Identification de Staphylococcus aureus : Problématique de la recherche de la Staphylocoagulase libre avec du plasma humain
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3.1- RESULTATS
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3.1.1- Résultat d’identification des souches de Staphylococcus aureus à testées
3.1.1.1- Résultats de la DNAse
Tableau II : Répartition des souches bactériennes en fonction des résultats de la DNAse.
Résultats
Souches
Effectif Pourcentage (%) ATCC 25923
Positif 39 75 1
Négatif 13 25 0
Total 52 100 1
Le tableau II présente les résultats de la recherche de la production de la thermonucléase par les souches cocci Gram positif et Catalase positif. Il en ressort que trente-neuf (39) sur les cinquante-deux (52) souches testées soit 75%
produisent une thermonucléase.
3.1.1.2- Résultats de la recherche de la Staphylocoagulase
Tableau III : Répartition des souches bactériennes en fonction des résultats de la recherche de la staphylocoagulase libre avec du plasma lyophilisé de lapin
Résultats
Souches
Effectif Pourcentage (%) ATCC 25923
Positif 45 86,53 1
Négatif 07 13,47 0
Total 52 100 1
Le tableau III montre que sur les cinquante-deux souches testées, nous avons quarante-cinq (45) soit 86,53% qui sont Staphylococcus aureus.
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3.1.2- Résultats des tests avec du plasma frais de sujets non traité prélevés sur EDTA. K3 et du Fluorure de Na
3.1.2.1- Résultats des tests effectués avec du bouillon de 24 heures
Tableau IV : Répartition des résultats obtenus avec du bouillon de 24 heures Effectifs (Pourcentages)
Tube EDTA K3 Tube Fluorure de Na résultat positif avec du plasma lyophylisé de lapin (PLL), seulement vingt-sept (soit 60% pour le plasma humain – EDTA.K3) et 36 (soit 80% pour le plasma humain- Fluorure de Na) environs ont coagulé le plasma humain et d’autre part que le plasma humain- Fluorure de Na est plus sensible à la staphylocoagulase que le plasma humain- EDTA.K3.
3.1.2.2- Résultats des tests effectués avec les colonies de 24 heures Tableau V : Répartition des résultats obtenus avec les colonies de 24 heures
Effectifs (Pourcentages) Tube EDTA K3 Tube Fluorure
de Na
ATCC 25923
Positifs 17 (37,77%) 31 (68,88%) 1
Négatifs 28 (62,23%) 14 (31,12%) 0
Total 45 (100%) 45 (100%) 1
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Nous avons remarqué que seulement le tiers soit 17/45 des souches de Staphylococcus aureus ont donné un test positif avec le plasma humain prélevé sur tube EDTA. K3 alors qu’avec le plasma humain prélevé sur tube fluoré, nous avons obtenu près du double de la proportion obtenue avec le plasma EDTA. K3
(31/45).
Le plasma humain obtenu du sang prélevé sur du fluorure de Na est donc plus sensible (environs 1,33 fois avec le bouillon de 24h contre 1,82 fois avec les colonies) à la staphylocoagulase que le plasma obtenu d’un prélèvement fait sur l’EDTA.K3. De plus, le résultat des tests est optimal (1,58 fois environs avec EDTA.K3 et 1,16 fois environs avec Fluorure de Na) lorsque le test est réalisé avec le bouillon de 24 qu’avec les colonies. Enfin, les coagulums obtenus (Figure 3) en utilisant le plasma humain prélevé sur EDTA.K3 et celui prélevé sur fluorure de Na n’ont pas les mêmes consistances.
Figure 3 : Aspect des coagulums obtenus avec les plasmas humains (A) et du plasma lyophilisé de lapin (B)
Tube Fluorure de Na
Tube EDTA. K3 A
B
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3.1.3- Résultats des tests avec du plasma frais de sujets traité prélevés sur EDTA. K3 et du Fluorure de Na
3.1.3.1- Résultats des tests effectués avec du bouillon de 24 heures
Tableau VI : Répartition des résultats obtenus avec du bouillon de 24 heures Effectifs (Pourcentages)
Tube EDTA K3 Tube Fluorure de Na bouillon réagissent de la même manière (24/25) avec le plasma humain de sujet traité prélevé dans les deux types de tubes utilisés.
3.1.3.2- Résultats des tests effectués avec des colonies de 24 heures Tableau VII : Répartition des résultats obtenus avec colonies de 24 heures
Effectifs (Pourcentages) Tube EDTA. K3 Tube Fluorure
de Na
ATCC 25923
Positifs 05 (11,11%) 08 (17,77%) 1
Négatifs 40 (88,89%) 37 (82,23%) 0
Total 45 (100%) 45 (100%) 1
Nous avons obtenu les plus faibles proportions de résultats positifs (5/45 pour le plasma- EDTA.K3 et 8/45 pour le plasma- Fluorure de Na) avec les tests sur les colonies de 24h (Tableau VII). Aussi, avons-nous remarqué que les colonies de 24h de S. aureus ont exprimé par rapport aux réactions lues au
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niveau du Tableau VI une faible réactivité avec le plasma humain de sujet traité prélevé sur les deux types de tubes dans les rapports 5/24 pour les plasmas- EDTA.K3 et 8/25 pour les plasmas- Fluorure de Na.
3.1.3.3- Résultats du test comparatif
Tableau VIII : Etude comparatif des plasmas contenant de l’antibiotique Plasmas
Tests positifs
PFL traité PFH traité
EDTA. K3 Fluorure de Na EDTA. K3 Fluorure de Na
Bouillon de 24h 44 44 24 25
Colonies de 24h 41 41 05 08
Le tableau VIII montre que le plasma frais de lapin traité a été plus sensible que le plasma humain sous antibiotique quel que soit le tube de prélèvement utilisé (44/24 environs pour le bouillon et 41/5 environs pour les colonies).
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3.2- COMMENTAIRE
Réalisé par Ghislain DENAKPO Page 38 libre dans nos laboratoires médicaux. Pour ce faire, nous avons étudié la réaction de ce plasma avec quarante-cinq souches de Staphylococcus aureus confirmées comme telles par la mise en évidence des enzymes suscitées. Soixante-quinze pour cent (75%) des souches de S. aureus impliquées dans notre étude avaient produit la DNAse. Nos proportions sont basses par rapport à celles obtenues par Bankolé et al. [22] qui avait eu 96 % mais qui n’avaient travaillé que sur 25 souches. La faible proportion obtenue dans notre étude serait due soit à la taille de l’échantillon, soit à une mutation du gène codant pour la production de la DNAse ou soit à une activité faiblement exprimée de certaines souches de S.
aureus [45]. Menzies [46] lors de ces travaux sur 1035 isolats de S. aureus, n’avait pas trouvé non plus une bonne corrélation entre les résultats de la DNAse et de la staphylocoagulase libre.
Au bout de 24h d’incubation, 40% et 20% des isolats n’ont pas coagulé respectivement, les plasmas humains- EDTA.K3 et les plasmas humains- Fluorure de Na alors que la totalité des isolats étudiés dans les mêmes conditions ont coagulé le plasma lyophilisé de lapin. De plus, les coagulums obtenus n’ont pas les mêmes consistances suivant que le plasma utilisé soit de lapin ou humain prélevé sur EDTA.K3 ou sur Fluorure de Na. Ces proportions élevées de résultats faussement négatifs obtenues avec le plasma humain seraient dues à sa composition chimique [47]. Par ailleurs, comme dans nos travaux, Tager et Hales [48] ont rapporté des travaux ultérieurs similaires à ceux effectués par Fahlberg et Marston [49], montrant que le plasma humain entier ne se
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coagulait pas en présence de la staphylocoagulase mais dilué, les résultats étaient meilleurs que ceux obtenus avec le plasma lyophilisé de lapin.
La qualité des coagulums obtenus et surtout la différence de sensibilité notée d’une part entre les plasmas humains utilisés (50% environs) et d’autre part entre le plasma humain- EDTA.K3 et le PLL expliqueraient d’avantage cette différence de composition plasmatique. Par ailleurs, les différences de proportions observées avec les différents plasmas humains utilisés seraient liées aux différents anticoagulants, qui dans le processus de l’inhibition de la coagulation n’agiraient pas sur les mêmes facteurs de coagulation [50].
Le faible taux de positivité obtenu en utilisant à la place du bouillon de 24 heures les colonies jeunes des isolats (37,77% pour EDTA.K3 et 68,88% pour Fluorure de Na) pourrait avoir une explication immunologique.
Quant aux résultats obtenus en remplaçant les plasmas de sujets non traité par ceux de personnes sous antibiotiques, la baisse observée variant entre 2,44%
et 6,66% avec le bouillon de 24 heures et entre 1,33% et 2,66% avec les colonies de 24 serait liée à l’antibiotique qui interférerait soit dans la cascade de réaction aboutissant à la coagulation soit en inhibant la croissance de certains isolats sensibles aux antibiotiques empêchant ainsi la production de la staphylocoagulase.
Enfin, la grande différence obtenue entre les réactions observées avec le PFL traité et le PFH traité montre indépendamment de bouillon ou de colonies de 24 heures utilisés que l’antibiotique a un effet indéniable sur la mise en évidence de la staphylocoagulase libre avec le PFH.
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