Réparation des mutations induites par AID

Plusieursà a is esàexiste tàpourà orrigeràleà sapparie e tàG:Uàdûà ààl’a ti it à

d’áID (figure 15).

Laàr pli atio àdeàl’áDNà aàg reràdesàtra sitio sàCà ersàTàsuràu à ri àd’áDN,àetàGà ersàáàsurà

le brin oppos .àL’ura ilàDNáàgl os laseà UNG ,ài pli u eàda sàleà a is eàdeà aseàex isio à

repairà BER à aàretireràl’ura ileàdeàl’áDN,à r a tàai siàu àsiteàa asi ueàpou a tà treà o l à

parà ’i porteà uelleà aseà á,àT,àCàouàG .àLeà a is eàdeàl’áDNà is at hàrepairà(MMR)

permet quant à lui la sélection de mutations sur les bases A:T.

“iàBERàetàMMRàso tà or ale e tàdesà a is esàper etta tàlaàpr ser atio àdeàl’i t grit à

du génome, ils sont error-pro eàlorsàdeàlaà“HM,à ota e tàa e àl’utilisatio àdeàpol rasesà

de faible affinité (Alt et al., 2015).

Figure 15 : Mécanismes par lesquels la cellule corrige les mésappariements induits par AID

et les types de mutations que ces derniers permettent.

2.3.1Base Excision Repair (BER)

Da sàleà a is eàdeàBER,àlesà asesà ut es/alt r esàdeàl’áDNàso tà li i esàparàu eà

áDNà gl os lase.à Da sà leà asà desà sapparie e tsà dusà à áID,à ’està l’ura ilà N-glycosylase

(UNG) qui est recrutée (Krokan et al., 2002).àLaàparti ularit àd’UNGà o sisteàe àsaà apa it à à

se lier tant sur les ADN simple brin que sur les ADN double brins. UNG est de ce fait capable

de reconnaitre des dU, dU:dG et dU:dA (Zharkov et al., 2010).àL’ex isio àdeàl’ura ileà r àu à

site abasique, et cet état intermédiaire peut être pris en charge par des endonucléases (APEs)

for a tàalorsàdesà assuresàsi pleà ri àdeàl’áDN.àCesà assures pourront à leur tour être prises

en charge par des polymérases non fidèles (BER non classique). Dans la voie courte de BER,

l’áDNàl aseàex iseà à aseàetàda sàlaà oieàlo gueàdeàBER,àlaà ’-3’àexo u l aseàFEN àe àex iseà

plusieurs (2 à 10 bases) (Alt et al., 2015).à Laà oieà ourteà ’agità ueà surà laà tosi eà

originellement ciblée par AID. La voie longue de BER participe aux mutations A:T au même

titre que la MMR (figure 16).

“iàlaàraiso àduà hoixà ourte/lo gueà oieà ’estàpasà o ue,àilàse leraità ueàl’utilisatio àdeàPolβà

et/ouàPol àorie teà ersàlaà oieà ourte,àetà ueàlaàpr se eàdeàPCNáà o o-ubiquitylé sur les

l sio sàdeàl’áDNàre ruteàlaàPolηàetàorie teà ersàlaà oieàlo gueà(Alt et al., 2015; Peled et al.,

2008).àLeàtauxàd’expressio àdesàdiff re tsàfa teursàre treraità gale e tàe àjeuàlorsàduà hoixà

error-free ou error-prone. Ainsi, la Polβ,àpol raseàdeàhaute-fidélité, est sous régulée dans

une lignée cellulaire humaine de type centroblaste (BL2) où les évènements de SHM sont très

présents (Poltoratsky et al., 2007).

Figure 16 : Mécanisme de Base Excision Repair (BER)employé de façon « error-prone » dans

le processus de SHM. La voie courte permet une mutation sur la seule cytosine ciblée par AID,

2.3.2Mismatch Repair (MMR)

Au sein de la cellule, le mécanisme de MMR fait intervenir plusieurs acteurs protéiques

afin deàr pareràlesàdo agesàdeàl’áDNàai sià u’a roitreàlaàfid lit àdeàlaàr pli atio àdeàl’áDN

(figure 17)(Iyer et al., 2006; Jiricny, 2006). Les mésapparieme tsàdeàl’áDNàso tàide tifi sàparà

les hétérodimères MSH2-M“H à Mut“α ; reconnaissance des mésappariements de 1 base de

long) et MSH2-M“H3à Mut“β;àre o aissa eàdesà sapparie e tsàr sulta tsàd’i sertio sà

ou de délétions). Suite à la reconnaissance des mésappariements par les hétérodimères, une

s rieà d’ e e tsà d pe da tà d’áTPà per ette tà leà re rute e tà deà MLH à età deà PM“ ,à

o plexeàre ruta tàlesà l e tsà apa lesàdeà ouperàu àdesàdeuxà ri sàd’áDNàauà i eauàduà

mésappariement (Kadyrov et al., 2006).à“’ilàaàparàleàpass à t à o tr à ueàl’a ti it à atal ti ueà

deàl’exo u l aseà à EXO àestàrespo sa leàdeàl’ li i atio àduà sapparie e tà(Peled et al.,

2008), des données plus récentes in vivo (Schaetzlein et al., 2013) indiquent que EXO1 aurait

un rôle structural et non catalytique durant la SHM. La place est ensuite faite aux polymérases

à età à Polà à età Polà ,à deà haute-fidélité) qui re-s th tise tà leà outà d’áDNà li i à a a tà

l’i ter e tio àdeàl’áDNàligaseàI.àDuàfaitàdeàl’a ti ité ATPase des hétérodimères, si ces derniers

se te tàu eàtropàforteàd gradatio àdeàl’áDNàalorsàlaà elluleàre treàe à oieàapoptoti ueà(Lin et

al., 2004a; Yang et al., 2004).

Lors u’ilàestàutilis àparàlesà e troblastes, ce mécanisme est court-circuité pour devenir

error-prone au niveau des mésappariements induits par AID, et est responsable de 50% des

mutations totales ainsi que de la plupart des mutations de transversion A:T (figure 17)(Di Noia

and Neuberger, 2007; Jungnickel, 2006). La régulation du mécanisme doit donc être très fine :

d’u eàpartàilàestàsour eàdeà o reusesà utatio sàda sàlesàr gio sàV,àetàd’autreàpartàilàper età

leà ai tie àdeàl’i t grit àduàg o e des centroblasts ayant une haute fréquence de division.

Ilà aà ai sià t à o tr à ueà leà o plexeà Mut“αà està respo sa leà deà laà re o aissa eà desà

sapparie e tsàg r sàparàáID,à o traire e tàauà o plexeàMut“βà uiàestàdispe sa leà

(Roa et al., 2010).àDa sàdesàl pho tesàBà uri sàoùàMLH3à pou a tàs’asso iatio àa e àPM“ à

a été inactivé, la fréquence de mutations sur les gènes des immunoglobulines est augmentée

et le spectre de mutations est différent de celui de lymphocytes B sauvages (Li et al., 2006),

démontrant une compétition entre MLH1 et MLH3 lors de la formation des complexes

agissant sur les gènes des immunoglobulines. La polymérase eta (Polη) a également été

décrite comme acteur important dans la création des mutations A:T (Delbos et al., 2007; Zeng

et al., 2001) :àplusàau u eà utatio sàá:Tà ’estàd te ta leàda sàdesàsouris double KO pour

MSH2 et Polη.àD’autresà tudesào tàper isàlaà iseàe à idence de la coopération de Polη avec

d’autresà pol rasesà theta,à zeta,à iota à pourà l’aiderà à r parerà l’áDNà suiteà à l’a tio à d’áIDà

(Casali et al., 2006; Faili et al., 2002a; Masuda et al., 2007; Zan et al., 2001). Le recrutement

de ces polymérases error-prone est rendu possible grâce au PCNA (homotrimère central pour

laàr pli atio àdeàl’áDN àlors ueà elui-ci a subi une ubiquitylation sur le résidu K164 (Garg and

Burgers, 2005; Lehmann et al., 2007; Ulrich, 2006),à odifi atio à per etta tà d’a ti erà lesà

a is esà deà r paratio à deà l’áDN.à Laà o o-ubiquitylation de PCNA est réalisée par les

ubiquitines ligases Rad6-Rad8. Le niveau de PCNA-Ub est ensuite ajusté via l’a tio à deà

d u i uilatio àd’U“P .àL’i tera tio àe treàPCNáàetàlesàdiff re tsàfa teursàài pli u sàda sàlaà

MMRà M“H3,àM“H ,àMLH ,àEXO ,àpol rases àetàdire te.àL’i porta eàdeàl’u i uit lation

de PCNA a été prouvée dans les cellules DT40 modifiées du poulet (Arakawa et al., 2006; Bachl

et al., 2006) et dans les B de souris (Langerak et al., 2007; Roa et al., 2008) :àl’i apa it àdesà

cellules à exercer cette modification est associée à une diminution de la SHM.

Figure 17 : Mécanisme de Mismatch Repair (MMR).Lors u’e plo àdeàfaço à« error-prone »

dans le processus de SHM, PCNA est mono-u i uit l eàper etta tàalorsàleàre rute e tàd’u eà

polymérase de faible affinité, la Polη.