi des radioéléments et reste donc réservé à certains laboratoires spécialisés (Figure 20).

La positivité pour l'anti-ADN est un critère de classification dans plusieurs systèmes (ACR, SLICC), sans qu'il soit nécessaire de clarifier sa spécificité. Cependant, ce ne sont pas des molécules homogènes, car leur origine et leur structure peuvent être variées. Malgré sa valeur pratique, la quantification globale et son utilisation comme critère sont quelque peu simplistes. Différents isotypes (IgG, IgM, IgA) et différents degrés d'affinité sont détectés. L'isotype IgG et les anticorps de haute affinité sont les plus spécifiques dans le LED, en plus de leur éventuelle pertinence pathogène, tandis que les IgM et de faible affinité sont moins importants. Ils peuvent être négatifs au début de la maladie, après le traitement ou pendant les rémissions. Son élévation peut être associée à des phases de poussées et à l'aggravation de manifestations telles que la néphropathie [108]-[110].

Des titres élevés en permanence sans activité clinique sont détectés chez certains patients, mais les élévations sont plus fréquemment associées à un risque accru de poussées [114].

On pense que les anti-ADN ont un rôle pathogène. Sa pathogénicité dépend de facteurs tels que l'isotype, la capacité de fixation du complément, etc. Ses principaux mécanismes pathogènes sont: la formation de complexes immuns anti-ADN/ADN qui se déposent dans les tissus et induisent l'activation du complément, la fixation directe aux fragments de chromatine exposés dans la membrane basale glomérulaire, la cytotoxicité directe (par réactivité croisée avec d'autres récepteurs, comme le N-méthyl-D-aspartate ‘’NMDA’’), etc... [117]