Patients et méthodes
A- Protocoles de l’étude : 1-Prélèvements :
II- Méthodes :
A- Protocoles de l’étude : 1- Prélèvements : a- Types de prélèvements :L’index de colonisation de Pittet a été établi à partir des prélèvements par des écouvillons d’au moins 4 sites périphériques distincts (buccal, nasal, auriculaire, rectal, vulvo-vaginal) et un prélèvement urinaire sur un flacon stérile. D’autres sites ont été laissés à la discrétion des médecins traitants selon la présentation clinique du patient. (figure 1)
Les hémocultures ont été réalisées par prélèvement de 8 à 10 ml de sang veineux dans un flacon contenant le milieu MYCOSIS-IC/F.
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque Etude prospective (Janvier-Mars 2012-Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina)
Figure 1
b- Schéma des prélèvements
Durant la période de l’étude, l’index de colonisation a été établi le jour de l’admission, à 48h heures, puis en bihebdomadaire jusqu’à
L’hémoculture a été répétée durant 3 jours successifs, chez un patient présentant une fièvre > 38,5 persistante plus de 3 jours sous antibiothérapie adapté
positivité, deux fois par semaine jusqu’à négativation.
c- Organisation des prélèvements
L’organisation du suivi, depuis le chevet du malade jusqu’au retour des par l’étude mycologique, a fait l’objet d’un protocole.
La technique de prélèvement a été standardisée et expliquée oralement au personnel du service.
Une attention particulière a été portée à l’identification claire des prélèvements
transmission au laboratoire de mycologie, tenu informé de l’identité des patients inclus dans le protocole de suivi.
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina)
7
Figure 1 : Matériel stérile pour écouvillonnage
prélèvements :
Durant la période de l’étude, l’index de colonisation a été établi le jour de l’admission, à 48h heures, puis en bihebdomadaire jusqu’à positivité.
L’hémoculture a été répétée durant 3 jours successifs, chez un patient présentant une fièvre > 38,5 persistante plus de 3 jours sous antibiothérapie adapté
positivité, deux fois par semaine jusqu’à négativation.
Organisation des prélèvements :
L’organisation du suivi, depuis le chevet du malade jusqu’au retour des résultats, en passant par l’étude mycologique, a fait l’objet d’un protocole.
La technique de prélèvement a été standardisée et expliquée oralement au personnel du Une attention particulière a été portée à l’identification claire des prélèvements
transmission au laboratoire de mycologie, tenu informé de l’identité des patients inclus dans
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque- 2012
Durant la période de l’étude, l’index de colonisation a été établi le jour de l’admission, à 48h
L’hémoculture a été répétée durant 3 jours successifs, chez un patient présentant une fièvre > 38,5 persistante plus de 3 jours sous antibiothérapie adaptée, et en cas de
résultats, en passant La technique de prélèvement a été standardisée et expliquée oralement au personnel du Une attention particulière a été portée à l’identification claire des prélèvements avant leur transmission au laboratoire de mycologie, tenu informé de l’identité des patients inclus dans
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque-
Etude prospective (Janvier-Mars 2012-Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina) 2012
8
Les prélèvements liquides ne pouvant être utilisés immédiatement on été conservés au réfrigérateur pendant quelques heures à l’exception du sang, toujours mis en culture sans délai.
Les temps de transfert des prélèvements jusqu’au laboratoire ont été les plus brefs possibles, pour éviter l’envahissement par une flore saprophyte et la dessication, nuisible au rendement des cultures mycologiques. ( le transport des flacons d’hémocultures vers le laboratoire se faisait dans l’heure qui suit).
Les prélèvements bihebdomadaires ont tous été réalisés le même jour de la semaine. Le lundi et le jeudi on été choisi de façon à faciliter l’observance du protocole par le personnel médical, et à permettre au laboratoire de mycologie de s’organiser pour la réception et le traitement de ces prélèvements.
2- Traitement des prélèvements au laboratoire de Mycologie :
a- Les prélèvements périphériques par écouvillonnage :
Chacun des prélèvements ayant servi pour calculer l’index de colonisation a fait l’objet d’une mise en culture sur milieu chromogène « CandiSelect » incubé 37° pendant 48h. Ce milieu permet l’identification précise de Candida Albicans et présomptive de Candida Glabrata,
Candida Krusei, et Candida Tropicalis. Figure 2
La confirmation pour ces espèces se fait par le RTT Glabrata® et le Krusei Color®.
Le calcul de l’index de colonisation a été établi par le rapport entre le nombre de sites positifs et le nombre total de sites prélevés.
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque Etude prospective (Janvier-Mars 2012-Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina)
Figure 2
b- Les hémocultures : (Figure
Après ensemencement, chaque flacon est incubé à 37°C dans l’automate BACTEC 9050 pendant 7 jours en agitation. Cet automate permet de détecter l’augmentation de CO
par la croissance des micro-organismes.
Grâce à un capteur placé au fond de chaque flacon réagissant ave le CO produisant une fluorescence mesu
fluorescence est détectée selon un seuil déterminé par le fabriquant.
En cas de positivité de l’hémoculture, la mise en culture se fait sur milieu sélectif chromogénique pour identifier l’espèce selon la
colonisation.
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina)
9
ure 2 : Milieu chromogène CandiSelect
(Figure 3a)
Après ensemencement, chaque flacon est incubé à 37°C dans l’automate BACTEC 9050 jours en agitation. Cet automate permet de détecter l’augmentation de CO
organismes. (Figure 3b)
Grâce à un capteur placé au fond de chaque flacon réagissant ave le CO2
produisant une fluorescence mesurée de façon non invasive toutes les 10 minutes, la fluorescence est détectée selon un seuil déterminé par le fabriquant.
En cas de positivité de l’hémoculture, la mise en culture se fait sur milieu sélectif chromogénique pour identifier l’espèce selon la même démarche que pour l’index de
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque- 2012
Après ensemencement, chaque flacon est incubé à 37°C dans l’automate BACTEC 9050® jours en agitation. Cet automate permet de détecter l’augmentation de CO2 produit
2 des organismes et rée de façon non invasive toutes les 10 minutes, la En cas de positivité de l’hémoculture, la mise en culture se fait sur milieu sélectif même démarche que pour l’index de
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque Etude prospective (Janvier-Mars 2012-Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina)
Figure 3a : Flacon d’hémoculture
Figure 3b : Automate BACTEC 9050®
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina)
10
: Flacon d’hémoculture
Automate BACTEC 9050®
La colonisation candidosique en réanimation : Intérêt diagnostique et facteurs de risque-
Etude prospective (Janvier-Mars 2012-Réanimation chirurgicale CHU Ibn Sina) 2012
11