ETUDE COMPARATIVE DE L’EFFICACITE DE DEUX SOLUTIONS HYDRO-ALCOOLIQUES VENDUES DANS LES OFFICINES DE PHARMACIE ET CELLE UTILISEE A L’HOPITAL DE ZONE D’ABOMEY-CALAVI SÔ-AVA

(1)

ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE ********************

UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI

********************

ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)

********************

DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE

********************

OPTION : ANALYSES BIOMEDICALES (ABM)

********************

RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION POUR L’OBTENTION DU DIPLOME DE LICENCE PROFESSIONNELLE

PRESENTE ET SOUTENUE PAR : Aristhophanie Husserl MEKPO SOUS LA SUPERVISION DE :

Membres du jury

Président : Pr BANKOLE Honoré Examinateur : Dr KOUDOKPON Hornel

Superviseur : Dr DOUGNON Victorien

Année scolaire : 2017-2018 11^ème Promotion Tutrice

Madame Marthe GOUNADON Biologiste médicale à l’Hôpital de zone

d’Abomey-Calavi Sô-ava

Superviseur

Dr. Victorien DOUGNON, PhD Maître- Assistant en

Microbiologie à l’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi

ETUDE COMPARATIVE DE L’EFFICACITE DE DEUX SOLUTIONS HYDRO-ALCOOLIQUES VENDUES DANS LES OFFICINES DE PHARMACIE ET CELLE UTILISEE A L’HOPITAL

DE ZONE D’ABOMEY-CALAVI SÔ-AVA

(2)

REPUBLIQUE DU BENIN

**********

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

**********

UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI

**********

ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)

**********

DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

**********

DIRECTEUR : Pr Guy Alain ALITONOU

DIRECTEUR ADJOINT : Dr Xavier FIFATIN (Maître de Conférences)

CHEF DE DEPARTEMENT : Dr Eugénie ANAGO (Maître Conférences)

(3)

ii Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

N° Noms et Prénoms Matières enseignées 1 ABLEY Sylvestre Déontologie médicale 2 AGBANGLA Clément Génétique moléculaire

3 AGOSSOU Gilles Législation et droit du travail

4 AHOYO Théodora Angèle Microbiologie/ Santé Publique et Hygiène Hospitalière

5 AKOWANOU Christian Physique

6 AKPOVI D. Casimir Biologie cellulaire/ Physiologie humaine/

Biochimie 7 ALITONOU Alain Guy Chimie

8 ANAGO Eugénie Biochimie structurale / Biochimie clinique 9 ANAGONOU Sylvère Education physique et sportive

10 ATCHADE Pascal Parasitologie / Mycologie/ Entomologie médicale

11 BANKOLE Honoré Bactériologie appliquée 12 DESSOUASSI Noel Biophysique des solutions 13 DOSSEVI Lordson Techniques instrumentales

14 DOSSOU Cyriaque Techniques d’Expression et Méthodes de communication

15 DOUGNON T. Victorien Microbiologie/ Méthodologie de la Recherche/ Informatique médicale 16 HOUNNON Hyppolite Mathématiques

17 HOUNSOSSOU Hubert Biostatistique 18 KOFFI Aristide Anglais

LISTE DES ENSEIGNANTS PERMANENTS

ET VACATAIRES

(4)

iii Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

19 KOUDANDE Marlène Cytologie Sanguine/ Introduction à l’hématologie

20 LOKOSSOU Gatien Immunologie 21 LOZES Evelyne Immunologie 22 Père MASLOKONON

Vincent

Histologie générale

23 SECLONDE Hospice Immuno- hématologie et Transfusion sanguine

24 SEGBO Julien Biochimie clinique/ Biologie moléculaire 25 SENOU Maximin Histologie

26 SOEDE Casimir Anglais technique 27 TOHOYESSOU Zoé Soins infirmiers 28 TOPANOU Adolphe Hématologie

29 YOVO Paulin Pharmacologie/ Toxicologie

(5)

iv Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

Je dédie ce mémoire à mon feu père Antoine MEKPO.

Repose en paix.

DEDICACE

(6)

v Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

Je voudrais témoigner ma gratitude à tous ceux qui de près ou de loin ont participé à l’élaboration de cette œuvre. En occurrence :

 A Dieu Tout Puissant, qui m’a donné la vie et la parfaite santé jusqu’à ce jour.

 A ma mère Latifatou BELLO, pour ses conseils et ses nombreux sacrifices à mon endroit.

 A Monsieur Désiré GOUNSE, qui a toujours répondu apte et présent pour toute aide. Je ne saurai vous exprimez ma reconnaissance pour tous ses sacrifices consentis à mon égard depuis tant d’années.

 A mon superviseur Docteur Victorien T. DOUGNON, votre rigueur scientifique et votre esprit de synthèse ont été précieux dans l’élaboration de ce travail. Qu’Allah vous comble de ses grâces.

 A Docteur Jerrold AGBANKPE, pour l’intérêt et l’attention particulière que vous nous avez témoignée tout au long de ce travail, infiniment merci.

 A ma tutrice, Madame Marthe GOUNADON pour votre soutien indéfectible. Recevez ce travail comme le fruit de vos efforts et de vos encouragements.

 A Madame Alidah ANIAMBOSSOU, pour vos multiples conseils et idées dans le but du succès de ce travail.

 A toute L’équipe de l’U.R.M.A.Pha, pour le savoir transmis, ce travail est le fruit de tant d’efforts. Qu’Allah vous bénisse.

 A Monsieur Jean-Eude DEGBELO, le chef laboratoire, pour tout le soutien et les idées apportées.

REMERCIEMENTS

(7)

vi Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

 A tout le Personnel du laboratoire d’Abomey-Calavi Sô-ava, pour la collaboration et le savoir transmis durant ce temps que j’ai passé avec vous.

 A mes amies Ida CODJIA, Gloria GOYITO, Priscille HODONOU, Marie HIDJO, Jolidon CLEDJO, Géraldine AKPACA merci pour votre attention au quotidien.

 A tous mes Camarades de la 11^ème promotion de la Licence Professionnelle en Analyses Biomédicales et tous ceux qui m’ont aidée de près ou de loin dans la réalisation de ce travail, merci pour tout.

(8)

vii Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

 À SON EXCELLENCE MONSIEUR LE PRESIDENT DU JURY C’est un grand honneur pour nous que vous acceptiez présider le Jury de soutenance de ce rapport de fin de formation. Par vos observations, nous espérons améliorer ce travail.

 AUX HONORABLES MEMBRES DU JURY

Pour l’honneur que vous nous faites en acceptant d’apprécier ce travail et d’apporter vos critiques. Nous vous prions de recevoir notre profonde gratitude.

HOMMAGES

(9)

viii Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

°C

%

: :

Degré Celsius Pourcentage

ATCC : American Type Culture Collection CLED : Cystine-Lactose-Electrolyte-Déficient

H : Heure

IAS MH OMS

: : :

Infections Associées aux Soins Mueller Hinton

Organisation Mondiale de la Santé SHA

µL

U.R.M.A.Pha : : :

Solution Hydro-Alcoolique Micro Litre

Unité de Recherche en Microbiologie Appliquée et Pharmacologie des Substances Naturelles

LISTE DES ABREVIATIONS ET

SIGLES

(10)

ix Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

Tableau I: Composition des solutions hydro-alcooliques testées………12

LISTE DES TABLEAUX

(11)

x Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

Figure 1 : Technique de friction des mains avec une solution hydro-

alcoolique………... 05

Figure 2 : Réalisation de l’écouvillonnage des mains avant puis après lavage

plus friction……….. 15

Figure 3 : Réalisation de l’écouvillonnage des mains après lavage puis après

friction………... 16

Figure 4 : Technique de puits dans la gélose ……….. 17 Figure 5 : Effet antibactérien de la solution hydro-alcoolique A1 sur les mains

des agents de soins………... 19

Figure 5.1 : Variation quantitative des germes avant puis après lavage plus

friction avec la solution hydro-alcoolique A1………...…. 19 Figure 5.2 : Variation quantitative des germes après lavage puis après friction

avec la solution hydro-alcoolique A1……….. 19 Figure 6 : Effet antibactérien de la solution hydro-alcoolique A2 sur les mains

des agents de soins……….... 21

friction avec la solution hydro-alcoolique A2……….... 21 Figure 6.2 : Variation quantitative des germes après lavage puis après friction

avec la solution hydro-alcoolique A2………. 21 Figure 7 : Effet antibactérien de la solution hydro-alcoolique A3 sur les mains

des agents de soins………... 22

friction avec la solution hydro-alcoolique A3………. 22 Figure 7.2 : Variation quantitative des germes après lavage puis après friction

avec la solution hydro-alcoolique A3………. 22

LISTE DES FIGURES

(12)

xi Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

Figure 8 : Effet antibactérien des solutions hydro-alcooliques sur la souche de

référence S. aureus………. 23

Figure 9 : Effet antibactérien des solutions hydro-alcooliques sur la souche de

référence E. coli………. 24

(13)

xii Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

L’hygiène des mains est considérée comme la mesure de prévention la plus simple et la plus efficace dans la prévention des infections associées aux soins. Ainsi, plusieurs solutions hydro-alcooliques ont été conçues et commercialisées pour optimiser l’observance de l’hygiène des mains. Fort malheureusement, très peu d’étude se sont intéressées à l’efficacité de ces solutions. La présente étude vise à évaluer l’efficacité de trois solutions hydro- alcooliques : la solution hydro-alcoolique A1 utilisée à l’hôpital de zone d’Abomey-Calavi Sô-ava, A2 acquise en pharmacie et A3 gel publicitaire distribué par des exhibiteurs au cours d’une conférence. La sensibilité des souches de référence Staphylococcus aureus ATCC 25923 et Escherichia coli ATCC 25922 a été évaluée pour chacune de ces solutions. Les capacités des solutions à réduire les germes présents sur les mains de 50 agents de santé ont été également évaluées.

Les résultats de notre étude montrent que les solutions hydro-alcooliques A1 et A2 se sont révélées actives à Staphylococcus aureus et Escherichia coli avec des diamètres d’inhibition respectifs de 17,66 et 8 mm pour A1 et de 8,33 et 7,33 mm pour A2. Par contre, la solution hydro-alcoolique A3 s’est révélée inactive sur les deux souches de références. D’après les analyses statistiques, aucune des trois solutions ne présentent une activité réductrice significative des germes présents sur les mains des soignants. Cela pourrait s’expliquer par l’évaporation de l’alcool contenu dans ces solutions. Il est donc nécessaire de bien conserver les solutions hydro-alcooliques et de maitriser la technique de la friction hydro-alcoolique des mains.

Mots clés : Solution Hydro-alcoolique, hygiène des mains, infections associées aux soins.

RESUME

(14)

xiii Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

Hand hygiene is considered to be the simplest and most effective prevention measure in the prevention of healthcare-associated infections. Thus, several hydro-alcoholic solutions have been designed and marketed to optimize the observance of hand hygiene. Unfortunately, very few studies have examined the effectiveness of these solutions. The present study aims at evaluating the effectiveness of three hydro-alcoholic solutions: the A1 hydro-alcoholic solution used at the Abomey-Calavi Sô-ava zone hospital, A2 acquired in pharmacy and A3 advertising gel distributed by exhibitors during a conference. The sensitivity of the reference strains Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 25922 was evaluated for each of these solutions. The capabilities of the solutions to reduce the germs present on the hands of 50 health care workers were also evaluated.

The results of our study show that A1 and A2 hydro-alcoholic solutions have been shown to be active against Staphylococcus aureus and Escherichia coli with respective inhibition diameters of 17.66 and 8 mm for A1 and 8.33 and 7.33 mm for A2.On the other hand, the A3 hydro-alcoholic solution proved to be inactive on the two reference strains. According to the statistical analyzes, none of the three solutions show a significant reducing activity of the germs present on the hands of the caregivers. This could be explained by the evaporation of the alcohol contained in these solutions. It is therefore necessary to preserve the hydro-alcoholic solutions and to master the technique of the hydro-alcoholic friction of the hands.

Key words : hydroalcoholic solution, hand hygiene, care associated infections.

ABSTRACT

(15)

xiv Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

INTRODUCTION………. 01

CHAPITRE 1 : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE………... 03

1. Généralités……… 03

2. Solutions hydro-alcoolique.……… 06

CHAPITRE 2 : MATERIEL ET METHODES……….. 09

1. Cadre d’étude……….. 09

2. Matériel……… 10

3. Méthodes……….. 13

CHAPITRE 3 : RESULTATS……..……….. 18

CHAPITRE 4 : COMMENTAIRE………..…… 26

CONCLUSION……….... 28

SOMMAIRE

(16)

1 Réalisé par Aristhophanie Husserl MEKPO

Les infections Associées aux Soins (IAS) constituent un problème majeur de santé publique car elles sont toujours associées à une morbidité et un coût additionnel important.

En Afrique, la prévalence des infections associées aux soins varie entre 2,5% et 14,8% (BagheriNejad et al., 2011). Au plan national, dans 87% des hôpitaux inclus dans une enquête, elles étaient de 19,1% (Ahoyo et al., 2014).

Ces infections sont pour la plupart transmises par les mains qui constituent le véhicule le plus fréquent de transmission des germes au cours des soins. Ainsi, parmi les mesures destinées à prévenir ces infections, l’hygiène des mains demeure le meilleur moyen de prévention des maladies acquises à l’Hôpital (Oké et al., 2013).

L’hygiène des mains a deux composantes principales : le lavage simple des mains et la friction hydro-alcoolique. Elle était assurée, jusqu’à la fin des années 1990, par des lavages à l’eau et au savon. Ces lavages présentaient un caractère plus ou moins invasif à cause du temps et du matériel nécessaire pour sa réalisation. Ces contraintes rendaient difficile l’observance de l’hygiène manuelle par les soignants. Elle était très faible, dépassant rarement 50% en soins généraux (Eggimann et Pittet, 2003).

Ainsi, la friction hydro-alcoolique des mains vient en complémentarité au lavage des mains pour réduire les risques de transmissions croisées des agents infectieux et de la flore transitoire des mains. Elle est surtout proposée afin d’améliorer l’accessibilité et la rapidité des techniques d’hygiène des mains.

INTRODUCTION

(17)

Sur le plan expérimental et en pratique clinique réelle, l’antisepsie des mains par friction avec une solution hydro-alcoolique montre une efficacité supérieure au lavage des mains conventionnel qu’il soit réalisé avec un savon doux ou un savon antiseptique (Rotter MI, 1984). Malgré que des normes précises aient été définies par l’OMS pour la formulation des solutions hydro- alcooliques, on observe une divergence dans la formulation chimique de la panoplie des solutions hydro-alcooliques disponible sur le marché. Très peu d’études se sont intéressées à la qualité de ces solutions.

La présente étude vise donc à évaluer l’efficacité de trois solutions hydro- alcooliques. Spécifiquement, il s’agit de :

- évaluer le pouvoir de réduction bactérienne des trois solutions hydro- alcooliques sur les mains du personnel soignant,

- tester l’efficacité de ces solutions hydro-alcooliques sur deux souches de référence afin de réaliser une étude comparative des résultats obtenus avec les trois solutions hydro-alcooliques.

(18)

1. GENERALITES

1.1. Définition de l’hygiène des mains

Selon l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS), l’hygiène des mains reste la base de la prévention de la transmission croisée d’agents infectieux. Elle permet de protéger le professionnel de santé et son environnement de travail.

Elle ne peut être efficace que si certains impératifs sont respectés (Société Française d’Hygiène Hospitalière, 2002 ; Eggimann et Pittet, 2003). Elle demeure la première mesure essentielle de prévention des infections associées aux soins (OMS, 2005) et son importance dans la prévention des infections est établie depuis plus d’un siècle (Bengaly, 2011).

1.2. Différents types d’hygiène des mains

Il existe trois types d’hygiène des mains : le lavage simple des mains, la friction hydro-alcoolique et le lavage chirurgical des mains.

1.2.1. Lavage simple des mains

Ce type de lavage est préconisé pour l’hygiène des mains lorsque les mains sont visiblement souillées. Selon l’utilisation, il existe deux techniques de lavage des mains. La première est le lavage simple des mains réalisé avec un savon doux.

Chapitre 1 :

SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

(19)

Il est utilisé pour les gestes de la vie courante, avant la prise du travail, après manipulation de tubes ou flacons et après enregistrement informatique des analyses. La deuxième technique est le lavage hygiénique ou antiseptique des mains. Il se réalise à l’aide d’une solution moussante antiseptique (Chabot- Daval, 2010).

1.2.2. Friction hydro-alcoolique

Il est montré que l’efficacité de la friction hydro-alcoolique requiert l’absence de souillures organiques qui inactiveraient leur principe actif (Boyce et al., 2002). Elle doit être réalisée sur des mains macroscopiquement propres et sèches (WHO, 2010).

Les principes actifs de ces solutions hydro-alcooliques ont une excellente activité in vitro sur les bactéries, les champignons et les virus (Agence de la Santé Publique du Canada, 2012). Elle se réalise comme le présente la figure 1.

(20)

Figure 1:Technique de friction des mains avec une solution hydro-alcoolique (HYGIENES, 2017)

1.2.3. Lavage chirurgical des mains

Ce type de lavage fait recours aux deux précédents. Il peut s’effectuer par lavage au savon antimicrobien et à l’eau ou par friction hydro-alcoolique (Organisation Mondiale de la Santé, 2010).

(21)

Dans ce dernier cas de figure, un lavage simple des mains au savon ordinaire précède la préparation des mains à la chirurgie par friction hydro- alcoolique.

La technique de friction hydro-alcoolique pour la préparation des mains à la chirurgie est appliquée sur des mains parfaitement propres et sèches.

Le lavage chirurgical des mains est réalisé suivant la technique décrite par Chabot-Daval en 2010.

2. SOLUTION HYDRO-ALCOOLIQUE 2.1. Définition

Les solutions hydro-alcooliques sont des solutions antiseptiques permettant des gestes d’hygiène des mains sans eau (Agence de la santé publique du Canada, 2012). Pour être efficace, ces produits doivent être utilisés dans de bonnes conditions et en respectant une technique d’application éprouvée. C’est pourquoi lorsque les solutions hydro-alcooliques sont mises en place dans un établissement de soins, le personnel mais aussi les patients et leurs visiteurs doivent être formés à leur utilisation. Cela permettrait de réduire le taux d’infections associées aux soins (Agence de la Santé Publique du Canada, 2012).

2.2. Composition type des solutions hydro-alcooliques 2.2.1. Principe actif

Le principe actif des solutions hydro-alcooliques est un alcool comme l’indique son nom. L’efficacité dépend également de la concentration en alcool de la solution. Trois alcools peuvent entrer dans leur composition: l’éthanol 77%, le propanol 42% et l’isopropanol 60% (Rotter, 1984). Habituellement, une solution hydro-alcoolique contient un ou deux types d’alcool (Chabot-Daval, 2010).

(22)

Certains comportent également un autre antiseptique de façon à obtenir une synergie d’action et un effet rémanent plus important (Chabot-Daval, 2010;

Agence de la Santé Publique du Canada, 2012).

2.2.2. Emollients

La présence d’émollients dans les solutions hydro-alcooliques permet de contrer l’effet desséchant de l’alcool sur la peau. Cela améliore ainsi la tolérance cutanée de ces produits. L’émollient le plus fréquemment retrouvé est le glycérol (Agence de la Santé Publique du Canada, 2012).

2.2.3. Eau

L’action de l’alcool est d’autant plus grande lorsqu’il est en présence d’eau (Chabot-Daval, 2010). En effet, il a été prouvé dès le début du XXème siècle que les solutions hydro-alcooliques contenant 50 à 70% d’alcool étaient plus efficaces que celles contenant 95% d’alcool (Malso, 2002). Ceci est lié au fait que la dénaturation des protéines est très difficile en l’absence d’eau (Agence de la Santé Publique du Canada, 2012).

2.3. Avantage de la friction hydro-alcoolique

Selon les recommandations de l’OMS pour l’hygiène des mains au cours des soins, lorsqu’un produit hydro-alcoolique est disponible, il doit être utilisé en première intention pour la pratique de l’antisepsie des mains de routine (recommandation IB). Les avantages immédiats de l’utilisation de la solution hydro-alcoolique sont :

 Elimination de la plupart des germes y compris des virus,

 Rapidité de la procédure (20 à 30 secondes),

 Disponibilité du produit sur le lieu des soins,

(23)

 Meilleure tolérance cutanée,

 Besoin en infrastructures spécifiques limités (Réseau d’alimentation en eau propre, lavabo, savon, essuie-main) (OMS, 2010).

(24)

1- CADRE D’ETUDE

1.1. Cadre institutionnel : le Département de Génie de la Biologie Humaine

Le Département de Génie de la Biologie Humaine est l’un des premiers départements de l’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi à l’Université d’Abomey-Calavi. Il se forme des techniciens de laboratoire en Analyses Biomédicales.

1.2. Cadre technique

L’étude s’est déroulée en partie au laboratoire de l’hôpital de zone d’Abomey-Calavi Sô-ava et la suite des travaux a été achevée à l’Unité de Recherche en Microbiologie Appliquée et Pharmacologie des Substances Naturelles (U.R.M.A.Pha).

1.2.1. Présentation du laboratoire d’Analyses Biomédicales de l’Hôpital de zone d’Abomey-Calavi Sô-ava

Notre stage s’est déroulé dans le laboratoire d’Analyses Biomédicales de l’Hôpital de zone d’Abomey-Calavi Sô-ava du lundi 17 juillet au 12 octobre 2018.

Le laboratoire d’Analyses Biomédicales de l’Hôpital de zone d’Abomey- Calavi Sô-ava dispose d’une salle de prélèvement et trois différentes sections : Hématologie-Parasitologie, Biochimie-Sérologie et Bactériologie-Parasitologie.

Il dispose également d’une banque de sang.

Chapitre 2 :

MATERIEL ET METHODES

(25)

1.2.2. Présentation du l’Unité de Recherche en Microbiologie Appliquée et Pharmacologie des Substances Naturelles (U.R.M.A.Pha).

L’Unité de Recherche en Microbiologie Appliquée et Pharmacologie des Substances Naturelles (U.R.M.A.Pha) a été créée en 2017 en tant qu’Unité de recherche trans-facultaire. Elle est au sein du Laboratoire de Recherche en Biologie Appliquée (L.A.R.B.A) de l’EPAC. Elle est physiquement et administrativement située au sein du campus de l’UAC.

Elle est constituée d’un accueil, du bureau de Directeur, d’un laboratoire et d’une salle de cours. Le laboratoire est composé d’une salle de biologie moléculaire et de deux paillasses de manipulation ou les analyses biochimiques, hématologiques et bactériologiques sont réalisées. Le laboratoire dispose d’un Poste de Sécurité en Microbiologie, d’un microscope et d’un microscope à camera, d’un autoclave, d’un agitateur magnétique, d’un agitateur voltex, d’un spectrophotomètre et d’un automate.

2. MATERIEL

2.1. Matériel biologique

Le travail a porté sur 2 souches bactériennes de référence à savoir Staphylococcus aureus ATCC 25923 et Escherichia coli ATCC 25922. Elles ont été acquises à l’U.R.M.A.Pha.

2.2. Milieux de Culture et Réactifs

 Pour la culture et l’identification des bactéries, les milieux de culture usuels de bactériologie ont été utilisés tels que : le Milieu Mueller Hinton (MH), Cystine-Lactose-Electrolyte-Déficient (CLED) et Eosine Méthylène Blue (EMB).

(26)

 Trois solutions hydro-alcooliques ont servi à la réalisation du travail. La solution hydro-alcoolique A1 utilisée à l’hôpital de zone d’Abomey- Calavi Sô-ava ; A2 acquise en pharmacie et A3 gel publicitaire distribué par des exhibiteurs au cours d’une conférence (tableau I).

 L’eau oxygénée a été utilisée pour faire le test de la catalase et les réactifs pour la coloration de Gram (Violet de Gentiane, Lugol, Alcool, Fuchsine) ont servi à réaliser l’état coloré lors de la confirmation des souches de références.

2.3. Equipements et consommables

Des équipements comme, des microscopes, des réfrigérateurs, des balances de précision, une bouteille de gaz, une étuve à 37°C, des micropipettes, et des portoirs ont été utilisés.

Des consommables tels que les boîtes de Pétri, les lames et lamelles, les écouvillons, coton, alcool et tubes à hémolyses stérile ont été utilisés.

(27)

Tableau I : Composition des solutions hydro-alcooliques (SHA) testées.

3. METHODE

3.1. Population d'étude

Ce travail a pris en compte 50 agents de santé divisées en cinq populations dont:

 Quatorze techniciens au laboratoire d’Analyses Biomédicales de l’hôpital de zone d'Abomey-Calavi Sô-ava,

 Huit soignants au bloc opératoire,

 Huit soignants en urgence,

SHA Composition Principe Actif

SHA A1

Alcool, Eau,Isopropylalcohol Glycerol, Aloes

Barbadensis Acrylates/C10-C30 alkyl Acrylate Crosspolymer

Triéthanolamine

Ethanol+propane-2-one 71%

SHA A2

Alcool Dénaturé, glycerol Acrylates/C10-30

Acrylate Crosspolymer triéthanolamine, chlorure de benzalkonium, Parfum Limonène

Alcool Dénaturé

SHA A3

Ethyl Alcohol 62%, water, Triéthanolamine, glycerin, propylene glycerol, vitamin E, aloe

Vera gel, carbormer, fragrance

Ethyl Alcohol 62%

(28)

 Huit soignants à la maternité,

 Douze stagiaires à l’U.R.M.A.Pha.

Critères d’inclusion

Tous agents de santé ayant manipulé le jour du prélèvement faisant partie de la population sélectionnée.

3.2. Echantillonnage

La collecte des échantillons a été faite en deux étapes. La première étape a consisté à écouvillonner les mains des soignants avant et après lavage plus friction.

La deuxième étape a consisté à écouvillonner les mains des soignants après lavage et après friction avec les solutions hydro-alcooliques à tester. La taille de l’échantillon est de 100 pour les deux étapes réalisées c'est-à-dire 50 échantillons par étape.

3.3. Contrôle de qualité des souches

Le contrôle de qualité des souches de références de S. aureus ATCC 25923 et E. coli ATCC 25922 a été réalisé suivant la procédure de diagnostic bactériologique classique. Pour ce faire, les milieux de cultures MH, Gélose Eosine Methylene Blue et Mannitol Salt ont été préalablement préparés conformément aux consignes du fabricant. La gélose Eosine Methylene Blue a servi au contrôle de qualité de la souche d’E. Coli et celle de Mannitol Salt a servi pour l’identification de S. aureus. Après réalisation des états colorés, des tests biochimiques ont été faits, toujours dans la poursuite de l’identification.

(29)

3.4. Méthodes d’évaluation de l’activité antibactérienne 3.4.1. Première méthode : écouvillonnage des mains

La première méthode a été réalisée en deux étapes : l’écouvillonnage des mains avant et après lavage plus friction et l’écouvillonnage des mains après lavage et après friction avec les solutions hydro-alcooliques à tester.

3.4.1.1. Ecouvillonnage des mains avant et après lavage plus friction avec les solutions hydro-alcooliques

Il a été question d’écouvillonner les mains des 25 premiers soignants inclus dans l’étude à l’aide d’un écouvillon stérile imbibé du bouillon MH.

Les écouvillonnages des mains de chacun des soignants ont été réalisés avant le lavage simple des mains et ensemencés sur des boites de gélose CLED.

La même opération a été réalisée après que ces mêmes soignants se soient lavés puis frictionnés les mains avec les solutions hydro-alcooliques à tester (figure 2).

Figure 2: Réalisation de l’écouvillonnage des mains avant et après lavage plus friction avec les solutions hydro-alcooliques

(30)

3.4.1.2. Ecouvillonnage des mains après lavage et après friction avec les solutions hydro-alcooliques (Figure 3)

Après lavage simple des mains, des écouvillonnages des mains des 25 soignants restants ont été réalisés à l’aide d’écouvillon stérile imbibé du bouillon MH. La même opération a été réalisée après que ces mêmes soignants se soient frictionnés les mains avec les solutions hydro-alcooliques à tester et ensemencer sur des boites de gélose CLED. Les plaques de Gélose ainsi ensemencées ont été incubées à l’étuve à 37°C pendant 18 à 24h.

Figure 3 : Ecouvillonnage des mains après lavage et après friction avec les solutions hydro-alcooliques

3.4.2. Deuxième méthode : propriétés antibactériennes des solutions hydro- alcooliques sur deux souches de références

Les propriétés antibactériennes de ces solutions ont été évaluées sur deux souches de références.

3.4.2.1. Préparation de l’inoculum

Une jeune colonie isolée de la souche de référence et repiquée sur la gélose MH a été mise en suspension dans de l’eau distillée stérile puis ajusté à l’opacité de la solution Mac Farland 0,5 de référence.

(31)

3.4.2.2. Révélation des propriétés antibactériennes des solutions hydro- alcooliques

La réalisation de cette méthode a été faite à partir de la technique décrite par Dougnon et al. (2015). Des ensemencements de l’inoculum ont été réalisés sur la gélose MH.

Pour chaque espèce bactérienne et pour chaque solution hydro-alcoolique, trois puits ont été réalisés dans la gélose à l’aide d’un punch biopsique stérile de 6 mm et remplis par divers volumes. Les volumes 50 µL et 100 µL de SHA ont été testés ainsi que 50 µL de l’eau distillée comme témoin négatif (Figure 4).

Les géloses ont été incubées à l’étuve à 37°C pendant 18-24h et lu automatiquement à la sortie.

Figure 4:Technique de puits dans la gélose (Oké et al 2013)

Pour la confirmation des résultats, l’opération a été réalisée trois fois. Le résultat final est la moyenne obtenue à partir des trois tests réalisés.

50 µLe de SHA

Témoin négatif (eau distillée)

100 µL de SHA

(32)

3.5. Analyse et Statistique

En ce qui concerne les tests statistiques, le paired t-test appelé test pour échantillons dépendants a été réalisé avec le logiciel Minitab 16.2.2 pour évaluer l’effet antibactérien des solutions hydro-alcooliques testées sur les mains des soignants après écouvillonnage.

(33)

1. RESULTATS

1.1. Effet antibactérien des solutions hydro-alcooliques testées sur les mains des agents de santé après écouvillonnage

Les trois solutions hydro-alcooliques ont montré des pourcentages de réduction après friction des mains (Figure 5, 6 et 7).

 activité antibactérienne de la solution hydro-alcoolique A1

De la figure 5, il a été observé une faible réduction de la prolifération bactérienne après lavage et utilisation de la solution hydro-alcoolique A1 (figure 5.1). De plus, le même constat a été fait après lavage simple des mains suivi de la friction (figure 5.2)

La solution hydro-alcoolique A1 ne réduit pas de façon significative la quantité de germes présents sur les mains des agents de soins. Elle n’a donc pas eu une activité antibactérienne significative sur les mains des agents de soins écouvillonnées d’une part avant et après lavage plus friction hydro- alcoolique des mains (P-Value = 0,075> 0, 05) et d’autre part sur leurs mains écouvillonnées après lavage et après friction (P-Value = 0,125> 0, 05).

CHAPITRE 3 : RÉSULTATS

(34)

Figure 5 : Effet antibactérien de la solution hydro-alcoolique A1 sur les mains des agents de soins

0 10 20 30 40 50 60 70

Avant Après

% de réduction

Agents de soins

A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 0

10 20 30 40 50 60

Avant Après

% de réduction

Agents de soins

A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8

Figure 5.1. : Variation quantitative des germes avant et après lavage plus

friction avec la SHA A1

Figure 5.2. : Variation quantitative des germes

après lavage et après friction avec la SHA A1

(35)

De la figure 6, une certaine réduction bactérienne a été observée après l’utilisation de la solution hydro-alcoolique A2 (figure 6.1). Le même constat a été fait après lavage des mains suivi de la friction (figure 6.2).

Cependant, d’après les calculs statistiques, il n’y a pas de différence significative entre la quantité de germes présents sur les mains des agents de soins d’une part avant et après lavage plus friction hydro-alcoolique des mains (P-Value = 0,164) et d’autre part sur leurs mains écouvillonnées après lavage et après friction (P-Value = 0,299). Autrement dit, la solution hydro-alcoolique A2 n’a pas eu une activité réductrice significative des germes sur les mains des agents de soins écouvillonnées.

(36)

Figure 6 : Effet antibactérien de la SHA A2 sur les mains des agents de soins

De la figure 7, après utilisation de la solution hydro-alcoolique A3, une faible réduction antibactérienne a été observée (figure 7.1). La même observation a été faite après lavage des mains suivi de la friction (figure 7.2). Il n’y a pas de différence significative entre la quantité de germes présents sur les mains des agents de soins d’une part avant et après lavage plus friction hydro-alcoolique des mains (P-Value = 0,246 > 0, 05) et d’autre part sur leurs mains écouvillonnées après lavage et après friction (P-Value = 0,363 > 0, 05).

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Avant Après

% de réduction

Agents de soins

b1 b2 b3 b4 b5 b6 b7

b8 0

10 20 30 40 50 60 70 80

Avant Après

% de réduction

Agents de soins

b1 b2 b3 b4 b5 b6 b7 b8 b9

(37)

C’est-à-dire que la solution hydro-alcoolique A3 n’a pas eu une activité antibactérienne significative sur les mains des agents de soins écouvillonnées.

Figure 7 : Effet antibactérien de la solution hydro-alcoolique A3 sur les mains des agents de soins

0 10 20 30 40 50 60 70 80

Avant Après

% de réduction

Agents de soins

C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9

0 10 20 30 40 50 60 70 80

Avant Après

% de réduction

Agents de soins

C1 C2 C3 C4 C5 C6

(38)

1.2. Propriétés antibactériennes des solutions hydro-alcooliques sur des souches de références S. aureus et E. coli

Quelle que soit la souche de référence considérée, seules les solutions hydro-alcooliques A1 et A2 ont montré une sensibilité sur les trois solutions hydro-alcooliques considérées dans l’étude.

 Propriétés antibactériennes des solutions hydro-alcooliques sur la souche S. aureus

Les puits contenant 50 µL et 100 µL de la solution hydro-alcoolique A1 ont provoqués des zones d’inhibition respectives de 7,66 mm et 8,33 mm et ceux contenant la solution hydro-alcoolique A2 ont provoqué des zones d'inhibition respectives de 17 mm et 17,66 mm. Par contre, les puits contenant la solution hydro-alcoolique A3 et l’eau distillée n’ont provoqués aucune zone d’inhibition quelque soit la dose appliquée (Figure 8).

Figure 8: Effets antibactérien des SHA sur la souche de référence S .aureus

0 0

7,66 8,33

0 0

17 17,66

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

50 µl 100µL

Diamètres d'inhibition en mm

Solutions hydro-alcooliques

Eau distillée A1

A3 A2

(39)

 Propriétés antibactériennes des solutions hydro-alcooliques sur la souche E. coli

Les souches d’E. coli se sont révélées sensibles à deux solutions hydro- alcooliques : A1 et A2. La solution hydro-alcoolique A1 appliquée aux doses de 50 μL et 100 μL, a entraîné des zones d’inhibition respectives de 6,33 mm et de 7,33 mm contre 7 mm et de 8 mm pour la solution hydro-alcoolique A2. Par contre, la solution hydro-alcoolique A3 et l'eau distillée aux mêmes doses, n'ont provoquées aucunes zones d’inhibition. (Figure 9).

Figure 9: Effets antibactérien des SHA sur la souche de référence E. coli

0 0

6,33

7,33

0 0

7

8

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

50 µl 100µL

Diamètres d'inhibition en mm

Solutions hydro-alcooliques

Eau distillée A1

A3 A2

(40)

Cette étude avait pour but d’évaluer l’efficacité de trois solutions hydro- alcooliques. Au vu de nos investigations ayant porté sur 50 agents de santé, il a été obtenu 100 échantillons à raison de deux écouvillons par personnes. Aucune des trois solutions hydro-alcooliques testées ne réduit de façon significative la quantité de germes présents sur les mains des soignants. Les observations similaires ont été faites par Dougnon et al. (2015) qui ont trouvé que les solutions hydro-alcooliques A1 et A2 n’étaient pas de qualité désinfectante satisfaisante sur les mains des agents de soins. Cela pourrait être dû à la diminution de la concentration de ces solutions en alcool suite à l’évaporation soit à des problèmes liés à la fabrication. Par ailleurs, Paulson et al. (1999) ont montré qu’on peut avoir une efficacité supérieure après utilisation des solutions hydro-alcooliques lorsque ces dernières sont utilisées après l’observance du lavage simple ou antiseptique des mains. Sur cette base, les différences observées pourraient être attribuées au fait que la technique de l’hygiène des mains n’a pas été bien réalisée suivant le temps et les modalités recommandés par les agents de soins.

La solution hydro-alcoolique A2 possède un effet antibactérien significatif vis-à-vis de la souche de référence S. aureus déjà à partir de 50 µl mais elle montre une activité restreinte sur E. coli, que ce soit à 50 µl et 100 µl. La solution hydro-alcoolique A1 était moins efficace à 50 µl qu’à 100 µl sur les souches de références S. aureus et E. coli.

Ces résultats divergent de ceux de Dougnon et al. (2015) qui ont montré qu’elles n’ont aucune sensibilité sur ces deux souches de références.

CHAPITRE 4 :

COMMENTAIRE

(41)

Cette divergence peut être attribuée à différents facteurs tels que les conditions de stockage des solutions, l’évaporation de l’alcool suite à une mauvaise fermeture du contenant, le type, la concentration et le volume de l’alcool utilisé (Liu et al., 2010).

(42)

L’hygiène des mains est la mesure de prévention la plus simple et la plus efficace pour la réduction des germes, la sécurité des patients et la prévention des infections associées aux soins. Cependant le lavage simple des mains ne garantit pas l’amélioration d’une bonne tolérance cutanée, la friction des mains avec une solution hydro-alcoolique est alors nécessaire. Grâce aux émollients que contiennent les solutions hydro-alcooliques, elles causent moins d’irritation et de sécheresse de la peau que le lavage des mains à l’eau et au savon.

Des diamètres d’inhibition considérables ont été obtenu sur les deux souches de référence S. aureus et E. coli pour les solutions hydro-alcooliques A1 et A2. Par contre, ces mêmes solutions n’ont pas donnés de réduction significative des germes présents sur les mains des agents de soins. Cela pourrait s’expliquer par l’évaporation de l’alcool contenu dans ces solutions ou soit à des problèmes liés à la fabrication.

Ainsi, il est nécessaire de bien conserver, de bien fermer les solutions hydro-alcooliques et de maitriser la technique de la friction hydro-alcoolique des mains.

CONCLUSION

(43)

 Agence de la santé publique du Canada, 2012. Pratiques en Matière d’Hygiène des Mains dans les milieux de soins, prévention et contrôle des maladies infectieuses. Document technique, 104p.

 Ahoyo Th A, Bankolé H S, Adéoti F M, Gbohoun A A, Assavèdo S, Amoussou-Guuénou, Kindé-Gazard D A, Pittet D, 2014. Prevalence of nosocomial infections and anti-infective therapy in Benin: results of the first nationwide survey in 2012. Antimicrobial Resistance and Infection Control 3:17.

 BagheriNejad S, Allegranzi B, Syed S B, Ellis B, Pittet D, 2011. Health- care-associated infection in Africa: a systematic review. Bull World Health Organ.89 (10):757-65.

 Bengaly L, 2011. Implantation et évaluation d'un programme de promotion d’hygiène des mains dans un hôpital national du Mali. Thèse de doctorat. Université de Genève, Suisse, 393p.

 Boyce JM, Larson EL, Weinstein RA, 2002. Alcohol- based hand gels and hand hygiene in hospitals, Lancet 360 : 1509- 1510.

 Chabot-Daval M C, 2010. Evolution de la qualité de la friction des mains avec une solution hydro-alcoolique. Thèse de doctorat. Université Henri Poincaré, Nancy 1 Faculté de Médecine de Nancy, France 147p.

 Dougnon V, Bankolé H, Dougnon J, Koudokpon H, Hounmanou G, Monteiro I, Boko M, Baba-Moussa L, 2015.

Efficacité antiseptique de certaines solutions hydro-alcooliques utilisées dans les laboratoires médicaux au Bénin, Journal Sud-asiatique de biologie expérimentale 5 (3), 114-120.

REFERENCES

BIBLIOGRAPHIQUES

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 Hygiènes, 2017. Actualisation des précautions standard. VOLUME XXV, N° HORS SERIE.

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 Maslo C, 2002. La désinfection des mains par friction hydroalcoolique, Document technique Assistance Publique Hôpital de Paris, 17p.

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 Organisation Mondiale de la Santé, 2010. Résumé des recommandations de l’OMS pour l’hygiène des mains au cours des soins-Premier Défi Mondial pour la sécurité des patients : Un Soin propre est un Soin plus sûr. Genève- Organisation mondiale de la santé 2010.

 Organisation Mondiale de la Santé, 2005. Recommandations OMS pour l'Hygiène des Mains au cours des soins (Version avancée) ; Synthèse Genève- Organisation mondiale de la santé 2005.

 Paulson D S, Fendler E J, Williams R A, 1998. A close look at alcohol gel as an antimicrobial Sanitizing agent. Am J Infect Control ; 26 :507-12.

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 Recommandations pour l’hygiène des mains, 2009. SF2H.

 Rotter M L, 1984. Hygienic hand disinfection. Infect Control; 5:18-22.

(45)

 WHO, 2010. Résumé des Recommandations de l’OMS pour l’hygiène des Mains au cours des soins- Premier Défi Mondial pour la sécurité des patients: un soin proper est un soin plus sûr.