TP : la recherche d’anticorps spécifique Le test d’Ouchterlony.
Problème : On souhaite savoir si une femme enceinte est immunisée contre certaines maladies, dangereuse pour le fœtus. On prélève son sérum (liquide du sang + substances dissoutes, dont les anticorps).
Principe :
Les protéines en général et les immunoglobulines ou les substances antigéniques en particulier, possèdent la propriété de diffuser, (dans toutes les directions) dans la gélose.
Il suffit donc de percer des puits disposés de façon équidistante dans la gélose contenue dans une boîte de Pétri, d’y déposer les substances à tester pour que 24 à 48 h plus tard, les substances se soient rencontrées.
S’il s’avère qu’un sérum contient des anticorps (immunoglobulines) spécifiques d’une des substances antigéniques présentes, il y aura alors formation, à égale distance des deux puits concernés, d’un précipité en forme d’arc correspondant au complexe immun.
Ce test peut donc permettre de vérifier la présence d’un anticorps spécifique 1. Proposer une démarche :
Proposez une démarche, utilisant le test d’immunodiffusion afin de résoudre le problème posé.
Complétez le schéma 1 et sa légende.
APPELEZ LE PROFESSEUR 2. Réaliser la manipulation :
En suivant le protocole proposé :
- Percez les puits en utilisant le gabarit dans la gélose fournie
- Remplissez les puits en suivant votre proposition validée au 1) (ou corrigée par le professeur)
3. Raisonner :
En utilisant des conventions pertinentes, schématisez à l’échelle moléculaire
- Ce qui se passe entre 2 puits où se met en place un arc de précipitation. (Schéma 2a) - Ce qui se passe entre 2 puits où ne se met pas en place un arc de précipitation. (Schéma 2b) 4. Observer les résultats et conclure.
Observez vos résultats. Complétez le schéma 1 en plaçant votre arc de précipitation.
Concluez : quels sont les anticorps présents dans le sérum testé ?
Schéma 1 - Dessinez les puits en prenant modèle sur le
gabarit.
- Notez la répartition des produits dans les puits
Justifiez votre proposition et donnez les résultats attendus :
Schéma 2a : Schéma 2b :
Légendes : Anticorps :
Conclusion :