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Table des Matières
Table des Matières ... 1
Liste des Abréviations ... 4
1. Introduction ... 7
1.1. Le métabolisme du NAD ... 9
1.1.1. La voie de synthèse du NAD à partir du tryptophane ... 11
1.1.2. La voie de synthèse du NAD à partir du nicotinamide riboside ... 12
1.1.3. Le recyclage de l’acide nicotinique par la voie de Preiss-Handler ... 12
1.1.4. La voie de synthèse du NAD à partir du nicotinamide ... 14
1.2. Le NAD en tant que substrat ... 17
1.2.1. Les ADPR cyclases/NAD glycohydrolases ... 17
1.2.2. Les mono ADP ribosyl transférases (ARTs) ... 19
1.2.3. Les poly (ADP ribose) polymérases (PARPs) ... 20
1.2.4. Les désacétylases NAD-dépendantes ou sirtuines ... 23
2. Objectifs du travail ... 29
3. Résultats ... 30
3.1. Délétion du gène de la Nampt dans les lymphocytes ... 30
Article expérimental: Nicotinamide Phosphoribosyl Transferase/Pre-B Cell Colony- Enhancing Factor/Visfatin Is Required for Lymphocyte Development and Cellular Resistance to Genotoxic Stress ... 33
3.2. Délétion du gène de la Nampt dans la lignée myéloïde ... 49
3.3. Effet de l’inhibition de la Nampt sur la production de TNFα par les cellules du système immunitaire inné ... 53
Article expérimental: Intracellular NAD levels regulate tumor necrosis factor protein synthesis in a sirtuin-dependent manner ... 55
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3.4. Comparaison de la sécrétion de cytokines par les BMDC et BMDM ... 75
3.5. Effet de l’absence du gène codant pour SIRT7 sur la réponse immune... 81
4. Conclusions ... 85
4.1. Rôle da la Nampt dans le développement et la survie cellulaire ... 85
4.2. Rôle de la Nampt comme potentielle cible thérapeutique ... 87
4.2.1. Les effets anti-tumoraux de l’APO866 ... 87
4.2.2. Les effets anti-inflammatoires de l’APO866 ... 89
4.2.3. Les sirtuines et la régulation d’une réponse immunitaire ... 93
Article de revue: Sirtuins and inflammation: friends or foes? ... 95
5. Matériels et méthodes ... 125
5.1. Souris ... 125
5.1.1. Lignées de souris ... 125
5.1.2. Immunisation et dosage d’anticorps ... 125
5.1.3. Génotypage ... 126
5.2. Cultures cellulaires ... 127
5.2.1. Milieux de culture pour cellules eucaryotes ... 127
5.2.2. Traitement et stimulation des cultures cellulaires ... 127
5.2.3. Génération des cellules dendritiques et des macrophages dérivées de moelle osseuse 127 5.3. Analyse par cytométrie de flux ... 129
5.4. Western Blot et Immunoprécipitation ... 129
5.4.1. Extraction des protéines ... 129
5.4.2. Electrophorèse de protéines ... 129
5.5. ELISA (Enzyme -Linked-Immunoabsorbent Assay) ... 131
5.6. Dosage du NAD ... 131
6. Bibliographie ... 133
Annexe 1 ... 145
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Article expérimental: Pharmacological Inhibition of Nicotinamide Phosphoribosyltransferase/Visfatin Enzymatic Activity Identifies a New Inflammatory Pathway Linked to NAD ... 145 Annexe 2 ... 157 Article de revue: The Nicotinamide Phosphoribosyltransferase: A Molecular Link between
Metabolism, Inflammation, and Cancer ... 157 Annexe 3 ... 163 Article de revue: Métabolisme du NAD et contrôle de la réponse inflammatoire ... 163
