CARACTÉRISATION DE L'INTERACTION MANGANÈSE-TRYPSINE PAR SPECTROSCOPIES RMN ET RPE

HAL Id: jpa-00215371

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Submitted on 1 Jan 1973

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CARACTÉRISATION DE L’INTERACTION

MANGANÈSE-TRYPSINE PAR SPECTROSCOPIES RMN ET RPE

J. Cohen-Addad, J. Leyssieux

To cite this version:

J. Cohen-Addad, J. Leyssieux. CARACTÉRISATION DE L’INTERACTION MANGANÈSE- TRYPSINE PAR SPECTROSCOPIES RMN ET RPE. Journal de Physique Colloques, 1973, 34 (C8), pp.C8-53-C8-53. �10.1051/jphyscol:1973818�. �jpa-00215371�

JOURNAL DE PHYSIQUE Colloque C8, supplément au no 1 1-12, Totne 34, Novembre-Décembre 1973, page C8-53

CARACTÉRISATION DE L'INTERACTION MANGANÈSETRYPSINE PAR SPECTROSCOPIES RMN ET RPE

J. P. COHEN-ADDAD et J. C. LEYSSIEUX

CERMO Université Scientifique et Médicale BP 53, 38041 Grenoble Cedex

Résumé. - L'interaction manganèse-trypsine est étudiée par la relaxation magnétique des protons de l'eau liée à l'ion manganèse et par la spectroscopie RPE de cet ion.

Abstract. - The manganese-trypsine interaction is studied by observing the magnetic relaxa- tion of protons of water molecules bound to the manganese ion and by using EPR spectroscopy of this ion.

Le manganèse (Mn2+) a pour effet de protéger la trypsine contre l'autolyse [l], [2], [3]. Cet effet nous a conduit à caractériser l'interaction Mn2+- trypsine à partir d'expériences de RMN et de RPE.

La trypsine utilisée provient de pancréas de bœuf (Worthington). La représentation de Scatchard indique une constante d'affinité du manganèse pour la tryp- sine de 7,3 x IO4 (Ml])-' à la température ambiante.

L'enthalpie de liaison vaut AH = 1,4 kcal. M - l . Par compétition avec le processus de protonation, on montre que deux résidus carboxyliques sont impliqués dans la fixation du manganèse sur la trypsine. Leur pK moyen est de l'ordre de 5,O. Le

chlorure de sodium (1 Mjl) est aussi connu pour son effet protecteur contre l'autolyse [4] ; on ignorait cependant son rôle précis. Nous montrons, par des expériences de compétition avec le manganèse, que les ions Na' et Mn2+ ont au moins une partie de leurs sites de fixation en commun. La constante d'affi- nité du sodium pour la trypsine vaut L = 90 (M/l-').

Enfin, en utilisant comme référence la fixation de l'eau sur le manganèse lié à la trypsine, nous estimons grossièrement la distance moyenne, R, qui sépare les protons du noyau benzénique d'un inhibiteur fixé à la trypsine (benzylamine), de l'ion manganèse fixé sur la même molécule d'enzyme : I l

A

A.

Bibliographie

[l] ABITA, J. P., DELAAGE, M., LAZDUNSKI, M. and SAVRDA, 3.. [3] HARTSUCK, ^J. A. and LIPSCOMB, W. N. (1971), in « The European J. Biochem. 8 (1969) 314-324. Enzymes » éd. P. D. Boyer, Vol. III, chapter 1, Aca- [2] ABITA, ^J. P. and LAZSUNSKI, M., Biochem. Biophys. Fes., demic Press.

Comm. 35 (1969) 707-712. [4] YON, J., Biochim. Biophys. Acta 31 (1959) 75-85.

Article published online by EDP Sciences and available at http://dx.doi.org/10.1051/jphyscol:1973818