410 BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA VOL. 16 (1955)
E F F E T S D ' U N I N H I B I T E U R D E LA C A T A L A S E S U R LA F O R M A T I O N I N D U I T E D E C E T E N Z Y M E C H E Z L A L E V U R E
pax H . C H A N T R E N N E
Laboratoire de Chimie biologique de la Faculté des Sciences, Université libre de Bruxelles [Belgique) 0 .
INTRODUCTION
Dans une étude remarquable de l'induction de la jS-géilactosidase chez E. coli, MONOD, COHEN-BAZIRE ET COHN^ ont montré, entre autres choses, que le phényl-j8-thiogalactoside, inhibiteur compétitif de l'enzyme inhibe quelque peu sa formation induite, mais que cette inhibition n'est pas compétitive et qu'elle n'est donc pas liée à son action sur l'enzyme.
Les résultats que nous rapportons ci-dessous et qui concernent la formation induite de catalase chez la levure montrent qu'un inhibiteur de l'enzyme peut favoriser sa formation, bien qu'il soit dépourvu de toute propriété inductrice.
Les inhibiteurs les plus caractéristiques de la catalase sont sans doute l'hydroxyl- amine et l'azoture. Il est vrai que ces substances affectent plusieurs autres systèmes;
mais la catalase est tellement plus sensible à ces toxiques qu'il doit être possible de l'inhiber presque complètement en n'affectant que peu l'activité des autres enzymes.
Le présent travail a d'ailleurs porté sur le mutant "petites colonies" d'EPHRUSSi^
qui forme la catalase^, le cytochrome c*'^ et la cytochromeperoxydase* sous l'action de l'oxygène, mais qui est incapable de constituer un système respiratoire complet*-^. E n choisissant ce mutant, nous évitons donc la formation simultanée de plusieurs enzymes sensibles à l'azoture, ainsi que l'apparition d'un nouveau système fournisseur d'énergie.
L'interprétation des résultats s'en trouve simplifiée.
MATéRIEL ET MéTHODES
Levure: M u t a n t " p e t i t e s colonies"^ isolé d'une souche diploïde de Saccharomyces cerevisiae (Yeast F o a m ) à la suite d'un traitement à l'acriflavine*.
Culture, aération et préparation des extraits: cf. publication antérieure'.
Dosage de la catalase dans les extraits: Selon VON EULER ET JOSEPHSON'.
Mesure de l'activité catalasique des suspensions de levure
L a titration de l'eau o x y g é n é e par le permanganate est rendue très peu précise par la présence de substances réductrices d a n s les suspensions de levure. Elle est remplacée a v a n t a g e u s e m e n t par u n dosage colorimétrique basé sur la réaction classique de l'eau o x y g é n é e avec les sels de t i t a n e . Réactif au t i t a n e : Solution saturée de sulfate de titane d a n s l'acide sulfurique 2 JV, diluée a u 1/5 a v e c u n e solution d'acide sulfurique 2 N.
Mode opératoire : 10 ml d'une suspension de levure (3 à 5 m g poids sec par ml) sont a d d i t i o n n é s de 0.4 ml d'une solution 0.15 M d'eau o x y g é n é e . Après des durées d'incubation bien d é t e r m i n é e s
* Ce m u t a n t n o u s a été d o n n é très aimablemejî^^kfJsiSr^^ S^ R U S S i . N o u s l'en remercions v i v e m e n t .
Bibliographie p. 4iy. ''^'"ÎH
(o, I, 2, 4 e t 6 m i n u t e s ) à 28°, d e s prises de i m l s o n t m é l a n g é e s à 2 m l de réactif a u t i t a n e c o n t e n s u d a n s de p e t i t s t u b e s à c e n t r i f u g e r . U n e coloration j a u n e se d é v e l o p p e i m m é d i a t e m e n t . A p r è s cen- t r i f u g a t i o n , l'intensité de c e t t e c o l o r a t i o n e s t m e s u r é e à l'aide d ' u n colorimètre. L ' e x t i n c t i o n à 4 1 0 m/n e s t proportionnelle, d a n s d e larges limites, à la c o n c e n t r a t i o n de l'eau o x y g é n é e .
U n e m é t h o d e p r e s q u e i d e n t i q u e à d'ailleurs é t é décrite par PATTI ET BONET-MAURY'.
Détermination de la radioactivité des protéines
5 m l de la s u s p e n s i o n de l e v u r e qui a é t é i n c u b é e a v e c le g l y c o c o l l e radioactif s o n t m é l a n g é s à u n v o l u m e égal d ' u n e s o l u t i o n d'acide trichloracétique à 20 % c o n t e n a n t i m g de glycocolle non- radioactif par ml. A p r è s c e n t r i f u g a t i o n , le précipité e s t l a v é trois fois a v e c u n e s o l u t i o n à 5 % d'acide trichloracétique c o n t e n a n t é g a l e m e n t d u g l y c o c o l l e non-radioactif. L e c u l o t e s t alors traité à 100°
p e n d a n t 30 m i n u t e s par 5 m l d ' u n e s o l u t i o n n o r m a l e d'acide perchlorique ; c e t t e o p é r a t i o n est d e s t i n é e à extraire les bases p u r i q u e s d e s a c i d e s nucléiques. L e précipité e s t e n s u i t e l a v é à l'acide perchlorique froid, puis à l'alcool, e t transféré q u a n t i t a t i v e m e n t sur u n p e t i t carré de p a p i e r filtre, l a v é encore à l'alcool puis à l ' a c é t o n e e t séché. L a r a d i o a c t i v i t é de ce précipité e s t d é t e r m i n é e à l'aide d ' u n c o m p t e u r de Geiger à f e n ê t r e m i n c e . T o u t e s les prises d'une m ê m e e x p é r i e n c e c o n t e n a n t la m ê m e q u a n t i t é de protéines, a u c u n e c o r r e c t i o n n'a d û être faite pour l ' a b s o r p t i o n p r o p r e .
PETERSON ET GREENBERG' r e c o m m a n d e n t de laver les précipités de p r o t é i n e s a v e c une s o l u t i o n de t h i o g l y c o l a t e p o u r é l i m i n e r c e r t a i n s dérivés c o n t e n a n t du g l y c o c o l l e radioactif e t qui s o n t liés d e f a ç o n labile a u précipité de protéines. D e s essais e f f e c t u é s d a n s ce laboratoire o n t m o n t r é que p o u r la levure e t d a n s les c o n d i t i o n s o ù n o u s opérons, le t h i o g l y c o l a t e n e d é t a c h e a u c u n e s u b s t a n c e r a d i o a c t i v e e n q u a n t i t é n o t a b l e d e s précipités de protéines. L e t r a i t e m e n t au t h i o g l y c o l a t e a d o n c é t é omis.
RESULTATS^EXPERIMENTAUX
Action de l'azoture et de Vhydroxylamine sur Vactivité de la catalase in vivo
La catalase, telle qu'elle se présente dans un extrait de levure à p H 7 en tampon de phosphate 0.02 M voit son activité réduite de moitié par l'hydroxylamine 2 . 8 - i o ~ ' M ou par l'azoture i . i - i o - * M . Mais il ne s'ensuit pas qu'aux mêmes concentrations ces agents inhibent au même degré la catalase contenue dans les cellules intactes. Il est donc essentiel de déterminer le degré d'inhibition de la catalase in vivo en fonction de la concentration d'inhibiteur dans les conditions habituelles d'induction de l'enzyme.
Dans ce but, de la levure préalablement enrichie en catalase par une aération de 5 heures a été remise en suspension dans du milieu frais, et l'activité catalasique de cette suspension a été déterminée à 28°, en présence de diverses concentrations d'hy- droxylamine et d'azoture. Les résultats de cette expérience, qui sont rassemblés dans la Figure i , indiquent que l'activité catalasique de la levure intacte est inhibée par l'azoture au même degré que la catalase des extraits. Il n'en va pas de même pour l'hydroxylamine: alors qu'une concentra- tion de 2 . 8 - 1 0 - ' M suffit à inhiber à 50%
la catalase des extraits, il faut une con- centration au moins 2000 fois plus élevée pour obtenir le même effet sur la catalase des cellules intactes (Fig. 2). Ceci nous permet de conclure que l'activité cata- lasique des suspensions de levure n'est pas due à de la catalase extracellulaire, car
^ log[NaN,]
F i g . I. A c t i o n de d i v e r s e s c o n c e n t r a t i o n s d'azo- t u r e sur: O : l ' a c t i v i t é c a t a l a s i q u e d ' u n e x t r a i t d e levure. l ' a c t i v i t é c a t a l a s i q u e d ' u n e sus- p e n s i o n de l e v u r e i n t a c t e . -\- : la v i t e s s e d'in- c o r p o r a t i o n d u g l y c o c o l l e - i - " C d a n s les p r o t é i n e s
de la levure.
Bibliographie p. 4iy.
412 H. CHANTRENNE VOL. 16 (1955) celle-ci serait accessible à l'hydroxylamine aussi bien qu'à l'azoture; la catalase dont nous mesurons l'activité sur les suspensions est donc contenue dans les cellules et le degré d'inhibition de cette activité par
l'azoture est bien celui de la catalase intra- cellulaire in vivo.
Réversibilité de Vinhibition par l'azoture L'inhibition de la catalase par l'azoture varie avec la concentration du toxique conformément à une loi de saturation réversible typique (Fig. i). L'expérience suivante a pour but de détenniner si on peut retrouver intégralement l'enzyme dans un extrait de levure après que la catalase ait été inhibée totalement in vivo
par l'azoture. 4 -3 logfNHiOH]
Fig. 2. Action de diverses concentrations d ' h y - droxylamine sur l'activité catalasique de O : u n extrait de levure. / \ : une suspension de levure
intacte.
Expérience: U n e suspension de levure pré- alablement aérée p e n d a n t 5 heures a été partagée en deux parties égales; à l'une d'elles, de l'azoture de sodium a été ajouté jusqu'à une concentration de 5-io~^ M. Après 20 minutes, la levure des
deux suspensions a été partagée en plusieurs portions, centrifugée et lavée 3 fois a v e c de l'eau d i s - tillée. Des extraits ont été préparés à partir de chacune de ces portions e t leur activité catalasique déterminée.
L'activité des extraits obtenus à partir des échantillons de levure traitée à l'azoture a été exprimée en % de l'activité moyenne des extraits de la leviure témoin. Les résultats furent les suivants :
l e expérience: 3 lavages 83, 85, 84%
2e expérience: 4 lavages 95, 97, 92%
On retrouve dans ces conditions de 85 à 95 % de la catalase réellement présente dans les extraits. Il est donc possible de déterminer d'une façon satisfaisante la quantité de catalase présente dans des cellules préalablement intoxiquées par l'azoture. Les résultats de tels dosages, qui sont rapportés dans les expériences qui suivent, n'ont pas été corrigés poiur cette faible perte d'activité; ils sont sans doute entachés d'une erreur systématique de 5 à 15% par défaut.
Action de V azoture de sodium sur la formation induite de catalase
De la levure cultivée en anaérobiose a été aérée pendant 5 heures en présence de diverses concentrations d'azoture, et la catalase a été dosée dans les extraits.
Expérience : L a levure cultivée à l'abri de l'air pendant 24 heures a été remise en suspension (4 m g poids sec par ml) dans un milieu contenant 40 g de glucose, 4 5 0 m g K H j P O j et 20 m g d e M g S O ^ - y H j O par litre. D e s portions de 30 ml de cette suspension ont été introduites dans s e p t boites de R o u x . A chacune d'elles a été ajouté ce qu'il fallait d'azoture de sodium pour obtenir d e s concentrations finales de o, 10-*, i o ~ ' , 10-', io~*, io~* et 1 0 - ' M respectivement. Les suspensions o n t été agitées p e n d a n t 5 heures à 28°, e t la teneur eu catalase des extraits préparés à partir d e s différents échantillons a été déterminée.
Bibliographie p. 41 y.
Les résultats de cette exérience sont rassemblés dans la Table I :
T A B L E I
i 7 ^ . _ „ . . „ „ Coficentration initiale . . . . e Echantillon derazoture Aa,mté Kat.F.
N o n a é r é o 0 . 6 A é r é 5 h o 6 . 4 A é r é 5 h l o - ^ A f 6 . 1 A é r é 5 h 1 0 - ' M 6 . 0 A é r é 5 h i o - « M 5 . 6 A é r é 5 h 10-^ M 6 . 7 A é r é 5 h lO"* M 7 . 6 A é r é 5 h l o - ^ M 0 . 6
L'azoture, à diverses concentrations qui inhibent la catalase in vivo de 0 à 99% {cf.
Fig. i) n'a nullement empêché la formation induite de l'enzjmie. Il faut atteindre une concentration de I0~^ M pour supprimer la formation de l'enzyme ; or à cette con- centration l'azoture empêche toute synthèse d'enzymes^^, et il arrête complètement l'incorporation d'acides aminés dans les protéines de la levure ainsi que le montre l'expérience suivante:
Action de diverses concentrations d'azoture sur l'incorporation de glycocolle radioactif dans les protéines de la levure
Des travaux de ce laboratoire, qui seront publiés prochainement, montrent que le glycocolle radioactif s'incorpore rapidement dans les protéines de la levure en milieu glucosé. Dans des conditions bien choisies, la quantité de glycocolle-"C incorporé dans les protéines est proportionnelle au temps d'incubation pendant les 20 premières minutes au moins.
L'influence de diverses concentrations d'azotuxe sur l'incorporation du glycocolle a été déterminée de la façon suivante : 10 ml de la suspension de levure étaient additionnés de 0.1 ml d'vme solution de glycocolle-i-^*C contenant 10 ^moles de glycocolle par ml et donnant environ 40,000 coups par ml. Après 10 minutes d'incubation à 28°, la réaction était bloquée par addition de 10 ml d'une solution à 20% d'acide trichloracétique et la radioactivité des protéines contenues dans l'échantillon était déterminée selon la technique indiquée plus haut.
Les résultats ont été réunis dans la Table II et la Fig. i .
T A B L E I I Concentration
de l'azoture Coups minute Radioactivité en % du témoin
0 2 1 5 ( 1 0 0 )
1 0 - 6 M 2 1 1 9 8
1 0 - 5 M 1 7 7 8 4
2 • 1 0 - 5 M 1 3 6 6 4
5-10-^ M 4 6 2 2
io'*M 19 9
L'azoture inhibe donc fortement l'incorporation des acides aminés dans les protéines de
Bibliographie p. 4iy.
414 H. CHANTRENNE VOL. 16 (1955 la levure; cet effet résulte sans doute de l'action de l'azoture sur le système des phos- phorylations"^^ ; il a d'ailleurs été signalé pour le foie^*»^* et pour E. colï^^.
Les chiffres de la Table II montrent aussi que la vitesse d'incorporation dépend fortement de la concentration en azoture, surtout entre io~^ et I0~* M. Nous en avons tiré parti pour estimer la concentration de l'azoture dans la suspension de levure a u cours d'expériences de longue durée pendant lesquelles on peut craindre que la con- centration d'inhibiteur ne change. Ainsi en déterminant le degré d'inhibition de l'in- corporation du glycocolle au cours de l'expérience dont les résultats sont consignés dans la Table I, nous avons p u constater qu'après 5 heures d'aération la concentration d'azoture était passée d e i 0" * M à z.ïo~^ M. Il importe donc de contrôler la concentration de l'azoture tout au long de l'expérience et de compenser par de nouvelles additions d'inhibiteur les pertes d'azoture dues sans doute à la volatilité de l'acide azothydrique et à son oxydation.
Dans l'expérience suivante, la catalase a été dosée sur les suspensions de levure et dans les extraits, et la vitesse d'incorporation de glycocolle radioactif dans les protéines a été déterminée à divers moments au cours de l'aération. La concentration en azoture a été maintenue par des additions fréquentes de petites quantités d'inhibiteur.
Etude de la formation de catalase en fonction du temps, en présence d'azoture
De la levure cultivée à l'abri de l'air a été aérée pendant 3 heures soit en l'absence d'azoture, soit en présence d'azoture dont la concentration était maintenue entre 2.io~*
et 5.I0~^ M, concentrations qui inhibent la catalase à 97-98%. Après o, i h, 2 h et 3 h d'aération, trois échantillons ont été prélevés de chacune des suspensions; l'un a servi à la détermination directe de l'activité catalasique des suspensions telles quelles, le second à la détermination de la vitesse d'incorporation de glycocolle radioactif dans les
protéines, et le troisième à la préparation d'extraits pour le dosage de la catalase
réellement présente dans les celluJes. Les résultats de cette expérience sont consignés d a n s la Table I I I et la Fig. 2.
T A B L E I I I Activité catalasique
de la suspension Catalase
dans l'extrait Vitesse d'incorporation Levure aérée
sans azoture
0 O . I I 0-54 100
I h 0.20 I . I O 100
2 h 0.31 1.9 100
3 h 0.36 2.1 100
Levure aérée en présence d'azoture
o h O . O I 3 9
I h O . O I 0.44 4 9
2 h 0.02 I . I 3 7
3 h O . O I 1.6 21
Pendant toute la durée de l'expérience, la catalase était donc inhibée presque com- plètement par l'azoture et la vitesse d'incorporation des acides aminés dans les protéines était considérablement réduite. L a Fig. 3 indique que la synthèse de l'enzyme a été
Bibliographie p. 4iy.
retardée au début, mais qu'elle s'est ensuite déroulée à une vitesse comparable d u témoin.
Dans l'expérience suivante, la concen- tration en azoture était un peu plus faible (2.io~*M) et la synthèse a été étudiée pendant 7 heures. L'activité de la catalase était inhibée à 95% environ et l'incorpo- ration d u glycocolie à 35%. Les résultats de cette expérience sont rassemblés dans la Table IV et la Fig. 4.
T A B L E IV
à celle
Activité catcdasique Catalase de la suspension dans l'extrait Levure aérée
sans azoture o h o . i i I h 0.19 3 h 0.38 5 1 0.48 7 h - Levure aérée e n présence d'azoture
0 h o . o i 1 h 0.01 3 h 0 03 5 h 0.04 7 h 0.04
0.66 1 - 9 3-5 4.8 5-2
0.85 3-4 5-9 8.0
Ces résultats, semblables à ceux de l'expérience précédente, sont encore plus frappants : en présence d'azoture qui inhibe l'activité catalasique de 95% environ, la synthèse de cet enzyme, après avoir été quelque peu retardée, se produit plus rapi- dement que dans le témoin; les cellules dans lesquelles la catalase était inhibée ont produit plus de catalase que les témoins.
Figs.
Fig. 4
3 et 4. Action de l'azoture sur la formation induite de la catalase e t sur l'activité de l'enzyme, a. Activité catalasique des suspensions de levure intacte; b. Activité catalasique des extraits des m ê m e s cellules. O : Levure aérée en l'absence d'azoture. / \ : Levure aérée en présence d'azoture.
DISCUSSION ET CONCLUSIONS
Les courbes d'inhibition par l'azoture de l'activité catalasique des suspensions et de la catalase des extraits se superposent parfaitement; ceci permet de penser que c'est le même enzyme que nous dosons dans les deux cas, et que l'azoture atteint librement la catalase des cellules intactes. La faible sensibilité de l'activité catalasique des suspen- sions à l'hydroxylamine s'explique dès lors le plus simplement en supposant que renz5mie est difficilement accessible à l'hydroxylamine. L'activité mesurée sur les suspensions n'est donc pas due à un enzyme extérieur aux cellules ; elle doit correspondre à l'activité de la catalase contenue à l'intérieur des cellules ; on peut d'ailleurs constater qu'au cours
Bibliographie p. 4iy.
4 i 6 H. CHANTRENNE VOL. 16 (1955) de la formation induite de l'enzyme, l'activité de la suspension augmente parallèlement à celle des extraits. Nous avons montré d'autre part qu'après élimination de l'azoture on retrouve dans les extraits de 85 à 95% de la catalase réellement présente. Cela nous a permis de déterminer, d'une part l'activité de la catalase in vivo, et d'autre p a r t la quantité d'enzyme présent.
Nos expériences montrent que l'azoture 2.io~^ M inhibe de 95% Vactivité de la catalase dans la cellule de levure sans inhiber la formation de cet enzyme.
Le fonctionnement de l'enzyme n'est donc pas une condition de sa formation. Cette con- clusion rejoint celle à laquelle MONOD et ses collaborateurs'- sont parvenus dans le cas de la (3-galactosidase d'E. coli.
Tout permet de penser que la formation induite de catalase repose sur la synthèse d'une protéine nouvelle'. Aussi peut-il sembler paradoxal qu'elle ne soit pas inhibée et qu'elle puisse même être favorisée par l'azoture dans des conditions où ce toxique réduit de 35% la vitesse d'incorporation d ' u n acide aminé dans les protéines". Cette contra- diction n'est cependant qu'apparente; il est parfaitement concevable, en effet, que la synthèse nette d'une protéine particulière soit accrue bien que l'incorporation d'un acide aminé dans l'ensemble des protéines de la cellule soit ralentie, même si cette in- corporation pouvait être considérée sans plus comme reflétant une synthèse n e t t e de protéines. On doit sans doute en conclure que la vitesse de formation de la catalase chez la levure n'est pas limitée par l'activité des systèmes qui assurent l'incorporation des acides aminés dans les protéines ; dès lors il est raisonnable de supposer qu'elle est limitée par ce qu'il y a de spécifique dans la synthèse de la catalase, c'est-à-dire par le processus d'induction.
Or nous voyons qu'il s'est formé plus de catalase dans les cellules dans lesquelles l'enzyme était fortement inhibé que dans celles où son activité pouvait s'exprimer librement. D'autre part, nous n'avons jamais pu mettre en évidence d'induction de la catalase par l'azoture; c'est donc bien comme inhibiteur de l'enzyme que l'azoture agit.
Tout ceci nous conduit à conclure que l'activité réelle de l'enzyme in vivo pourrait être l'un des facteurs qui limitent la synthèse nette de l'enzyme induit.
Cet effet pourrait résulter d'une limitation par l'enzyme de la concentration de l'inducteur dans la cellule. Supposons en effet que l'inducteur de la catalase soit l'eau oxygénée qui se forme lorsque les systèmes réducteurs de la levure sont au contact de l'oxygène^^, et que la synthèse nette se produise lorsque la concentration de l'eau oxygénée dépasse u n certain seuil. Il est évident que la catalase active apparaissant dans la cellule abaisserait la concentration de l'inducteur et tendrait à limiter l'induction ; en présence d'un inhibiteur de l'enzyme, au contraire, la concentration de l'inducteur se maintiendrait plus longtemps à un niveau suffisamment élevé pour assurer l'induction.
Un mécanisme de ce type pourrait participer à l'ajustement des systèmes enzymatiques complexes qui se forment par inductions successives. Nous croyons que la formation accrue de catalase en présence d'azoture pourrait être la manifestation d ' u n tel méca- nisme d'autorégulation et ouvrir la voie de son étude expérimentale.
Remarquons enfin qu'en présence d'azoture la formation de catalase commence plus tard qu'en l'absence du toxique. Nous ignorons la signification de cette phase de latence. Nous ne croyons pas qu'il s'agisse d'un artefact d û à une récupération incom- plète de la catalase réellement présente dans les cellules: des expériences systématiques nous ont en effet montré que nous en retrouvons toujours de 85 à 95%. Cette phase de latence révèle peut-être une inhibition par l'azoture d'une étape du "métabolisme
Bibliographie p. 417.
d'induction". L'action d'inhibiteurs dépourvus de toxicité générale permettra sans doute d'éclaircir ce point particulier.
Cette recherche a été effectuée dans le cadre du Centre national de Recherches enzymologiques, avec l'appui de la Fondation Rockefeller et du Fonds national de la Recherche scientifique.
R É S U M É
A d e s c o n c e n t r a t i o n s bien choisies, i'azoture i n h i b e p r e s q u e c o m p l è t e m e n t l ' a c t i v i t é de la c a t a l a s e in vivo s a n s e m p ê c h e r la f o r m a t i o n induite de c e t e n z y m e ; I'azoture p e u t m ê m e favoriser la s y n t h è s e de la c a t a l a s e .
Ces r é s u l t a t s m o n t r e n t que la f o r m a t i o n induite de la c a t a l a s e n'est p a s c o n d i t i o n n é e par s o n f o n c t i o n n e m e n t . Ils i n d i q u e n t d'autre part q u e l ' a c t i v i t é réelle d e l ' e n z y m e in vivo p e u t être l'un des f a c t e u r s qui l i m i t e n t la s y n t h è s e de l ' e n z y m e e t qui c o n t r i b u e n t à l ' a j u s t e m e n t de sa c o n c e n t r a t i o n finale d a n s la cellule.
S U M M A R Y
A t proper c o n c e n t r a t i o n s , azide inhibits c a t a l a s e a c t i v i t y a l m o s t c o m p l e t e l y b u t d o e s n o t p r e v e n t t h e o x y g e n - i n d u c e d f o r m a t i o n of c a t a l a s e ; it c a n in effect e n h a n c e t h e s y n t h e s i s of this e n z y m e .
T h è s e o b s e r v a t i o n s m e a n t h a t i n d u c e d c a t a l a s e f o r m a t i o n does n o t require t h e e n z y m e t o b e a c t i v e . T h e y s u g g e s t t h a t t h e a c t u a l a c t i v i t y of t h e e n z y m e w i t h i n t h e cell m a y be o n e of t h e f a c t o r s w h i c h l i m i t its s y n t h e s i s a n d control t h e final level of t h e e n z y m e in t h e cell.
Z U S A M M E N F A S S U N G
I n g e e i g n e t e n K o n z e n t r a t i o n e n h e m m t S t i c k s t o f î w a s s e r s t o f î s â u r e die K a t a l a s a k t i v i t â t f a s t voU- stândig, o h n e die d u r c h S a u e r s t o f ï induzierte B i l d u n g des E n z y m s zu v e r h i n d e m ; sie k a n n sogar die S y n t h è s e der K a t a l a s e b e g û n s t i g e n .
D i è s e E r g e b n i s s e zeigen, dass die induzierte B i l d u n g der K a t a l a s e n i c h t v o n ihrer W i r k s a m k e i t a b h â n g t . Sie lassen andererseits v e r m u t e n , dass die wirkliche A k t i v i t â t in vivo eine der F a k t o r e n ist, die die S y n t h è s e des E n z y m s b e g r e n z t u n d die zur E i n s t e l l u n g der E n d k o n z e n t r a t i o n in der Zelle beitrâgt.
B I B L I O G R A P H I E
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Reçu le 27 septembre 1954
