• Aucun résultat trouvé

A P A 2 6 0 0 D é t e r m i n a t i o n d e s c o n c e n t r a t i o n s d e l a c t a t e e t d e g l u c o s e p l a s m a t i q u e

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2022

Partager "A P A 2 6 0 0 D é t e r m i n a t i o n d e s c o n c e n t r a t i o n s d e l a c t a t e e t d e g l u c o s e p l a s m a t i q u e"

Copied!
3
0
0

Texte intégral

(1)

APA 2600

Détermination des concentrations de lactate et de glucose plasmatique

Objectifs:

Familiariser les étudiants:

1. aux analyses enzymatiques de métabolites circulants.

2. à la prise d'échantillons sanguins et aux méthodes de préparation des spécimens à analyser

Théorie:

Voir les notes de classe et la section sommaire qui se trouve dans les feuilles du protocol d'analyse SIGMA (une copie est disponible à mon bureau).

Matériels et méthodes:

• Kits Sigma: Glucose (glucose HK 20; #16-20) Lactate (L(+)lactate; #826-B)

• Eau déionisé (préférablement) ou distillée

• Cuvettes de 1 ml

• Pipettes: 100-1000 µl avec embout bleu 10-20 µl avec embout jaune

• Seringue Hamilton de 25 µl

• Tubes capillaires héparinés

• Plaque de plasticine

• Tampons d'alcool

• Lacettes et auto-injecteur

• Micro-centrifuge

• Spectrophotomètre

• Gants en latex

• Contenant pour déchets médicaux

• Contenant pour objets coupants et verres brisés Préparation des échantillons de plasma:

1. Préparer quatre tubes capillaires héparinés et une plaque de plasticine.

(2)

2. Nettoyer le bout du doigt du sujet ainsi que l'extrémité de l'auto-injecteur avec un tampon d'alcool.

3. Placer l'auto-injecteur sur le bout du doigt et maintener une légère pression. Appuyer sur le bouton d'éclancheur.

4. Faite saigner et remplisser les quatre tubes capillaires en maintenant un légère inclinaison puis bloquer adéquatement une extrémité du tube.

5. Disposer les tubes capillaires dans la micro-centrifuge de façon à ce qu'ils soient balancés dans le caroussel et que l'extrémité bloquée soit vers l'extérieur.

6. Règler l'appareil pour 5 minutes.

7. Le volume de plasma nécessaire peut ensuire être soustiré en utilisant un seringue Hamilton de 25 µl.

Préparation des cuvettes:

1. Ne touchez jamais les côtés de la cuvette à travers lesquels la lumière passera. Si par mégarde vous les salissez, nettoyer leurs surfaces avec un tissu en papier non-abrasif.

2. Identifiez à l'encre permanente la partie supérieure de la cuvette

3. A l'aide de la seringue Hamilton 25 µl ou de la pipette de 10-20 µl, déposer le volume demandé d'échantillon dans la cuvette.

4. Vous devriez avoir six cuvettes pour le glucose et six pour le lactate. De plus, préparer une cuvette contenant uniquement de l'eau distillé.

Glucose Lactate

1) 10 µl d'eau dist. 1) 20 µl d'eau dist.

2) 10 µl de solution de glucose à mg/dl 2) 20 µl de solution de lactate à mg/dl 3) 10 µl de solution de glucose à mg/dl 3) 20 µl de solution de lactate à mg/dl 4) 10 µl de solution de glucose à mg/dl 4) 20 µl de solution de lactate à mg/dl 5) 10 µl de plasma #1 5) 20 µl de plasma #1

6) 10 µl de plasma #2 6) 20 µl de plasma #2

5. Ajouter le volume de solution réactive requis (de façon à complèter 1 ml) dans toutes les cuvettes pour la série du glucose puis celle du lactate.

6. Attender 20 minutes pour que la réaction du glucose se produise et 30 minutes pour celle du lactate.

(3)

7. Faites les lectures pour la série entière de glucose et de lactate dans un délai assez court afin que chacune des cuvettes soient soumises à un lapse de temps de réaction similaire.

Lecture sur le spectrophotomètre:

1. Régler la lecture à "ABS" en appuyant sur le bouton "Mode"

2. Placer la cuvette contenant uniquement de l'eau distillé dans la première cellule du caroussel, fermer la porte du spectrophotomètre et appuyer sur le bouton "zero reference" jusqu'à ce que l'absorbance tombe à zéro. Retirer la cuvette d'eau distillé.

3. Placer ensuite les 6 cuvettes pour la série du glucose ou du lactate dans les différentes cellules du caroussel en vous assurant qu'elles soient orientées de façon à ce que la lumière émise par l'appareil traverse le côté transparent de la cuvette. Associer le numéro de la cuvette au numéro de la cellule du caroussel.

4. Faire la lecture des échantillons. Appuyer sur "CELL" pour passer d'une cellule à l'autre.

Rapport de laboratoire:

1. Faites deux courbes de calibration en utilisant les absorbances des standards de glucose et de lactate. Absorbance en fonction de la concentration.

2. Calculer la concentration de glucose et de lactate plasmatique en utilisant:

a) les équations de calibration b) la relation avec un seul standard

c) l'équation stochiométrique utilisant le NAD+ comme indice d'absorptivité.

3. Présenter toutes les concentrations calculées en mM et mg/dl.

Références

Documents relatifs

Au printemps 2008, des filets maillants ont donc été installés dans le secteur de ces zones de dépositions, afin d’effectuer une caractérisation des géniteurs fréquentant

Par la suite, plusieurs sous-classes des langages ap@riodiques ont @t@ 6tudi@es, notamment par Brzozowski, Simon, Fioh, SchOtzenberger, Eilenberg, Me Naughton,

Lorsque deux droites sont perpendiculaires à une même troisième alors elles sont parallèles donc (AB) et (FE) sont parallèles... 2) Dans le triangle OFE, (AB) et (FE) sont parallèles

Existence de sections hyperplanes assez g~n~rales 3.. Construction des bons

Plus on r6fl6- chira sur leg propositions que je dSmontre plus loin, mieux on comprendra que ce probldme pr6sente des difficult6s inouies, quc l'insuccds des

Nous 6nonr ~t la fin du second paragraphe, le r6sultat d'approximation dans le eas particulier des points minimaux, et, dans le troisi6me paragraphe, nous l'appli- quons pour

Supposons que la condition aux limites N satisfait au pr~acipe du maximum positif au bord (cf.. d6signe des normes 6quivalentes)... FUJIWARA, D., On some

N o u s nous placerons dans un espace vectoriel rrel, 6ventuellement muni d'une topologie vectorielle (ce qui sera prrcis6 dans chaque 6noncr) et adopterons les