Comparaison des paramètres lipidiques dosés à l’automate de biochimie et au spectrophotomètre manuel à l’Hôpital de Zone de Mènontin

(1)

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI

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DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE

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RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION POUR L’OBTENTION DU DIPLOME DE LICENCE PROFESSIONNELLE

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Option : Analyses Biomédicales SUJET

Présenté et soutenu par :

Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI

Tuteur : Superviseur :

M. Godefroy D. ZINSOU Dr. Casimir D. AKPOVI Biotechnologiste médical à

l’Hôpital de Zone de Mènontin

Maitre-Assistant des Universités Enseignant de Biologie, Physiologie

Humaine et de Biochimie à l’EPAC / UAC

Jury

Président : Pr. Frédric LOKO Enseignant à l’EPAC/UAC Membres : 1. Dr. Casimir D. AKPOVI Enseignant à l’EPAC/UAC

2. Dr. Eugénie ANAGO Enseignant à l’EPAC/UAC 3. M. Godefroy D. ZINSOU

Biotechnologiste médical à HZM

Année académique 2014-2015 8^ème Promotion

Comparaison des paramètres lipidiques dosés à l’automate de biochimie et au spectrophotomètre

manuel à l’Hôpital de Zone de Mènontin

(2)

REPUBLIQUE DU BENIN

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MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

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UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI

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ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI

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DIRECTEUR : Pr. Félicien AVLESSI

DIRECTEUR ADJOINT: Prof. Clément BONOU

CHEF DE DEPARTEMENT: Dr. Casimir D. AKPOVI

(3)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI ii

N° Noms et prénoms Matières

1 ABLEY Sylvestre Déontologie Médicale

2 AKOWANOU Christian Physique

3 ADISSODA Cyrille Anglais

4 AGBANGLA Clément Génétique Moléculaire et Génie Génétique 5 AHOYO Théodora Angèle Microbiologie Générale

6 AIKOU Nicolas Biochimie structurale

7 AKOGBETO Martin Entomologie Médicale

8 AKPOVI D. Casimir Biologie, Physiologie Humaine et Biochimie 9 ALITONOU Alain Guy Chimie Générale et Chimie Organique

10 ANAGO Eugénie Biochimie clinique

11 ANAGONOU Sylvère Education Physique et Sportive

12 ATCHADE Pascal Parasitologie

13 BANKOLE Honoré Bactériologie appliquée et Virologie 14 BINAZON Claude César Soins infirmiers

15 COFFI Aristide Anglais

16 DARBOUX Raphael Histologie Appliquée

17 DESSOUASSI Noël Biophysique

18 DOSSEVI Lordson Techniques Instrumentales

19 DOSSOU Cyriaque Techniques d’Expression et Méthodes de Communication

20 DOUGNON Victorin Méthodologique de la recherche

21 FOURN Léonard Santé publique

22 HOUNNON Hyppolite Mathématiques

23 HOUNSOSSOU Hubert Anatomie, Biométrie, Biostatistique et Epidémiologie

24 KOUNASSO Gabriel Informatique

LISTE DES ENSEIGNANTS

(4)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI iii

25 LOKO Frédéric Biochimie Clinique

26 LOZES Evelyne Immunologie Générale et Equipements Biomédicaux

27 MASSOULOKONON Vincent Histologie Générale

28 SECLONDE Hospice Esprit de leadership, Immuno-Hématologie et Transfusion Sanguine

29 SEGBO Julien Biochimie Métabolique et Biologie Moléculaire

30 SENOU Maximin Histologie Appliquée

31 TOPANOU Adolphe Hématologie, Hémostase

32 YANDJOU Gabriel Techniques d’Expression et Méthodes de Communication

33 YOVO K. S. Paulin Pharmacologie et Toxicologie

(5)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI iv A Dieu Tout Puissant, pour tous ses bienfaits dans nos vies.

DEDICACE

(6)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI v

Nous témoignons notre profonde gratitude

 A l’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi en général et en particulier au département de Génie de Biologie Humaine qui nous a formés par son personnel ;

 Au Docteur Casimir D. AKPOVI pour avoir accepté d’être notre maître de mémoire, pour sa disponibilité, sa contribution à l’élaboration de ce travail;

 Au Docteur Georges Y. OFFRIN, Directeur de l’Hôpital de Zone de Mènontin, pour nous avoir permis l’accès au laboratoire d’analyses médicales de son hôpital ;

 A Monsieur Aurélien KANFON, pour nous avoir acceptés dans son laboratoire, son geste a été salutaire et nous lui en sommes profondément reconnaissants ;

 A Monsieur Godefroy D. ZINSOU, malgré ses multiples occupations a accepté de nous encadrer ; à ses côtés nous avions beaucoup appris, aussi bien professionnellement que socialement ;

 A tout le personnel du laboratoire de l’Hôpital de Zone de Mènontin pour sa disponibilité et son encadrement au cours de notre stage. ;

 A toute notre promotion pour les moments passés ensemble.

Ruth & Armel

REMERCIEMENTS

(7)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI vi

 A mon père GBAGUIDI A.S. Joseph,

Toi qui, toute ta vie t’es sacrifié pour l’épanouissement de tes enfants. Tes sacrifices ont été pour moi une source intarissable d’estime, d’enthousiasme, de courage, d’amour et d’espoir.

Reçois ce travail, très cher père, comme le couronnement de tes peines, de tes efforts et de ma profonde reconnaissance. Que DIEU te protège.

 A ma mère GNANCADJA Monique,

Pour tes prières, tes conseils et pour ton soutien moral. Reçois, adorable mère en ce travail ma profonde gratitude.

 A mon oncle GBAGUIDI Pierre pour le courage que tu ne cesses de me donner en toutes circonstances.

 A tous mes frères, cousins et amis pour vos indéfectibles soutiens.

 A toi AKPAO G. Armel pour ta disponibilité, ton ardeur dans le travail et pour ta patience.

 A tous ceux qui ont d’une manière ou d’une autre contribué à la réussite de ce travail.

Que Dieu daigne vous combler de ses grâces.

J’exprime en ces lignes mes sincères remerciements

 A Oniodjè AKPAO mon père, pour avoir toujours bataillé pour le bienêtre de ta famille, reçois ce document comme prémisses de vos dépenses multiples ;

 A Charlotte MAGBONDE et Sophie ADIKO mes mères, pour m’avoir élevé, protégé, enrobé d’amour dans une unité inouïe et pour vos myriades de conseils et prières ;

 A Ulrich, Christel, Geoffroy et Oscar AKPAO mes frères, pour nous inciter à persévérer dans notre métier d’ambassadeurs de notre modeste famille ;

 A mes sœurs, cousins, oncles, amis pour vos nombreuses marques d’affection ;

 A Ruth GBAGUIDI féale et coauteur, que de pareilles tâches nous réunissent derechef.

Longévité à vous pour de futures moissons!

Ruth I. N. GBAGUIDI

Armel G. AKPAO

(8)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI vii

 A SON EXCELLENCE LE PRESIDENT DU JURY

Vous nous faites un grand honneur en acceptant de présider notre jury malgré vos multiples occupations.

Veuillez agréer monsieur le président, l’expression de notre profonde gratitude.

 AUX HONORABLES MEMBRES DU JURY

Nous sommes très sensibles à l’honneur que vous nous faites en acceptant de juger ce travail.

Veuillez recevoir nos vives considérations.

HOMMAGES

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI viii AG: Acide gras

Apo: apoprotéines ou apolipoprotéines CoA : coenzyme A

Congel. : Congélation

CV : Coefficient de Variation HDL: High Density Lipoprotein IDL: Intermediary Density Lipoprotein

LCAT : Lecithin Cholesterol Acyl Transferase LDL : Low Density Lipoprotein

LPL : Lipoprotéine lipase

MCV : Maladies Cardiovasculaires Moy : Moyenne

NCEP : National Cholesterol Education Program Norm. : Normales

OMS : Organisation Mondiale de la Santé Patho. : Pathologiques

Spect : Spectophotomètre TG : Triglycéride

VLDL : Very Low Density Lipoprotein

LISTE DES SIGLES ET

ABREVIATIONS

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI ix

La qualité de l'analyse biochimique, comme celle de tout acte biologique, est partie intégrante de la qualité de l'acte médical au service du malade. La biochimie clinique étant, plus que toute autre discipline, de nature quantitative, les méthodes chiffrées d'évaluation de la qualité ont pu se développer très précocement. L’obtention du meilleur niveau possible résulte du contrôle soigneux d'une multitude de facteurs. Dans cette étude, nous nous sommes proposés de (i) comparer les valeurs de cholestérol total (CT), des triglycérides (TG), de cholestérol dérivé de HDL (HDLc) et de LDL (LDLc) générées par le spectrophotomètre SECOMAM Basic et par l’automate MINDRAY BS-200 et de (ii) déterminer si nécessaire, un coefficient de correction en cas de disparité significative des résultats. Cette étude a été effectuée sur 125 échantillons de sérums sur lesquels les TG, CT, HDLc et LDLc ont été dosés premièrement après centrifugation à l’automate MINDRAY BS-200 puis congelés en moyenne pendant 05 semaines. Un second dosage a été réalisé après congélation- décongélation simultanément au spectrophotomètre et à l’automate. Il ressort de cette étude que les valeurs de CT (p<0,0001), TG (p<0,05) et HDLc (p<0,002) ont baissé significativement au spectrophotomètre SECOMAM comparées à l’automate. Le taux de LDLc obtenu par la formule de Friedewald a augmenté significativement (p<0,001) au spectrophotomètre par rapport aux résultats obtenus par dosage direct à l’automate. Nous avons déterminé qu’il existe une bonne corrélation entre les valeurs obtenues des deux appareils pour les TG (r = 0,94), une forte corrélation entre le HDLc (r = 0,84) le CT (r = 0,88) et le LDLc (r = 0,75). La congélation des échantillons a entrainé une augmentation significative du taux de CT (p<0,002) et de LDLc (p<0,05) alors que les TG et le HDLc n’ont pas varié de façon significative. Les dosages effectués à l’automate sont plus précis et exacts que ceux réalisés sur le spectrophotomètre sur la base des résultats de l’évaluation de la précision et de l’exactitude.

Mots clés: Paramètre lipidique, comparaison, précision, exactitude, spectrophotomètre, automate.

RESUME

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI x Biochemical analysis, like of any other biological act, is subjected to quality control.

Clinical biochemistry is quantitative and numerical methods of quality assessment were developed very early. Obtaining the best possible dosage precision needs careful control of a multitude of factors. In this study, we have proposed to (i) compare the values of total cholesterol (TC), triglycerides (TG), HDL-derived cholesterol (HDLc) and LDL (LDLc) generated by the SECOMAM Basic spectrophotometer and automate MINDRAY the BS-200;

(ii) determine if necessary, a correction coefficient in case of a significant disparity in results from both methods. This study was performed on 125 serum samples on which TG, TC, HDLc and LDLc were assayed directly and after frozen for an average of 05 weeks. A second assay was performed after simultaneous freeze-thaw with spectrophotometer and PLC. It appears from this study that the levels of CT (p <0.0001), TG (p <0.05) and HDL (p <0.0002) obtained from SECOMAM spectrophotometer were significantly decreased compared the results from MINDRAY BS-200 automate. In the opposite, the level of LDLc, obtained from spectrophotometer was significantly increased (p <0.001) compared to the result from the automate. We determined that there is a good correlation between lipid parameters values TG (r = 0.94), HDL (r = 0.84), CT (r = 0.88) and LDLc (r = 0.75) obtained from the two devices.

Frozen serum samples showed significant increase in CT (p <0.002) and LDLc (p <0.05) levels while TG and HDLc levels did not change significantly. The precision tests of repeatability and reproducibility results suggested that the MINDRAY BS-200 automate is more accurate than the spectrophotometer.

Keywords: Lipid parameter, comparison, precision, accuracy, spectrophotometer, automate.

ABSTRACT

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI xi

Tableau I: Mode opératoire du dosage du cholestérol total.

Tableau II : Mode opératoire d’obtention du précipité HDLc.

Tableau III : Mode opératoire du dosage du HDLc.

Tableau IV: Mode opératoire du dosage des triglycérides.

Tableau V: Evaluation de la précision du dosage du CT et des TG effectué à l’automate MINDRAY BS-200 et au spectrophotomètre SECOMAM.

Tableau VI : Evaluation de l’exactitude du dosage du CT et des TG effectué à l’automate MINDRAY BS-200 et au spectrophotomètre SECOMAM.

Tableau VII: Paramètres lipidiques dosés au spectromètre SECOMAM Basic et à l’automate MINDRAY BS-200 suivant les valeurs normales et pathologiques.

LISTE DES TABLEAUX

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI xii Figure 1 : Répartition de la population étudiée suivant le sexe

Figure 2 : Comparaison des moyennes des paramètres lipidiques dosés au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

Figure 3 : Courbe de corrélation entre les valeurs de CT obtenues au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

Figure 4 : Courbe de corrélation entre les valeurs des TG obtenues au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

Figure 5 : Courbe de corrélation entre les valeurs de HDLc obtenues au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

Figure 6 : Courbe de corrélation entre les valeurs de LDLc obtenues au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

Figure 7 : Comparaison des moyennes des paramètres lipidiques dosés après congélation et après centrifugation.

Figure 8 : Evolution des variations des paramètres lipidiques en fonction du temps de congélation

LISTE DES FIGURES

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 1

Chaque année, les maladies cardiovasculaires engendrent à elles seules plus de 17,3 millions de décès à travers le monde, soit, plus de 30% de tous les décès réunis (World Health Organization, 2011 et World Heart Federation State of the Heart, 2010). Les données les plus récentes indiquent qu’elles représentent plus de 48% de tous les décès imputables aux maladies non transmissibles, à côté de ceux attribués aux cancers, aux broncho- pneumopathies chroniques obstructives et au diabète. Parmi ces décès, près de 80%

surviennent dans les pays en voie de développement, dans lesquels on note une nette progression des MCV en raison des changements du mode de vie et de l’insuffisance de mesures préventives (Mortef, 2005 ; World Health Organization, 2011 ; Perk et coll., 2012).

Selon l’OMS, si rien n’est fait, les MCV seront responsables, d’ici 2020, de 3,9 millions de décès en Afrique et auront contribué à augmenter de 20% le taux de mortalité dû aux maladies non transmissibles dans le continent. De plus, plusieurs études indiquent que la santé cardiovasculaire deviendra, dans un avenir proche, une des premières priorités de santé publique aussi bien sur notre continent que dans le monde. Au Bénin, 15% de décès sont dûs aux maladies cardiovasculaires (OMS, 2011). Les dyslipidémies avaient été longtemps suspectées dans le développement de l’athérosclérose. De nombreuses études ont fini par établir une corrélation entre l’incidence de l’athérosclérose et le taux de cholestérol total, HDL cholestérol et LDL cholestérol (Valdiguié, 2000). Des études récentes ont identifié les triglycérides comme d’importants facteurs de risques dans lesdites maladies. Les techniques habituelles du dosage des paramètres du profil lipidique sont l’ultracentrifugation, l’électrophorèse sur agarose et la résonnance magnétique nucléaire (Richard, 2009). Elles sont coûteuses, exigeantes, lentes à produire des résultats mais précises et exactes dans le diagnostic des maladies cardiovasculaires. Dans les laboratoires d’analyses médicales au Bénin, il est fait usage du spectrophotomètre d’absorption moléculaire. De nos jours les centres hospitaliers adoptent progressivement les nouveaux équipements de laboratoire dont l’automate MINDRAY BS-200. Mais, l’adoption de nouveaux équipements dans nos laboratoires d’analyses médicales se fait généralement sans confronter les nouveaux résultats à ceux délivrés jusqu’alors. Cependant, cela devrait s’imposer car les valeurs de référence utilisées par le clinicien ne subissent pas de changement. A l’Hôpital de Zone de Mènontin, les acteurs ont doté le laboratoire d’un automate de biochimie en vue de satisfaire les clients

INTRODUCTION

(15)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 2 de plus en plus exigeants. La comparaison des paramètres lipidiques dosés à l’automate et

au spectrophotomètre à l’Hôpital de Zone de Mènontin a été l’objet de notre travail de fin de formation.

L’objectif général de cette étude est de comparer les valeurs de dosage obtenues par les deux appareils.

Spécifiquement, il s’agira de :

 étudier d’abord la précision et l’exactitude liées au dosage des paramètres lipidiques sur les deux équipements,

 déterminer ensuite la corrélation entre les valeurs générées par les deux équipements,

 puis enfin déterminer si nécessaire un facteur de correction applicable à l’appareil le moins précis et exact.

(16)

1. Généralités

1.1. Paramètres lipidiques 1.1.1. Chylomicrons

Les chylomicrons sont les premières lipoprotéines synthétisées dans le processus du transport des lipides dans le sang. Formés au niveau des entérocytes à partir des triacylglycérols et du cholestérol estérifié ou libre enrobé d’apoprotéines, ils sont libérés dans la circulation lymphatique par exocytose. Les chylomicrons (les triacylglycérols) sont ensuite captés, dégradés en acides gras et glycérols dans les lysosomes hépatocytaires (Valdiguié, 2000).

1.1.2. VLDL

Les lipoprotéines à très faibles densités sont synthétisées dans le foie à partir des triacylglycérols (80%), des différentes formes de cholestérol, de l’apoB-100 (protéine majoritaire) de l’apoA-I et de l’apoE. Les VLDL perdent de triacylglycérols, d’apoC-III et d’apoE durant leur séjour dans la circulation sanguine au profit des HDL qui s’enrichissent en ester de cholestérol (Mathieu, 2006).

1.1.3. IDL

Elles sont issues des VLDL après leur déplétion partielle en triglycérides. Les IDL sont pour une moitié récaptées par le foie pour être recyclées en VLDL. L’autre moitié sera modifiée en LDL après une nouvelle perte de triglycérides. Les IDL sont constituées principalement de TG, apoB100, CIII et E (Guinchard, 2003).

1.1.4. LDL

Les LDL, qui dérivent de la maturation des IDL, sont composées d'apoB, de cholestérol libre et estérifié mais aussi de triglycérides. Elles circulent dans le sang vers les tissus périphériques et le foie. Après fixation sur leur récepteur, les lipoprotéines de faibles densités sont internalisées et dégradées en cholestérols libres, acides gras et acides aminés de l'apoB (Valdiguié, 2000).

GENERALITES

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 4 1.1.5. HDL

Les HDL sont formées dans le foie et certains tissus périphériques par l’action des apoprotéines D, E, A1 qui enrobent le complexe phospholipide et cholestérol sous forme de préβ HDL. Elles vont atteindre leur maturation ensuite dans la circulation sanguine sous l’action de la LCAT. Les HDL circulantes peuvent être retirées par le foie de la circulation par endocytose médiée par des récepteurs spécifiques. Les esters de cholestérol sont hydrolysés.

Le cholestérol libre peut être recyclé dans d’autres lipoprotéines, utilisé pour la formation des hormones ou éliminé sous forme de sels biliaires (Vaisar et coll., 2007).

1.1.6. Cholestérol

La biosynthèse du cholestérol nécessite un précurseur unique, l’acétate dont la forme activée est l’acétyl-CoA. Elle se déroule suivant plusieurs étapes. Après une condensation de trois (3) acétyl-CoA (C2) pour donner le mévalonate (C6), il s’en suit la décarboxylation du mévalonate pour former les isoprènes activés (C5). L’addition de 6 unités isopréniques entre elles permet de former le squalène, structure à 30 atomes de carbone. Une vingtaine de réactions différentes permettent la cyclisation et la déméthylation du squalène, en présence d’O2, pour former le cholestérol (C27).

L’organisme est incapable de dégrader les noyaux stéroïdes et par conséquent le cholestérol. Néanmoins pour atteindre un juste équilibre quantitatif, ce dernier est recyclé par le foie pour être éliminé sous forme modifiée dans les acides biliaires ou sous forme de cholestérol réduit (coprostérol) par voie fécale.

1.1.7. Triglycérides

La synthèse des triglycérides a lieu dans le réticulum endoplasmique. Ils sont essentiellement produits dans le foie et dans les cellules adipeuses (adipocytes) et intestinales.

Les triacylglycérols sont libérés dans le cytosol sous forme de gouttelettes lipidiques ou dans la lumière du réticulum endoplasmique. Dans les adipocytes, ces gouttelettes fusionnent et migrent vers les grands globules lipidiques centraux. Dans les cellules hépatiques et intestinales, les triacylglycérols sont enveloppés d'une couche de protéines donnant des lipoprotéines (VLDL et Chylomicrons). Constituées d'un squelette glycérol acylé avec trois

(18)

acides gras, les triglycérides sont hydrolysées par la lipase pancréatique. Cette réaction libère du 2-monoacylglycérol (2-MG) et des acides gras (AG). (Hininger, 2012).

1.2. Place des paramètres lipidiques dans le diagnostic biologique

Les MCV constituent un problème de santé publique dans le monde. Dans les MCV, le développement de l’athérosclérose est, dans la plupart des cas, la conséquence d’une dyslipidémie. Par définition la dyslipidémie est une modification pathologique primitive ou secondaire des lipides sériques. La dyslipidémie athérogénique correspond à une ou plusieurs anomalies dont l’hypercholestérolémie, l’hypertriglycéridémie, la baisse du HDL cholestérol, et l’augmentation du LDL cholestérol (Mathieu, 2006). Les hyperlipidémies sont un des facteurs de risque majeur de l’athérosclérose. Elles sont caractérisées par des anomalies du métabolisme des lipoprotéines, les transporteurs de lipides, le cholestérol ou les triglycérides dans le plasma sanguin. Le diagnostic biologique des MCV inclut le dosage des paramètres lipidiques.

1.2.1. Aspect du sérum

Chez un sujet à jeun depuis 12 heures, le sérum doit être clair, c'est-à-dire contenant un faible taux de VLDL et sans chylomicron. S'il est opalescent, il y a un excès de VLDL ; s'il est lactescent, des chylomicrons sont présents (Sassolas, 2006). Pour contrôler la présence effective de chylomicrons, le sérum est conservé 24 heures à +4°C et les chylomicrons forment alors une crème à la surface du sérum. Quoiqu’il en soit, il est ensuite nécessaire de quantifier les lipides et de rechercher l’origine de cette anomalie (primitive ou secondaire).

(Alain et coll., 1991).

La détermination des différents paramètres lipidiques permettrait une prise en charge rapide et un bon traitement des patients pour une réduction du taux de mortalité dû au MVC.

1.2.2. Cholestérol total

Il y a hypercholestérolémie nette pour un taux de cholestérol sanguin supérieur à 2,60g/L (>6,7mmol/L) chez l’adulte moyen et inférieur à 2,80 g/L chez l’adulte de plus de 60 ans. (Alain et coll., 1991).

(19)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 6 1.2.3. HDL cholestérol

Les études épidémiologiques ont établi le HDL cholestérol comme un antiathérogène.

Si ce HDL cholestérol est inférieur à 0.40 à 0.50 g/L (1 à1.3 mmol/L) chez l’adulte, le risque athérogène cardiovasculaire est accru. (Alain et coll., 1991).

1.2.4. LDL cholestérol

Le LDL cholestérol quant à lui a été révélé comme athérogène. Un taux de LDL cholestérol sanguin supérieur à 2g/L (5mmol/L) entraine un risque athérogène cardiovasculaire accru. La formule de Fridewald permet de calculer le LDLc à condition que les TG soient inférieures à 4mmol/L (3,5 g/L). (Alain et coll., 1991).

Pour des concentrations exprimées en mmol/L

Pour des concentrations exprimées en g/L

1.2.5. Triglycérides

Il y a hypertriglycéridémie nette quand le taux sérique des triglycérides totaux est

>2g/L (2.2mmol/L). (Alain et coll., 1991).

1.3. Description comparative des deux équipements de dosage des paramètres lipidiques

1.3.1. Dissemblances

Les paramètres du bilan lipidique classique sont traditionnellement dosés dans les laboratoires au spectrophotomètre d’absorption moléculaire et la valeur du LDL cholestérol est obtenue par la formule de Friedewald. Mais les avancées technologiques introduisent en biologie clinique, comme dans nombreux autres domaines de l’activité humaine, de nouvelles méthodes de travail, de nouveaux équipements. Depuis quelques années, les automates sont de plus en plus utilisés dans les laboratoires de biochimie.

LDLc = CT-(HDLc + TG/2,2)

LDLc = CT-(HDLc +

(20)

1.3.1.1. Automate MINDRAY BS-200

L'automate MINDRAY BS-200 associe performance et fiabilité des résultats et vous permet de réaliser 200 tests par heure. Avec ses fonctionnalités innovantes, le BS-200 s'adapte et répond aux exigences d'un diagnostic toujours plus précis, 40 paramètres à bord et 40 échantillons. Adapté aux traitements d’urgences, le BS-200 est entièrement autonome. Il est bicompartimenté ; l’un réfrigère, conçu pour conserver les réactifs dans les températures optimales et l’autre pour incuber automatiquement ceux-ci avant utilisation. Les longueurs d’onde vont de 340 à 670 nanomètres. Le volume réactionnel varie de 180-500 microlitres. Il est équipé d’un système d’auto-lavage avec de l’eau distillée et des détergents, préchauffés et d’un détecteur du niveau des différents liquides dont il fait l’inventaire. Dépourvu d’aiguilles consommables, il possède un probe inox pour prélever les réactifs et échantillons. Il doit l’exécution de toutes ces tâches à son logiciel sous Windows XP. (Voir figure en annexe1).

1.3.1.2. Spectrophotomètre SECOMAM Basic

L’analyseur semi-automatique SECOMAM Basic est conçu pour répondre aux besoins des laboratoires d’analyses médicales ou des unités d’urgences et néonatales des hôpitaux. Il fournit des résultats rapides d’analyse biochimique sur les substrats, les enzymes, avec une manipulation et un prélèvement de l’échantillon automatisé grâce au détecteur d’aspiration à l’infrarouge, à la pompe péristaltique et à la microcuve à circulation. Les longueurs d’onde vont de 340 à 700 nanomètres. L’accès est direct à la méthode préprogrammée par l’utilisateur. Ce spectrophotomètre inclut les principales fonctions exigées par ce type de mesure et assure la thermostatisation de la cuve par effet Peltier. Aussi, il permet le calcul adapté à la lecture des substrats et cinétiques enzymatiques. Le spectrophotomètre est muni d’un clavier de sélection des analyses associé à un pavé numérique. Il est doté de touches de fonction et d’un écran qui permettent de simplifier l’utilisation du Basic. Le curseur quant à lui permet d’activer les différentes fonctions du clavier. Cet appareil de laboratoire est d’une importance capitale en raison du dosage des paramètres biochimiques qu’il permet d’effectuer. (Voir figure en annexe2)

1.3.2. Points communs

L’automate MINDRAY BS-200 et le spectrophotomètre SECOMAM Basic sont tous des spectrophotomètres utilisés en biochimie pour le dosage des paramètres biochimiques.

(21)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 8 Les deux appareils fonctionnent suivant le principe standard des dosages biochimiques en

photométrie d’absorption moléculaire. Un système entièrement statique avec un mode multi- longueurs d’onde instantané est adopté. Les performances sont d’une longévité appréciable.

Les méthodes en point final de même celle cinétique sont applicables sur ces deux appareils.

Ils sont mono ou biréactifs ; mono ou dichromatiques.

1.3.3. Points forts et points faibles

1.3.3.1 Automate MINDRAY BS-200

L’automate MINDRAY BS-200 est rapide, économise en moyenne au tiers le réactif.

Il permet d’effectuer plusieurs dosages simultanément sans nécessiter la présence de manipulateur. Il est facile d’utilisation et moins fastidieux, réduit considérablement les erreurs dues au manipulateur. Par contre, il nécessite beaucoup plus d’eau distillée, de barettes de cuvettes et une maintenance rigoureuse.

1.3.3.2 Spectrophotomètre SECOMAM Basic

Il est utilisable en cas de coupure de courant grâce à la batterie de secours dont il est doté et conseillé aux laboratoires à faible volume de travail. Il permet de relire plusieurs fois le même dosage avec un suivi facile de la manipulation. Néanmoins, nombres d’erreurs sont dues au manipulateur.

(22)

2. Cadre, Matériel et Méthodes 2.1. Cadre

Le cadre d’étude regroupe le cadre institutionnel où nous sommes formés jusqu’en licence et le cadre technique où le stage a été effectué. Le cadre institutionnel est le département de Génie de Biologie Humaine (GBH) de l’Ecole Polytechnique d’Abomey- Calavi (EPAC). Le cadre technique est le laboratoire d’analyses biomédicales de l’Hôpital de Zone de Mènontin. Ces cadres seront présentés brièvement.

2.1.1. Cadre institutionnel

Anciennement appelé Collège Polytechnique Universitaire, devenu Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi depuis, a été créé en février 1977 pour répondre à un besoin de formation technique au niveau de l’enseignement supérieur. A l’époque, la mission assignée au Collège Polytechnique Universitaire (CPU) est de former des techniciens supérieurs capables de satisfaire les attentes liées à l’objectif de développement économique de la nation. Les évolutions de l’environnement, notamment les progrès en matière technologique, ont amené les autorités à engager des réformes en vue de prendre en compte ces avancées et faciliter l’actualisation des enseignements dispensés. C’est dans ce cadre que la dénomination CPU a été modifiée en Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi.

Elle est composée de 02 secteurs : le secteur industriel et le secteur biologique. Le secteur industriel comprend les départements de: Génie civil, Génie Informatique et Télécommunication, Génie Mécanique et Energétique, Génie Electrique, Génie de Maintenance Biomédicale. Le secteur biologique comprend les départements de Génie d’Imagerie Médicale et Radiologie, Génie de l’environnement, Production Santé Animale, Génie de Technologie Alimentaire et Génie de Biologie Humaine (GBH) où la formation nous est donnée. Ce département de GBH délivre actuellement des diplômes de Licence Professionnelle, Technicien Supérieur. L’actuel Chef Département est Dr. Casimir D.

AKPOVI, maître-assistant en Biochimie.

CADRE, MATERIEL ET METHODES

(23)

2.1.2. Cadre technique

Seront abordés à ce niveau la situation géographique et l’historique de l’hôpital de Mènontin, la situation et la présentation ainsi les équipements du service de laboratoire d’analyses biomédicales respectivement.

2.1.2.1. Situation géographique et historique de l’Hôpital de Zone de Mènontin

L’Hôpital de Zone de Mènontin est localisé dans le 9^ème arrondissement de Cotonou dans le département de Littoral, république du Bénin. Il est situé dans la première rue pavée après le supermarché « Bénin Marché M» de Mènontin/Kindonou, à droite en quittant le stade de l’Amitié de Kouhounou et à gauche en quittant l’échangeur de Godomey, dans la rue en face de Diamond Bank au lot 2130 A (voir annexe 3).

Au départ centre de santé de Mènontin, inauguré dans le cadre du PRGU sur crédit AID et mis en contractualisation grâce à un mandat de gestion en concession avec l’Association Médico-Sociale de Mènontin (AMSM), il est devenu Hôpital de Mènontin érigé en hôpital de zone de Cotonou 5 depuis 2003. C’est un établissement disposant d’une autonomie de gestion administrative et financière. Il a une superficie de 2345 m2 et est actuellement dirigé par le Docteur Georges Yves OFFRIN. Cet hôpital dispose de nombreux services administratifs et de soins dont le service du laboratoire d’analyses biomédicales où nous avons effectué notre stage.

2.1.2.2. Situation et présentation du service de laboratoire

Situé à l’étage du bâtiment principal et à l’extrême Est, le laboratoire d’analyses biomédicales de l’HZM répond aux normes nationales et à celles de l’OMS relatives à un laboratoire d’analyses biomédicales dans un hôpital de zone ou de district sanitaire.

C’est un laboratoire pluridisciplinaire disposant d’un hall d’accueil, d’un box de prélèvement, d’une salle multidisciplinaire (Biochimie et Hémostase, Immuno-Hématologie, Examens Spéciaux (Immunochimie et Hormonologie), d’une salle de Microbiologie regroupant la Bactériologie, la Parasitologie et la Mycologie, d’un bureau pour la gestion administrative, d’une salle de garde et d’une salle d’eau (lavabo, douche, WC). La salle

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multidisciplinaire est le siège d’une unité de Banque de Sang et pour des raisons de commodités au cours des gardes, la parasitologie paludéenne y est affectée. Il dispose d’un bon nombre d’équipements qu’il s’avère important de faire savoir.

2.1.2.3. Equipements du laboratoire d’analyses médicales

Le laboratoire d’analyses biomédicales de l’HZM dispose de nombreux équipements tels que : l’analyseur de coagulation EBMED pour l’hémostase, l’automate d’hématologie Sysmex XS-500i, hotte à flux laminaire pour les manipulations bactériologique et de coprologie parasitaire, l’automate Mini Vidas® pour des examens spéciaux (hormonologie, immunochimie, etc.), le néphélomètre Nephstar de GOLDSITE Diagnostics pour l’immunochimie (le dosage de la Protéine C Réactive ultra-sensible, de l’Anti Streptolysine O, etc.), l’automate de biochimie MINDRAY BS-200, le spectrophotomètre d’absorption moléculaire semi-automatique SECOMAM Basic, de réfrigérateur Liebberr et autres, le bain- marie Jouan, la centrifugeuse Rotina 35, l’automate ElePhor 8s pour l’électrophorèse des protéines sériques, urinaires, l’hémoglobine, etc. Au cours de notre stage, un certain nombre de matériel a été utilisé pour réaliser cette étude.

2.2. Matériel

2.2.1. Matériel biologique

Dans cette étude nous avons utilisé le sérum comme matériel biologique.

2.2.2. Matériel consommable

Tubes secs stériles, semi-microcuves, barrettes de cuvettes, aliquotes, portoirs, poubelles, papier hygiénique, cônes, pissette d’eau distillée ont été utilisés.

2.2.3. Equipements

Une centrifugeuse (Rotina 35), un spectrophotomètre d’absorption moléculaire (SECOMAM Basic), un automate MINDRAY BS-200, un congélateur OCEAN, un bain- marie (JOUAN) et des micropipettes réglables ont été utilisés.

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 12 2.2.4. Réactifs

Cholesterol-Liquizyme CHOD-PAP (Monoréactif), Triglyceride-Liquizyme CHOD- PAP (Monoréactif), LDLcholesterol Kit (Méthode Directe), ont été utilisés dans le dosage des paramètres lipidiques étudiés.

2.3. Méthodes

La présente étude a connu trois grandes phases dans son élaboration. D’abord une phase de découverte, ensuite vient la phase de manipulation puis enfin celle de l’analyse statistique des données recueillies.

2.3.1. Phase de découverte

Elle a débuté dès le mois de mai où a commencé le stage académique. Elle a consisté en effet en une rotation dans les différentes sections qui s’est achevée avec la détection d’un sujet de rapport. Ceci a suscité des recherches documentaires tant sur l’internet que dans les bibliothèques notamment celle de l’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi. Ainsi, les directives ont été prises pour la rédaction du protocole de recherche voire du rapport.

2.3.2. Phase de manipulation

Elle a commencé par l’échantillonnage qui s’est étendu jusqu’au mois d’Août. Il a obéit à deux critères.

 Critères d’inclusion et d’exclusion

L’échantillonnage a inclus tous les patients admis au laboratoire qui ont présenté un bilan lipidique et respecté les conditions requises (au moins 12 heures et 16 heures de jeûne au plus) et exclu ceux qui n’ont pas respecté ces conditions.

 Echantillonnage

125 échantillons ont été utilisés dans la présente étude.

2.3.2.1. Phase pré-analytique

Elle a consisté au prélèvement de sang par ponction veineuse chez les patients admis

au laboratoire avec un bilan lipidique. Les échantillons ont été ensuite centrifugés et les

(26)

sérums recueillis dans les aliquotes et mis au congélateur. Lesdits sérums ont été décongelés au bain-marie à 37°C, le jour de la manipulation, puis dosés au spectrophotomètre d’absorption moléculaire SECOMAM Basic et à l’automate BS- 200 simultanément.

2.3.2.2. Phase analytique

Au cours de cette phase, le dosage du cholestérol total, du HDL cholestérol, des triglycérides et du LDL cholestérol a été réalisé. Le dosage de chaque paramètre a respecté une méthodologie qui lui est spécifique.

 Dosage au spectrophotomètre Dosage du cholestérol total

Le dosage du cholestérol total a été réalisé par la méthode enzymatique au cholestérol Estérase/Oxydase/Peroxydase, méthode de TRINDER, dont le principe est le suivant :

Le cholestéride réagit avec l’eau en présence du cholestérol estérase pour donner du cholestérol et d’acide gras. Ce cholestérol en présence du cholestérol oxydase et de dioxygène donne du choles-4-ène-3-one et du peroxyde d’hydrogène qui réagira avec l’amino-4-antipyrine pour donner un chromogène de couleur rose, quinoneimine, dont l’intensité est proportionnelle à la concentration en cholestérol total.

La longueur d’onde : 500nm (492 – 550nm) a été utilisée, l’eau distillée pour le zéro de l’appareil et la réaction s’est effectuée à 37°C.

Tableau I : Mode opératoire du dosage du cholestérol total

Blanc réactif Etalon Sérum contrôle Dosage

Réactif de travail 1 mL 1 mL 1 mL 1mL

Eau distillée 10µL

Etalon 10µL

Sérum contrôle 10µL

Echantillon (sérum) 10µL

(27)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 14 Le mélange homogénéisé a été laissé à température ambiante pendant 10mn. Aucune

interférence majeure n’a été signalée et une linéarité jusqu’à 5g/L a été notée. Les valeurs normales s’étendent (sur du sérum comme du plasma) de 1,50 à 2,60g/L.

Dosage du HDL cholestérol

Principe : Les dosages du cholestérol total et du HDL cholestérol vont souvent de pair.

On réalise une précipitation phosphotungstique. Les lipoprotéines de faibles densités (LDL et VLDL) sont spécifiquement précipitées par l’acide phosphotungstique en présence de magnésium. Après centrifugation, le cholestérol lié aux lipoprotéines de hautes densités (HDL cholestérol) est dosé dans le surnageant. Le HDL en présence du réactif de cholestérol donne un complexe coloré rose dont l’intensité est proportionnelle à la concentration en HDL cholestérol. La longueur d’onde : 500nm (492 – 550nm) a été utilisée, l’eau distillée pour le zéro de l’appareil et la réaction s’est effectuée à 37°C.

Tableau II : Mode opératoire d’obtention du précipité HDLc

Blanc précipitant Sérum contrôle Dosage

Eau distillée 500µL

Sérum contrôle 500µL

Echantillon (sérum, plasma)

500µL

Précipitant HDL 50µL 50µL 50µL

Rigoureusement le mélange a été agité, laissé 10 mn à température ambiante et centrifugé à 5000 trs/mn pendant 15mn. Le surnageant a été délicatement recueilli. Une série de quatre tubes a été disposée pour chaque échantillon.

(28)

Tableau III : Mode opératoire du dosage du HDL

Blanc réactif Etalon Sérum Dosage

Réactif de travail 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL Eau distillée 50µL

Etalon 50µL

Sérum 50µL

Echantillon 50µL

Le mélange homogénéisé a été laissé à température ambiante pendant 10mn. Aucune interférence majeure n’a été signalée et une linéarité jusqu’à 5g/L a été notée avec une limite de détection égale à 0.05g/L. Les valeurs normales s’étendent (sur du sérum comme du plasma) chez l’homme de 0,41à 0,58 g/L et chez la femme de 0,46 à 0,75g/L.

Dosage des triglycérides

Le dosage de triglycérides a été effectué par la méthode enzymatique à la lipoprotéine lipase/ Glycérol kinase/Glycérol -3-phospho oxydase/ Peroxydase. Le principe est le suivant : Les triglycérides sont hydrolysées en présence de la lipoprotéine lipase en glycérol et en acide gras. Le glycérol fixe un atome de phosphate en présence du glycérol kinase et d’ion magnésium pour donner du glycérol-3 –phosphate qui fixera l’oxygène en présence de glycérol-3-phosphate oxydase pour donner le peroxyde d’hydrogène qui suivant la réaction de TRINDER donnera un chromogène de couleur rose dont l’intensité est proportionnelle à la concentration en triglycéride.

La longueur d’onde : 546nm a été utilisée, l’eau distillée pour le zéro de l’appareil et la réaction s’est effectuée à 37°C.

(29)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 16 Tableau IV : Mode opératoire du dosage des triglycérides

Blanc réactif Etalon Sérum contrôle Dosage

Réactif de travail 1mL 1 Ml 1 mL 1 mL

Eau distillée 10 µL

Etalon 10 µL

Sérum contrôle 10 µL

Echantillon (sérum) 10 µL

Le mélange homogénéisé a été laissé à température ambiante pendant 10mn. Une linéarité jusqu’à 10 g/L a été notée avec une limite de détection égale à 0.80 g/L et une sensibilité de 0.025 g/L. Les valeurs normales s’étendent (sur du sérum comme du plasma) chez l’homme de 0,60 à 1,65 g/L et chez la femme de 0,40 à 1,40g/L.

Détermination du LDL cholestérol

Il est obtenu par calcul suivant la formule de Friedewald.

 Dosage à l’automate MINDRAY BS-200

Le dosage de CT, des TG et de HDLc s’est effectué suivant les méthodes utilisées au niveau du spectrophotomètre. Le LDLc a été dosé par la méthode directe.

2.3.2.3. Phase post-analytique

Les résultats ont été consignés dans le cahier de paillasse ; le matériel et les réactifs rangés.

2.3.3. Tests d’appréciation des dosages sur les deux équipements

Nous avons évalué la précision et l’exactitude du dosage de CT et des TG sur le spectrophotomètre SECOMAM Basic et l’automate MINDRAY BS-200.

2.3.3.1. Précision

La précision a été évaluée en utilisant les tests de répétabilité et de reproductibilité.

(30)

 Répétabilité

C’est la variabilité aléatoire des résultats d'une série de déterminations d'un même échantillon effectuée dans des conditions de temps et d’espace très proches (Métropol, 2000).

Une série de 10 dosages du CT et des TG a été effectuée le même jour, à intervalle régulier de 30 mn.

 Reproductibilité

C’est la variabilité aléatoire des résultats de plusieurs déterminations d'un même échantillon, effectuées de manière espacée dans le temps, donc dans des conditions qui peuvent être expérimentalement légèrement différentes (Métropol, 2000). Un dosage du CT et des TG a été effectué par jour sur une période de 10 jours à l’automate et au spectrophotomètre.

2.3.3.2. Exactitude

C’est l’expression de l’étroitesse de l’accord entre la valeur mesurée et la valeur exacte. C’est une notion essentiellement qualitative, mais peut aussi être exprimée quantitativement par le biais. Le biais est la différence entre la moyenne mesurée et la valeur exacte. Le biais entre les valeurs théoriques annoncées (X0) et les valeurs observées (X) a été calculé selon la formule ci-après : Biais d’inexactitude = 100 (X0 – m)/ X0.

L’exactitude des dosages a été évaluée en déterminant 10 fois les concentrations sériques de CT et des TG à l’aide du sérum de contrôle de titre (X₀). La valeur moyenne (m) des 10 dosages appelée encore moyenne des valeurs observées a été calculée.

Le coefficient de variation (CV) total traduit l’imprécision totale. Elle est déterminée selon la formule suivante : CV total = (CVintrasériel + CVintersériel)^1/2

Le biais et le CV total permettent d’apprécier l’erreur totale. Elle est déterminée comme suit : Erreur totale = biais+1,96 CV total

2.3.4. Analyse statistique

Les analyses statistiques ont été effectuées sur les logiciels Stata 2011 et Excel 2007.

(31)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 18 3. Résultats et discussion

3.1. Résultats

Les différents résultats proviennent des dosages effectués sur les 125 échantillons à l’automate BS-200 et au spectrophotomètre SECOMAM Basic.

Figure 1 : Répartition de la population étudiée suivant le sexe.

La figure 1 présente la population de la présente étude répartie suivant le sexe. Elle montre que les femmes représentent 63% et les hommes 37%.

Tableau V : Evaluation de la précision du dosage du CT et des TG effectué à l’automate MINDRAY BS-200 et au spectrophotomètre SECOMAM

Répétabilité (10) Reproductibilité (10)

Equipements et dosages

Moy.

(g/L)

E-type (g/L)

CV (%)

Moy.

(g/L)

E-type (g/L)

CV (%)

Normes NCEP %

Dosage de CT (Lyotrol N)

Spect 1,215 0,042 3,456 1,326 0,081 6,108

< 3

Auto 1,578 0,044 2,788 1,564 0,056 3,580

Dosage de TG (Lyotrol N)

Spect 1,251 0,040 3,197 1,057 0,049 4,635

< 5

Auto 1,216 0,033 2,713 1,249 0,036 2,882

Lyotrol = Sérum contrôle titré, Spect = Spectrophotomètre, Auto = Automate 37%

63%

Masculin Féminin

RESULTATS ET DISCUSSION

(32)

Le tableau V présente les résultats du test de précision effectué sur le dosage de CT et TG réalisé à l’automate et au spectrophotomètre. Les CV intra série et inter séries du dosage du CT au spectrophotomètre sont tous supérieurs aux normes NCEP (Warnick et coll, 2002) tandis qu’à l’automate, seul le CV inter séries est supérieur aux normes NCEP (3%). Les CV intra et inter séries du dosage des TG au spectrophotomètre et à l’automate sont tous inférieurs aux normes NCEP (Warnick et coll., 2002).

Tableau VI : Evaluation de l’exactitude des dosages à l’automate MINDRAY BS-200 et au spectrophotomètre SECOMAM.

Exactitude des dosages/équipements X₀

(g/L) X (g/L)

CV Intra série

(%)

CV Inter séries

(%)

CV Total

(%)

Biais (%)

Normes NCEP

(%)

Erreur Totale

(%)

Normes NCEP

(%) Dosage de CT

Spect 1,62 1,215 3,456 6,108 7,018 -25,0

< 3 38,75

< 9 Auto 1,62 1,578 2,788 3,580 4,537 -2,60 11,48

Dosage de TG

Spect 1,18 1,251 3,197 4,635 5,630 6,02

< 5 17,05

< 15

Auto 1,18 1,216 2,713 2,882 3,958 3,05 10,81

X0 = valeur cible du Lyotrol N, X = valeur moyenne de 10 dosages répétés du lyotrol N Le tableau VI présente les résultats de l’évaluation de l’exactitude des dosages effectués sur les deux équipements. Les biais obtenus pour le dosage du CT et des TG à l’automate sont tous inférieurs aux normes NCEP (Warnick et coll., 2002). Par contre, concernant le spectrophotomètre les biais obtenus sont tous supérieurs aux normes NCEP (Warnick et coll., (2002). Concernant l’erreur totale, seule l’erreur d’exactitude totale commise lors du dosage de TG à l’automate est inférieure aux normes NCEP (15%).

(33)

CT TG HDLc LDLc

g/ L

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5

Automate

Spectrophotomètre









Figure 2 : Comparaison des moyennes des paramètres lipidiques dosés au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200.

L’histogramme révèle une diminution significative du CT (+++p<0,0001), des TG (*p<0,05) et du HDLc (##p<0,002) au spectrophotomètre par rapport à l’automate contrairement au LDLc qui a augmenté significativement (++p<0,001) au spectrophotomètre.

(34)

Cholestérol total

CT par Automate (g/L)

0 1 2 3 4 5

CT par Spectrophotomètre (g/L)

0 1 2 3 4 5

n = 127 y = 0,765x + 0,097

r = 0,88

Triglycérides

TG par Automate (g/L)

0 1 2 3 4 5

TG par Spectrophotomètre (g/L)

0 1 2 3

4 n = 127

y = 0,796x + 0,065 r = 0,940

Figure 3 : Courbe de corrélation entre les valeurs de CT au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

Figure 4 : Courbe de corrélation entre les valeurs des TG au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

La figure 3 montre la courbe de corrélation entre les valeurs de CT au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200. Il y a une forte corrélation (r= 0,88 ; p<0,0001) entre les résultats de CT générés par les deux équipements.

La figure 4 montre la courbe de corrélation entre les valeurs des TG au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200. Il y a une bonne corrélation(r= 0,94 ; p<0,05) entre les résultats des TG générés par les deux équipements.

(35)

HDL cholestérol

HDLc par Automate (g/L)

0,0 0,5 1,0 1,5

HDLc par Spectrophotomètre (g/L)

0,0 0,5 1,0

1,5 n = 127

y = 0,742x + 0,048 r = 0,84

LDL cholestérol

LDLc par Automate (g/L)

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0

LDLc par Spectrophotomètre (g/L)

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5

3,0 n = 127

y = 1,310x - 0,069 r = 0,75

Figure 5 : Courbe de corrélation entre les valeurs de HDLc obtenues au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

Figure 6 : Courbe de corrélation entre les valeurs de LDLc obtenues au spectrophotomètre SECOMAM et à l’automate MINDRAY BS-200

La figure 5 montre la courbe de corrélation entre les valeurs de HDLc obtenues au spectrophotomètre et à l’automate BS-200. Il y a une forte corrélation (r = 0,84 ; p<0,002) entre les résultats de HDLc générés par les deux équipements.

La figure 6 montre la courbe de corrélation entre les valeurs de LDLc obtenues au spectrophotomètre et à l’automate BS-200.

Il y a une forte corrélation (r = 0,75 ; p<0,001) entre les résultats de LDLc générés par les deux équipements.

(36)

Tableau VII: Paramètres lipidiques dosés au spectromètre SECOMAM Basic et à l’automate MINDRAY BS-200 répartis suivant les valeurs normales et pathologiques.

CT HDLc LDLc TG

Norm

(%)

Patho (%)

Norm (%)

Patho (%)

Norm (%)

Patho (%)

Norm (%)

Patho (%) Automate

MINDRAY BS-200 87,2 12,8 80 20 92,8 7,2 92,8 7,2

Spectro SECOMAM 96 4 66,4 33,6 95,2 4,8 94,4 5,6 Spectro = Spectrophotomètre, Norm = Normales, Patho = Pathologiques

Le tableau VII présente les fréquences des valeurs des paramètres lipidiques dosés au spectrophotomètre et à l’automate, réparties suivant les valeurs normales et pathologiques.

De façon générale, une exclusion des valeurs pathologiques a été notée avec le spectrophotomètre.

L’usage efficient d’un automate en biochimie est subordonné à un volume subséquent d’échantillons à doser en même temps. Il arrive que le technicien fasse recours à la congélation au cas où le nombre d’échantillons n’est pas suffisant. Aussi, il est important de s’assurer que la congélation ne constitue pas un artéfact supplémentaire au dosage. C’est pourquoi nous avons estimé qu’il faille évaluer l’influence de la congélation sur le dosage à l’automate des paramètres du bilan lipidique classique. Nous avons utilisé pour ce faire les mêmes échantillons dosés directement (sans congélation préalable) et après congélation- décongélation sur le même appareil, l’automate MINDRAY BS-200.

(37)

CT TG HDLc LDLc

g/ L

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5

Direct Congel.





Figure 7 : Comparaison des moyennes des paramètres du bilan lipidique classique après congélation et après centrifugation.

L’histogramme montre une augmentation significative du CT (##p<0,002), du LDLc (*p<0,05) au dosage après congélation-décongélation des échantillons. Les taux de HDLc et des TG n’ont pas varié significativement (p>0,05) après congélation-décongélation.

(38)

Figure 8 : Evolution des variations des paramètres lipidiques en fonction du temps de congélation

La figure 8 présente les courbes d’évolution des variations des paramètres lipidiques en fonction du temps de congélation. On constate qu’il n’existe plus de différence entre les résultats obtenus 5 semaines environ après la congélation et les valeurs obtenues après centrifugation.

3.2. Discussion

Dans cette étude, nous avons comparé les valeurs des paramètres lipidiques obtenues à l’automate MINDRAY BS-200 et au spectrophotomètre SECOMAM Basic. L’influence de la congélation sur lesdits paramètres a été aussi évaluée.

Le dosage du CT et des TG à l’automate BS-200 MINDRAY a fourni une précision satisfaisante et une bonne exactitude. Les CV intra et inter séries étaient tous inférieurs aux normes NCEP (CT : 3% et TG : 5%) (Warnick et coll., 2002). Le dosage du CT au spectrophotomètre SECOMAM Basic a fourni une précision peu satisfaisante et une

-0,400 -0,300 -0,200 -0,100 0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600

MOINS DE 1

1 2 3 4 5 6 7

Variations Δ

Temps en semaines

Δ CT Δ HDLc Δ LDLc Δ TG

(39)

Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 26 exactitude quasi absente. Les CV intra et inter séries sont tous supérieurs aux normes NCEP

(Warnick et coll., 2002). Par contre, le dosage des TG au spectrophotomètre a fourni une précision satisfaisante et une exactitude assez bonne. La précision notée au niveau de l’automate pour les deux dosages est meilleure que celle notée au spectrophotomètre. Les CV intra et inter séries étaient tous relativement plus bas. Les dosages effectués à l’automate étaient plus exacts que ceux effectués au spectrophotomètre. Cette différence pourrait s’expliquer par le fait que toute procédure analytique manuelle intègre des erreurs liées à la manipulation et dans cette étude, surtout à la vétusté de l’appareil et aux conditions pas trop idéales de son utilisation. Nos résultats suggèrent que la performance des dosages par les deux équipements est différente.

Les dosages des paramètres lipidiques effectués sur les deux équipements sont globale0ment satisfaisants. Les valeurs des TG (r = 0,94) obtenues à partir des deux équipements sont bien corrélées et celles des CT (r = 0,88), HDLc (r = 0,84) sont fortement corrélées. Les valeurs de LDLc obtenues par calcul à partir des valeurs de CT, TG, et HDLc générées au spectrophotomètre SECOMAM Basic sont significativement supérieures à celles obtenues à l’automate (dosage direct). Ces valeurs sont fortement corrélées (r = 0,75). Les disparités observées prendraient leurs sources dans le cumule de l’imprécision analytique au spectrophotomètre SECOMAM Basic observée sur chacun des trois paramètres. Nos résultats ne s’accordent pas aux travaux d’Edjeme-Ake et coll., (2010). Dans leur étude, aucune différence significative n’a été observée entre les concentrations moyennes sériques obtenues par les deux méthodes ; LDLc Friedwald 0,43±0,14 mmol/L (1,12±0,37g/L) pour des valeurs des TG inférieures à 1,35mmol/L (3,5g/L) versus 0,45± 0,15mmol/L (1,16±0,39g/L) LDLc Directe. Par contre, nos résultats concordent avec les résultats de Sahu et coll. (2005) qui ont montré une différence significative entre la méthode directe et la formule de Friedewald pour des valeurs de triglycérides inférieures à 0,77 mmol/L (2 g/L) et de cholestérol total supérieures à 0,58 mmol/L (1,5 g/L). Ces différences pourraient s’expliquer par la taille de l’échantillon (n = 893 versus 112) plus limitée dans notre étude, mais aussi par le fait que les équipements utilisés ne soient pas les mêmes.

Les tentatives de recherche d’un coefficient de correction afin d’apporter une correction aux valeurs générées par le spectrophotomètre ont été vaines. Cela peut s’expliquer

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par le caractère arbitraire de la différence entre les résultats générés sur les deux équipements et surtout de l’absence d’une méthode de référence, dans notre étude.

Les valeurs des paramètres lipidiques obtenues après congélation-décongélation sont toutes supérieures à celles obtenues après centrifugation (avant congélation). L’augmentation du CT (## p< 0,002) et du LDLc (* p< 0,05) est significative. Par contre, l’augmentation du HDLc et des TG n’est pas significative. L’influence de la congélation par semaine ne saurait être précisée en raison des variations aléatoires des différences enregistrées entre les deux dosages. Néanmoins, les valeurs des dosages réalisés après centrifugation sont relativement retrouvées après 05 semaines de congélation.

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Réalisé par Armel G. AKPAO & Ruth I. N. GBAGUIDI 28 Conclusion

La présente étude réalisée à l’Hôpital de Zone de Mènontin visait à comparer les valeurs des paramètres du bilan lipidique classique générées par deux équipements de dosage que sont le spectrophotomètre SECOMAM Basic et l’automate MINDRAY BS-200 et déterminer si nécessaire un coefficient de correction afin d’améliorer les résultats générés par l’appareil le moins efficace. Au terme de ce travail, une baisse statistiquement significative des valeurs obtenues au spectrophotomètre SECOMAM a été notée. Les dosages effectués à l’automate sont plus précis et plus exacts que ceux réalisés au spectrophotomètre. Les résultats de ces dosages ont été globalement satisfaisants. Par ailleurs, l’influence de la congélation s’est traduite par la hausse des valeurs, significative pour les CT et LDLc et non significative pour le HDLc et les TG.

Une étude mérite d’être faite sur l’influence de la congélation sur les paramètres lipidiques afin de trouver les meilleures conditions de conservation des échantillons ayant un bilan lipidique.

CONCLUSION & SUGGESTIONS

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Suggestions

Au regard des résultats obtenus après ce travail, des suggestions peuvent être émises dans le but d’améliorer les performances des structures de santé.

 A l’endroit des autorités du ministère en charge de la santé publique, Nous demandons,

- d’équiper convenablement les laboratoires en automates en particulier des automates MINDRAY BS-200 pour les dosages biochimiques,

- de doter chaque structure de santé d’un service de maintenance biomédicale efficace, - d’effectuer des tournées régulières et répétitives dans les structures afin de recycler les

équipements vétustes,

- d’évaluer périodiquement les valeurs des paramètres biologiques au plan national, - d’organiser des séminaires de formation pour améliorer la compétence des

biotechnologistes.

 A l’endroit des biotechnologistes de laboratoire

- respecter les mesures de maintenance des équipements disponibles et maitriser surtout leur principe de fonctionnement puis afficher les procédures de manipulation de ces équipements,

- faire régulièrement des contrôles de qualité interne et externe afin de s’assurer du bon état de fonctionnement des appareils,

- s’informer et se former quotidiennement afin d’être en phase avec les nouvelles technologies qui s’introduisent dans le domaine de la santé,

- faire des études sur les paramètres congelables afin de limiter au maximum l’influence de la congélation sur les paramètres à évaluer, en cas d’examens différés.

 A l’endroit des Biotechnologistes de l’HZM

- faire une maintenance préventive et la décontamination des appareils.