Afin de tenter de sélectionner des géniteurs, des analyses supplémentaires
ont été entreprises sur les lots de Landéda. Le site est situé beaucoup plus
près du laboratoire. Ainsi, les échantillons d’hémolymphe ont été prélevés au
laboratoire pour éviter un problème de transport sur les échantillons. Les
palourdes avaient largement grandi par rapport aux premières
expérimentations. Les palourdes avaient alors 3 ans d’âge et atteignaient une
taille propice à la reproduction (>38 mm).
Les analyses physiologiques sur 50 individus de chacun des deux lots R et S
ont été menées sur deux jours (25 individus de chaque lot le 1
erjour et 25
individus de chaque lot le 2eme jour ; nombre total de palourdes = 100).
3-1 Résultats généraux sur les paramètres hémocytaires
Globalement, le tableau 9 indique les différences les plus marquées entre les
lots R et S des palourdes récoltées sur Landéda en avril 2009 de la
concentration en oxyde nitrique après le contact avec V. tapetis, de la
production d’oxyde nitrique, du ratio d’adhérence et de l’activité de la
phénol-oxydase. De nombreuses corrélations ont été obtenues entre la THC et les
paramètres de l’oxyde nitrique, le ratio d’adhérence et la viabilité pour les
deux lots R et S (Tab. 10). Les plus fortes corrélations obtenues dans les
deux lots apparaissent entre les concentrations en NO après un contact avec
V. tapetis et la production totale (r
2=0.95). Ceci confirme bien que la bactérie
entraîne un production de NO dans l’hémolymphe des palourdes (Jeffroy et
Paillard, 2011). De plus, à nouveau une corrélation entre le ratio d’adhérence
et la THC est observée. (r2 = 0.58 et 0.62 pour le lot R et S respectivement).
Cependant, une analyse séparée s’avère utile afin de confirmer ou non les
tendances globales obtenues dans le tableau 10 car les résultats ont été
obtenus sur deux jours d’expérimentation.
Tab. 9 : Moyenne des paramètres physiologiques analysés sur les individus des lots R et S de Landéda (avril 2009). Taille de la coquille (mm) ; [THC] concentration totale en hémocytes cellules.ml-1, viabilité en % de cellules vivantes, Phago= activité phagocytaire en % de cellules phagocytaires, NO EMSF et NO Vt concentration en µM d’oxyde nitrique (NO) en condition basale en eau de mer stérile filtrée EMSF et en contact avec Vibrio tapetis (Vt), production de NO entre les deux conditions EMSF et Vt, pourcentage de cellules non adhérées en EMSF et avec V. tapetis, ratio d’adhérence, concentration de protéines du plasma de l’hémolymphe en, mg.ml-1 et activité de la phénoloxydase PO en U.min-1.mg prot-1.
R S Taille coquille 38,5 (+/-0,9) 39,4 (+/-0,8) [THC] x105 5,2 (+/- 1,4) 4,3 (+/-0,9) Viabilité 89,5 (+/-1,6) 87,4 (+/-2,5) Phago 26,6 (+/-2,9) 28,3 (+/-4,6) NO EMSF 1,7 (+/-0,3) 1,3 (+/-0,3) NO Vt 5,3 (+/-1,1) 2,9 (+/-0,7) Prod NO 3,5 (+/-1,2) 1,7 (+/-0,6) Cellules décollées EM 1,1 (+/-0,1) 1,6 (+/-0,3) Cellules décollées + Vt 4,8 (+/-0,6) 4,4 (+/-0,7) Ratio adhérence 5,5 (+/-1,2) 3,5 (+/-0,6) [Proteines] plasma 0,239 (+/-0,012) 0,255 (+/-0,021) Activité PO plasma 9,2 (+/-1,6) 14,3 (+/-3,3)
Tab. 10: Coefficients de corrélation entre les paramètres hémocytaires pour les lots R et S de Landéda (avril 2009). * indique une corrélation significative pour P<0.05. CNA : pourcentage de cellules non adhérentes en eau de mer stérile filtrée (EMSF) et après 3h de contact avec
V. tapetis (Vt).
R
Viabilité CNA
EMSF CNA Vt Ratio
Phago- cytose NO EMSF NO Vt NO production THC 0,28 * 0,13 (-)0,12 0,58 * 0 0,32 * 0,29 * 0,21 Viabilité 0,12 (-)0,02 0,30 * 0,49 * 0,09 0,11 0,15 CNA EMSF 0,58 * 0,36 * 0,49 * 0,27 * 0,32 * 0,25 * CNA Vt 0,1 0,35 * 0,15 0,11 0,07 Ratio 0,33 * 0,32 * 0,42 * 0,34 * Phagocytose 0,13 0,32 * 0,3 * NO EMSF 0,34 * 0,02 NO Vt 0,95 * S THC 0,31 * (-)0,44 * (-)0,02 0,61 * (-)0,04 0,33 * 0,34 * 0,24 Viabilité (-)0,32 * (-)0,04 0,31 * 0,02 (-)0,01 (-)0,03 (-)0,03 CNA EMSF 0,36 * (-)0,54 * 0,25 (-)0,20 (-)0,13 (-)0,05 CNA Vt 0,33 * 0,40 * 0,03 0,2 0,23 Ratio 0,03 0,03 0,35 * 0,25 * Phagocytose (-)0,06 0,24 * 0,31 * NO EMSF 0,55 * 0,16 NO Vt 0,91 *
3-2 Résultats par jour de prélèvement d’hémolymphe
La taille moyenne des coquilles de palourdes ne montre pas de différence
entre les deux lots (Tableau 11). Cependant, les animaux du lot S sont
significativement un peu plus grands dans l’échantillonnage du deuxième jour
(p=0.0003).
Les concentrations hémocytaires ne montrent pas de différence significative
entre les deux lots ni entre les deux jours de prélèvement. Par contre, une
différence apparaît le deuxième jour de prélèvement sur la viabilité cellulaire.
La viabilité cellulaire a augmenté pour le lot R alors qu’elle a diminué pour le
lot S passant respectivement de 86.5% à 92.6% et de 88.9% à 85.9%. Ces
viabilités restent d’un niveau correct par rapport aux prélèvements précédent.
L’activité phagocytaire donne des valeurs globales identiques de l’ordre de
27%. Par contre, la phagocytose est 4 fois plus élevée entre les deux jours
d’expérience pour les deux lots augmentant de 10% à 40%.
Une différence du ratio de l’adhérence est observée entre les deux lots d’une
part à cause de l’augmentation des cellules non adhérées en EMSF et avec
V. tapetis dans le lot S et la diminution des cellules non adhérées en EMSF
pour le lot R au cours du deuxième jour d’expérimentation. Une fois encore,
un pourcentage de cellules non adhérentes en EMSF plus faible est corrélé à
l’augmentation de la viabilité. C’est le cas pour le lot R.
Pour les deux jours d’analyses, la concentration en oxyde nitrique est
significativement supérieure après le contact avec la solution bactérienne par
rapport à la concentration basale en EMSF : la concentration de NO triple
pour le lot R et double pour le lot S. La production du NO atteint 3.5µM pour le
lot R et 1.7µM pour le lot S (Tab.9). Cependant, lorsque les résultats sont
détaillés par jour d’expérience, nous observons une augmentation des
concentrations et de production de NO au deuxième jour pour les deux lots.
La concentration en protéines totales du plasma diminue significativement le
deuxième jour pour le lot S. Cette importante diminution le deuxième jour pour
le lot S explique la valeur de l’activité PO plus élevée du lot S dans le tableau
global.
Tab. 11 : Paramètres physiologiques sur deux jours d’analyse sur les individus des lots R et S de Landéda: Taille de la coquille (mm ;. [THC] concentration totale en hémocytes cellules.ml-1, viabilité en % de cellules vivantes, Phago : activité phagocytaire en % de cellules phagocytaires, NO EMSF et NO Vt concentration en µM d’oxyde nitrique (NO) en condition basale en eau de mer stérile filtrée EMSF et en contact avec Vibrio tapetis (Vt), production de NO entre les deux conditions EMSF et Vt, pourcentage de cellules non adhérées en EMSF et avec V. tapetis, ratio d’adhérence, concentration de protéines du plasma de l’hémolymphe en, mg.ml-1 et activité de la phénoloxydase PO en U.min-1.mg prot-1. * : différence significative entre les deux jours au sein d’un lot.
08-avr-09 09-avr-09 08-avr-09 09-avr-09
Paramètre
hémocytaire Lot R (PJ-06-10) Lot S (PJ-06-7)
Taille coquille 38,1 (+/-0,9) 38,5 (+/- 0,7) 39,4 (+/- 1,3) 40,8 (+/- 0,8) [THC] x105 4,4 (+/- 1,5) 6,1 (+/- 2) 4,7 (+/-1,5) 3,9 (+/-0,9) Viabilité 86,5 (+/- 3,9) 92,7 (+/- 2,2) * 88,9 (+/-3,0) 85,8 (+/- 4,0) Phago 13,4 (+/- 2,4) 40,5 (+/- 4,1) * 15,7 (+/- 1,7) 41,0 (+/- 5,7) * NO EMSF 1,4 (+/- 0,4) 2,0 (+/- 0,4) 1,3 (+/- 0,4) 1,2 (+/-0,4) NO Vt 3,8 (+/- 0,7) 6,9 (+/-1,6) * 2,2 (+/-0,6) 3,6 (+/-1,2) Prod NO 2,3 (+/-0,4) 4,8 (+/-1,7) * 0,9 (+/-0,3) 2,4 (+/-1,1) * Cellules décollées EM 1,3 (+/-0,3) 0,9 (+/-0,2) 1,0 (+/-0,3) 2,1 (+/-0,4) * Cellules décollées + Vt 4,4 (+/-1,1) 5,1 (+/-0,9) 3,3 (+/-0,8) 5,6 (+/-0,8) * Ratio adhérence 4,0 (+/-0,8) 7,1 (+/-1,7) * 3,7 (+/-1,0) 3,3 (+/-0,7) [Proteines] plasma 0,263 (+/-0,038) 0,216 (+/-0,018) 0,306 (+/-0,026) 0,205 (+/-0,021) * Activité PO plasma 9,0 (+/-1,9) 9,5 (+/-2,3) 9,7 (+/-1,7) 18,9 (+/-6,0) *