Le B1R est induit dans le modèle de glomérulonéphrite induite par le sérum néphrotoxique - Comme on l’a vu dans l’introduction, la plupart des néphropathies chroniques
sont initiées par une atteinte glomérulaire qui évolue ensuite très progressivement vers des lésions tubulo-interstitielles. Le modèle d’OUU est un modèle rapide et strictement restreint à l’atteinte tubulaire. Nous avons donc voulu confirmer les résultats obtenus précedemment dans un modèle plus progressif et associé à une inflammation et au développement de lésions glomérulaires. Nous avons choisi d’utiliser le modèle de glomérulonéphrite induite par injection de sérum néphrotoxique (NephroToxic Serum, NTS).
Figure 23. L’expression du B1R est induite au cours de la glomérulonéphrite induite par le NTS. L’expression de l’ARNm du B1R a été quantifié par PCR en temps réel 3 et 6 semaines après l’induction de la pathologie.*p<0,05 versus contrôle. n=6 souris/groupe. Cont : contrôle ; W : semaine.
Comme dans l’OUU, le B1R, quasiment indétectable dans le rein à l’état physiologique, est induit dans ce modèle (figure 23).
Le blocage retardé du B1R inhibe l’expression des chimiokines et la progression de l’inflammation induite par le NTS - Nous avons par la suite étudié quel était l’effet du blocage
du B1R sur des lésions déjà installées. Ainsi, nous avons commencé à traiter les souris par le B1Ra [10mg/kg/2 jours] seulement 2 semaine après l’inititiation de la pathologie et étudié les effets de ce traitement après 6 semaines.
Nous avons montré que le blocage retardé du B1R permettait d’inhiber la surexpression des chimiokines CCL2, CCL7, CCL5 [RANTES] et CXCL5 [LIX] induite par le NTS (figure 24a). Cet effet est associé à une diminution de l’état inflammatoire global du rein. En effet, nous avons mis en évidence que le traitement par le B1Ra diminuait l’infiltration des macrophages, par un marquage immunohistochimique anti-F4/80, mais inhibait également la surexpression de l’ARNm de CD4, CD8 et DC-SIGN (Dendritic Cell-Specific Intercellular adhesion molecule-3-
Grabbing Non-integrin), trois marqueurs pour les lymphocytes T CD4 et CD8 et des cellules
dendritiques respectivement (figure 24b).
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Figure 24. Le traitement par le B1Ra inhibe l’expression des chimiokines et le recrutement des cellules inflammatoires induits par le NTS. a) Nous avons analysé l’expression des ARNm des chimiokines CCL2, CCL7, CCL5 et CXCL5 par PCR en temps réel 6 semaines après l’injection de NTS chez des souris traitées par le véhicule (barres blanches) ou des souris traitées par le B1Ra (barres noires). b) Nous avons ensuite étudié l’effet du blocage du B1R sur l’inflammation. L’accumulation des macrophages a été quantifiée par un marquage immunohistochimique anti-F4/80. Les photos montrent des zones représentatives de reins issus de souris contrôles ou après 6 semaines de NTS traitées par le véhicule ou par le B1Ra. Nous avons également évalué l’effet du traitement sur l’expression des ARNm de CD4, CD8 et DC-SIGN par PCR en temps réel.*p<0,05 versus contrôle. #p<0,05 versus NTS 6 semaines sans B1Ra. Cont : contrôle ; W : semaine.
Le blocage retardé du B1R diminue l’expression dy TGF-β et le développement de la FTI au cours de la glomérulonéphrite induite par le NTS - Nous avons ensuite analysé l’effet
du traitement par le B1Ra sur l’expression du TGF-β et du CTGF. Dans ce modèle, il n’est pas évident de dire si le traitement a un effet sur l’expression du CTGF car, malgré une induction notable 2 semaines après l’injection de NTS (résultat non montré), l’expression de cette cytokine retourne spontanément à un niveau basal après 6 semaines (figure 25a). Néanmoins, le blocage du B1R bloque significativement l’expression du TGF-β (figure 25a). Cet effet est associé à une diminution de l’expression du BIG-H3 (TGF-β inducible gene H3) (figure 25a).
De manière très intéressante, nous avons également montré que le traitement retardé par le B1Ra permettait de réduire le développement de la fibrose dans ce modèle comme dans le modèle d’OUU (figure 25b).
b
a
Figure 25. Le blocage du B1R bloque
l’expression du TGF-β et inhibe le
développement de la fibrose. Nous avons analysé l’expression des ARNm du CTGF, du TGF-β et du BIG-H3 par PCR en temps réel (a) et nous avons quantifié l’accumulation de MEC par un marquage immunohistochimique anti- collagène III (b) après 6 semaines de NTS chez des souris traitées par le véhicule (barres blanches) ou des souris traitées par le B1Ra (barres noires). Les photos montrent des zones représentatives de reins issus de souris contrôles ou après 6 semaines de NTS traitées par le véhicule ou par le B1Ra.*p<0,05 versus contrôle. #p<0,05 versus NTS 6 semaines sans B1Ra. n=6 souris/groupe. Cont : contrôle ; W : weeks.
Figure 26. Le blocage du B1R diminue les lésions et améliore la fonction rénale. a) Exemples de lésions observées classiquement au cours de la glomérulonéphrite induite par le NTS. Les lésions les plus courantes, visualisées par un marquage au PAS (Periodic Acid Schiff) sont les croissants glomérulaires (photo de gauche, têtes de flèches) et les cylindres hyalins (photo de droite, astérisque). On peut également noter une slérose des glomérules (photo de gauche, flèches). b) Nous avons quantifié ces lésions, ainsi que l’atrophie tubulaire, sur des coupes de rein marqués au PAS après 6 semaines de NTS chez des souris traitées par le véhicule (barres blanches) ou des souris traitées par le B1Ra (barres noires). Enfin, nous avons évalué la fonction rénale par mesure de la créatinine sanguine.*p<0,05 versus contrôle. #p<0,05 versus NTS 6 semaines sans B1Ra. n=6 souris/groupe. Cont : contrôle ; W : weeks.
a
b
a
Le blocage du B1R diminue les lésions glomérulaires et tubulaires et améliore la fonction rénale - La sévérité de la glomérulonéphrite a finalement été évaluée par la
quantification des croissants glomérulaires, des cylindres hyalins (figure 26a) et de l’atrophie tubulaire. Nous avons ainsi montré que le traitement par le B1Ra permettait d’améliorer significativement le développement des lésions rénales induites par la glomérulonéphrite (figure 26b).
De plus, ce modèle de glomérulonéphrite induit une perte progressive de la fonction rénale. Nous avons pu mettre en évidence que la diminution des lésions histologiques induite par le B1Ra était associée à une amélioration de la fonction rénale, quantifiée par le dosage de créatinémie (figure 26b).