TP2 : la mise en évidence de la spécificité des anticorps Le test d’Ouchterlony.
Problème : On souhaite savoir quels anticorps ont été les produits par un individu. On prélève sont sérum (liquide du sang + substances dissoutes, dont les anticorps). On se propose de tester ce sérum face à plusieurs antigènes.
Principe :
Les protéines en général et les immunoglobulines ou les substances antigéniques en particulier, possèdent la propriété de diffuser, (dans toutes les directions) dans la gélose.
Il suffit donc de percer des puits disposés de façon équidistante dans la gélose contenue dans une boîte de Pétri, d’y déposer les substances à tester pour que 24 à 48 h plus tard, les substances se soient rencontrées.
S’il s’avère qu’un sérum contient des anticorps (immunoglobulines) spécifiques d’une des substances antigéniques présentes, il y aura alors formation, à égale distance des deux puits concernés, d’un précipité en forme d’arc correspondant au complexe immun.
Ce test peut donc permettre de vérifier la spécificité d’un anticorps.
1. Proposer une démarche :
Proposez une démarche, utilisant le test d’immunodiffusion afin de résoudre le problème posé.
Complétez le schéma 1 et sa légende.
Quels seront les résultats attendus ?
APPELEZ LE PROFESSEUR 2. Réaliser la manipulation :
En suivant le protocole proposé :
- Fabriquez la gélose et coulez-la dans vos boîtes (2) - Percez les puits en utilisant le gabarit.
- Remplissez les puits en suivant votre proposition validée au 1) (ou corrigée par le professeur)
3. Raisonner :
En utilisant les conventions proposées, schématisez à l’échelle moléculaire
- Ce qui se passe entre 2 puits où se met en place un arc de précipitation. (Schéma 2a)
- Ce qui se passe entre 2 puits où ne se met pas en place un arc de précipitation. (Schéma 2b) 4. Observer les résultats et conclure.
Observez vos résultats. Complétez le schéma 1 en plaçant votre arc de précipitation.
Concluez : quels sont les anticorps présents dans le sérum testé ?
Schéma 1 - Dessinez les puits en prenant modèle sur le gabarit.
- Notez la répartition des produits dans les puits
Justifiez votre proposition et donnez les résultats attendus :
Schéma 2a : Schéma 2b :
Légendes : Anticorps :
Conclusion :
