NOTE SUR UN PROCÉDÉ SIMPLIFIÉ D’IMMUNISATIONS EN SÉRIE CHEZ LA POULE
A. PERRAMON
Station centrale de
Génétique
animale,Centre national Recherches
zootechniques, Jouy-en-Josas
(Seine-et-Oise)Contrairement à ce
qui
seproduit
chez les autresespèces,
lesiso-immun-anticorps
sont, chez la
poule, caractéristiques
non del’espèce,
mais de lalignée
- du moinspour certaines séries
alléliques
conditionnant lespropriétés antigéniques
correspon- dantes des hématies - et sont parconséquent
inutilisables dans des recherchessérologiques
sur d’autressouches,
pour démontrerl’analogie
dessystèmes
en cause.Dès le début des recherches sur les groupes
sanguins
desvolailles,
BRILES avait annoncé cettepropriété
pour lesanticorps
caractérisant lesystème B,
leplus poly- morphique
des 12systèmes
actuellement connus.Depuis,
d’autres auteurs ontsoupçonné
l’existence d’un mêmephénomène
pour lesanticorps
propres à d’autressystèmes.
Tout récemment(avril i 9 6 5 ),
unpremier
test decomparaison
entre labo-ratoires des réactifs de groupes
sanguins
des volailles a pu confirmer cette hétéro-généité
en se bornantuniquement
aux réactifs caractérisant les facteursantigéniques produits
par lesgènes
aux loci A et B.Il découle de cette situation
qu’en
étudiant lepolymorphisme antigénique éry- throcytaire
d’unelignée donnée,
on estobligé
deproduire
les réactifs au sein de cettelignée
sansespérer pouvoir
en utiliser d’autres obtenus sur deslignées
différentes.Dans le but d’avancer assez
rapidement
dans la connaissanceimmunogénétique
des
lignées
actuellement sélectionnées(lignées M n
etM 99 au Magneraud, lignée
Fave-rolles
F es
àJouy-en-Josas, lignée J, 6
àl’Orfrasière, etc.),
nous avons mis aupoint
un
procédé qui permet
l’immunisation d’ungrand
nombre d’animaux dans des conditions relativementsimples
etqui
vise à obtenir des antisérums nombreux ausein de
chaque lignée.
Pour
cela,
nous avonssimplifié
latechnique
dite delavage
desglobules qui,
sans
présenter
degrandes difficultés,
nécessitemalgré
tout un minimum de mani-pulations
au laboratoire :centrifugation
et éliminationsrépétées
dusurnageant qui,
lors d’immunisationsnombreuses, risque d’exiger beaucoup
detemps
et de main- d’ceuvre.Hormis certains cas rares
(porcs
parexemple),
on esttoujours obligé
deséparer
globules
etplasma
avant l’immunisation. Notamment chez lapoule,
cetteprécaution
devient d’autant
plus indispensable
que d’éventuelsanticorps dirigés
contre les pro- téinesplasmatiques pourraient
fausser les résultats de laspécificité érythrocytaire
recherchée car : 1
0 tout récemment on a établi chez le
poulet
unpolymorphisme
des gamma-globulines (D. Snx!,sA, r 9 6q.), (C.
S.D A mD,
M. I,. KABERLE et A. W.N ORDSKO G, I9
65) :
2
° dans cette
espèce,
au moinsjusqu’à
un certainâge ( 1 ) ( 4 mois),
lesglobules
rouges
peuvent
être enrobés d’une couche deglobulines (peut-être
degamma-glo- bulines) (N.
I,. W ARNER,y 6 2 )
difficilementséparables,
à moins de « laver» plusieurs
fois les échantillons destinés à être
analysés,
ce que l’on ne fait que rarement. Il est doncjustifié
chez lapoule
de bien « laver » lesglobules.
A la
place
de latechnique
delavage ordinaire,
les échantillons de sang totalprélevés
par dupersonnel
nonspécialisé,
sont versés dans des flacons contenant du sérumphysiologique.
Leur bouchon étant muni d’unpetit tube,
nousdisposons
ces flacons à
l’envers,
sur dessupports,
de telle sortequ’au
bout de 24 heures lesglobules
rouges sédimentés au fond de cestubes,
se trouventséparés
desprotéines plasmatiques qui
restent ensuspension
dans le sérumphysiologique.
Deux ml de sang total sont ainsi « lavés » avec 500ce de sérumphysiologique
et nous avons constatéqu’une
seule personnepeut
aisémenttraiter 5 o
animaux au moins enquelques heures,
à condition que les
animaux, disposés
dans des cages, soient dans le même ordre que lesflacons,
cequi
évite toute erreur. Naturellement il estconseillé,
surtoutpendant
les moisd’été,
degarder
l’ensemble des flacons dans une chambre froide(+ 4 °C).
Pour constater l’efficacité de ce
lavage,
nous avonsopéré
de la manière suivante : lesglobules
«lavés
o sont remis ensuspension
dans un volumeégal
d’eauphysiolo- gique, recentrifugés
et lesurnageant
traité au réactif dubiuret ;
dans aucun cas,( 1
) En effet c’est souvent des poulets ayant moins de 4 mois que l’on trouve en plus gmr !!mbrc
dans les élevages.
nous n’avons constaté une réaction
positive,
cequi
nouspermet
de considérer l’éli- mination desprotéines plasmatiques
comme satisfaisante.Nous pouvons donc
disposer
desglobules automatiquement
lavés 24 heuresaprès
leurprélèvement
et lesinjecter
à des animaux que l’onsaigne
par la mêmeoccasion ;
leursglobules
sont lavés à leur tour dans des flaconsanalogues qui
rem-placent
sur leportoir
lapremière
série de flacons et sont destinés à une immunisa- tionréciproque
despremiers
donneurs. Nous établissons ainsi descouples
d’animaux s’immunisant defaçon réciproque
que nousplaçons
dans deux séries de cagesparallèles.
Ainsi nous pouvons travailler defaçon systématique
avec 5ocouples
par
exemple,
soient 100animaux,
et arriver àproduire théoriquement
100 sérums.Une seule personne
peut
donc réaliser 100 immunisations 2 fois par semaine et obtenir de cettefaçon,
au bout de 3 ou4 semaines,
un nombrethéorique
d’immun-sérums
égal
au nombre d’animauxemployés.
En
réalité,
le nombre d’immunsérumsobtenus,
c’est-à-dire d’immunisationsréussies, dépend
des différencesantigéniques
des animaux dechaque couple.
Pourréduire au maximum la
polyvalence
desimmunsérums,
on aintérêt,
lors de l’étude d’unelignée
totalement inconnue dupoint
de vueantigénique,
à constituer descouples
d’animaux
plus
ou moinsapparentés,
selon le taux deconsanguinité
de lalignée,
la condition idéale étant celle d’une différence monofactorielle.
Notre
technique
nouspermettant
dedisposer
d’ungrand
nombre d’immunsé-rums
contemporains,
il nous estpossible
de leséprouver
simultanément et immé- diatement avec les mêmesglobules
des n - i animaux de la série. La multitude des réactionsenregistrées
offre par ailleurs le maximum de chances pour déceler les sérums apparemment monovalents et le maximum depossibilités
pourinterpréter
tout desuite des
analogies
decomportement
entre sérums.Une série d’immunisations
réciproques
de 40couples
depleins-frères (souche M 99 )
a
fourni,
au bout de 20jours,
26 sérums d’un titre minimum de 1/8.Rey pour
publimtioll
en octobre 1905.RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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