Table des Matières
Table des Matières
Résumé………...V Abréviations……….VI
I. Introduction………1
I.A. La chromatine et les modifications des histones……….1
I.B. Le complexe basal de transcription………..…4
I.C. Les facteurs de transcription régulateurs : Principaux domaines………4
I.C.1. Les motifs de liaison à l’ADN………5
I.C.2. Les domaines régulateurs………5
I.C.3. Les co-facteurs : une aide dans l’activité transcriptionnelle………...6
I.D. Modèle de la régulation transcriptionnelle……….7
I.E. Les facteurs de type bHLH….………..8
I.E.1. Les différentes familles bHLH………..………..8
I.E.2. Liaison à l’ADN et le domaine bHLH………9
I.F. Les bHLH-O ou les Hairy and Enhancer of Split related family………11
I.F.1. Structure des bHLH-O et le domaine Orange………...12
I.F.2. HES………13
I.F.2.a. Induction des HES……….14
I.F.2.b. Fonctions biologiques, cibles et partenaires………15
Neurogenèse………...15
Somitogenèse………..17
Myogenèse………..18
I.F.3. HRT………...18
I.F.3.a. Induction des HRT……….19
I.F.3.b. Fonctions biologiques, cibles et partenaires………20
Système cardiovasculaire………...20
Myogenèse………..21
I
Table des Matières
Neurogenèse………...22
But du travail………...23
II. Résultats et discussion..………..24
II.A. Criblages double-hybride en levures...………...24
II.A1. Les clones de levure exprimant les appâts XHRT1………..24
II.A.2. La banque d’ADNc d’embryons de xénope au stade neurula……….26
II.A.3. Les criblages double-hybride………..27
II.A.3.a. Domaines bHLH et Orange………27
II.A.3.b. Motif TEIGAF………...30
II.A.3.c. Partie IYT………..31
II.B. Protéine de type bHLH-O………35
II.B.1. Interaction XHairy1 / XHairy 2b avec XHRT1………..35
II.B.2. Homodimérisation de XHRT1……….37
II.C. BOIP (bc8 Orange Interacting Protein)…………...………..40
II.C.1. Analyse des séquences nucléiques et protéiques……….40
II.C.2. Expression de BOIP chez le xénope et la souris………..…………42
II.C.3. Interaction BOIP-HRT..………..….43
II.C.3.a. Interaction BOIP-HRT chez le xénope… ……….43
II.C.3.b. Interaction BOIP-HRT chez les mammifères……….47
II.C.4. Homodimérisation de BOIP………..…..49
II.D. GPS2 et AES……….50
II.D.1. GPS2………50
II.D.2. AES………..51
III. Conclusions et perspectives ……….53
Annexes….……….i
A1. Matériel et Méthodes………..………i
A1.1. Techniques liées à la manipulation d’ADN………...i
II
Table des Matières
A1.1.a. Plasmides utilisés………..i
Plasmides d’expression en levure………ii
Plasmides d’expression en lignée cellulaire……….ii
A1.1.b. Minipréparation d’ADN plasmidique par lyse alcaline………...ii
A1.1.c. Minipréparation d’ADN à partir de culture de levure………iii
A1.1.d. Préparation de la banque d’ADNc d’embryons de xénope au stade neurula……….………...iii
A1.1.e. Préparation d’une sonde ADN hexamère radioactive………..v
A1.1.f. Criblage d’ADN sur bactérie……….vi
A1.1.g. Séquençage………..vii
A1.2. Techniques liées à la manipulation d’ARN………....vii
A1.2.a. Extraction d’ARN d’embryons ou de tissus de xénope ou de souris…………vii
A1.2.b. Extraction d’ARN de levure………viii
A1.2.c. Analyse par transfert de type Northern………viii
A1.2.d. Transcription Reverse suivie de réaction de polymérisation en chaîne (RT-PCR). ……….………..ix
A1.2.e. Analyse par protection à la RNase (RPA)………x
A1.3. Techniques liées à la manipulation des protéines……...……….xi
A1.3.a. Extraction de protéines………..xi
A1.3.b. Immunoprécipitation par anticorps anti-Flag………...xi
A1.3.c. Analyse par transfert de type Western…..……….xii
A1.4. Culture et manipulation de bactéries………...xii
A1.4.a. Culture sur milieu solide ou liquide...………xii
A1.4.b. Préparation de bactéries électrocompétentes……….xiii
A1.4.c. Transformation de bactéries par électroporation………..………xiii
A1.5. Culture et manipulation de levures………xiv
III
Table des Matières
A1.5.a. Culture sur milieu solide ou liquide………..xiv
A1.5.b. Transformation de levure par la méthode d’acétate de lithium……….xiv
A1.5.c. Conjugaison de levures……….xv
A1.5.d. Double-hybride de levure………xvi
Test de sélection par les gènes rapporteurs………..…….xvi
Criblage double-hybride………..….xvii
