Nouvelles cibles thérapeutiques potentielles identifiées

L'approche d'immunoprécipitation que nous avons utilisée nous a permis d'identifier plusieurs cibles des IglV sur les lymphocytes B humains, ce qui était le premier objectif des présents travaux. Parmi les protéines identifiées, certaines étaient déjà connues comme des cibles des IglV (le BCR et le CMH de classe I). De plus, de nombreuses nouvelles cibles ont été identifiées : CD91, CMH de classe II, nucléoline, myosine, GRP94, LYST, les flotillines 1 et 2 ainsi que les phbl et 2 (chapitre 2). L'identification de protéines strictement intracellulaires nous a aussi permis de mettre en évidence que les IglV sont internalisées de manière indépendante des récepteurs pour la partie constante des IgG

(FCYR) P31" le s lymphocytes B humains activés. L'internalisation des IglV avait déjà été

rapportée chez des cellules endothéliales128 et chez des cellules dendritiques in vitro160. Par

contre, aucune de ces études n'avaient montré l'interaction entre les IglV et des protéines intracellulaires ni montré que ce phénomène pouvait avoir lieu dans des conditions physiologiques (sang humain contenant une concentration normale en IgG endogène d'environ 15 mg/ml). La localisation précise (mitochondrie, lysosome, noyau, etc.) des IglV à l'intérieur des lymphocytes ou d'autres cellules du système immunitaire pourrait faire l'objet de travaux futurs. Cela pourrait se faire par microscopie confocale en vérifiant la colocalisation des IglV avec des marqueurs spécifiques à différentes organelles intracellulaires. Nous avons également montré que la quantité totale d'IglV liées à la surface des cellules et internalisées était supérieure à celle des IgG endogènes. Cette différence de comportement entre les IglV et les IgG endogènes pourrait provenir de modifications subies par les IgG contenues dans les préparations d'IglV lors du processus de fractionnement industriel du plasma. En effet, il a été démontré que des conditions légèrement dénaturantes semblables à celles qui sont employées durant le fractionnement augmentent l'autoréactivité des IgG191, suggérant par le fait même une modification dans la

structure naturelle des IgG. Certaines des protéines que nous avons identifiées pour leur capacité à interagir avec les IglV nous permettent de mieux comprendre les mécanismes

d'action des IglV et pourraient représenter des cibles thérapeutiques potentielles pour développer un substitut aux IglV.

6.1.1 La présentation antigénique

L'importance des lymphocytes B comme CPA a été démontrée dans deux modèles murins différents de maladie auto-immune. Dans un modèle d'arthrite, la présence de lymphocytes B comme CPA est nécessaire au développement de la maladie192 et les

lymphocytes B ont été identifiés comme étant les premières cellules à présenter des autoantigènes et à activer les lymphocytes T autoréactifs dans un modèle murin de lupus107.

Plusieurs molécules ayant un rôle direct ou indirect dans le processus de la présentation antigénique par les lymphocytes B ont été identifiées comme des cibles des IglV par l'étude protéomique que nous avons réalisée (chapitre 2). L'identité de ces cibles suggérait donc que les IglV pourraient interférer à plusieurs niveaux avec le processus de la présentation d'antigènes par les lymphocytes B. Nous avons pu confirmer cette hypothèse avec un modèle in vitro de présentation antigénique et ainsi mettre en évidence un nouveau mécanisme d'action des IgPV (chapitre 3). Une implication du FcyRIIb dans l'effet protecteur des IglV a pu être mise en évidence dans plusieurs modèles murins d'auto- immunité110. Par contre, l'inhibition de la présentation antigénique des lymphocytes B que

nous avons observée ne semble pas dépendre de l'expression de ce récepteur.

L'internalisation des IgPV pourrait être très importante dans l'inhibition de la présentation antigénique des lymphocytes B puisque certaines des protéines impliquées dans le processus de présentation antigénique qui sont ciblées par les IgPV sont strictement intracellulaires (myosine et LYST). De plus, il est possible qu'une fois internalisées, les IgPV soient traitées par les lymphocytes B comme un antigène d'origine externe. Les IglV seraient ainsi dégradées en peptides, chargés sur le CMH de classe II et présentés à la surface de la cellule. Ainsi, un des mécanismes par lesquels les IglV agissent sur la présentation antigénique pourrait être une compétition entre les peptides dérivés de l'ovalbumine, que nous avons utilisée comme antigène modèle, et ceux dérivés des IglV pour le transport et le chargement sur le CMH de classe II afin d'être présentés en surface. Le processus de présentation de séquences antigéniques dérivées d'IgG a déjà été mis en

évidence pour un anticorps monoclonal reconnaissant une structure spécifique aux CPA193.

De plus, la partie Fc des IgG est connue pour contenir des epitopes pouvant activer les lymphocytes T régulateurs194. Ces epitopes pourraient être présentés efficacement à la

surface des CPA à la suite de l'internalisation des IgPV et à leur dégradation dans les lysosomes, ce qui pourrait expliquer en partie l'augmentation du nombre de lymphocytes T régulateurs induite par le traitement aux IgPV à la fois chez la souris95 et l'humain49.

Le nouveau mécanisme d'action des IglV décrit dans ces travaux, soit l'inhibition de la présentation antigénique par les lymphocytes B, pourrait expliquer en partie la baisse du niveau d'autoanticorps observée chez des patients après l'utilisation des IgPV comme traitement195. Ces travaux viennent donc ajouter à nos connaissances des mécanismes

d'action des IgPV. De plus, il serait donc envisageable de cibler la voie de la présentation d'antigène par les lymphocytes B dans l'élaboration de substituts aux IgPV.

6.1.2 LeCD91

Comme nous avons démontré que l'internalisation des IglV est indépendante des FcyR et que le CD91 (LRP1) est un récepteur ayant la capacité de médier l'endocytose de ses ligands, nous avons émis l'hypothèse que ce récepteur pourrait être impliqué dans l'internalisation des IgPV. Cependant, le seul système connu pour étudier le transport par le CD91 est une lignée de cellules fibroblastiques dérivée d'embryons de souris (MEF-1) à partir de laquelle a été produite une lignée dont le gène codant pour le CD91 a été inactivé (PEA-13). Les résultats obtenus montrent que l'expression du CD91 permet à ce type de cellules de procéder à l'internalisation des IglV plus efficacement (chapitre 4). Afin de pouvoir appliquer ces résultats aux lymphocytes B humains, il serait nécessaire d'induire une perte de l'expression du CD91, soit par l'utilisation du siRNA ou de miRNA, et de vérifier si les IglV sont toujours internalisées aussi efficacement.

De plus, nous avons montré que la liaison des IglV au CD91 chez les cellules de la lignée MEF-1 induit la phosphorylation de la tyrosine 4507, située sur la chaîne P (intracellulaire) du CD91, ce qui suggère que les IglV sont capables d'induire de la signalisation par leur liaison au CD91. Par contre, les conséquences de l'induction de

signalisation par le CD91 dans les cellules du système immunitaire restent encore à déterminer. Il est fort possible que ces conséquences varient selon le type de cellules et les protéines adaptatrices qu'elles expriment. Il a d'ailleurs été démontré que la phosphorylation du CD91 induite par le facteur de croissance PDGF (platelet-derived growth factor) limite l'activation d'ERKl et 2 chez des cellules musculaires181 alors qu'elle

augmente cette activation chez des myofibroblastes en réponse à un traitement avec du

189

CTGF (connective tissue growth factor) . Comme le CD91 est connu pour être exprimé chez plusieurs types de cellules du système immunitaire (lymphocytes T et B196,

macrophages et cellules dendritiques197), il serait très intéressant d'étudier si les IglV

induisent aussi la signalisation par ce récepteur chez ces types de cellules et quelles en sont les conséquences.

Le CD91 a aussi été identifié comme un récepteur permettant la présentation d'antigènes liés à des protéines du choc thermique par le CMH de classe I par les lymphocytes B133 et par le CMH de classe II par les monocytes198. De plus, une implication

des protéines du choc thermique est connue dans l'induction et la propagation de plusieurs maladies auto-immunes dont l'arthrite rhumatoïde199. Il serait donc possible que le blocage

du CD91 par les IgPV empêche ces processus de présentation d'avoir lieu. Un tel blocage du CD91 pourrait être bénéfique dans des maladies auto-immunes où l'activation des lymphocytes T CD4+ et CD8+ autoréactifs sont responsables des dommages causés à

l'organisme.

Le CD91 est connu pour permettre le transport de diverses protéines à travers la barrière hémato-encéphalique par transcytose173'174'200. Il est intéressant de noter que les

IglV sont de plus en plus utilisées pour traiter des maladies neuro-inflammatoires. Ainsi, le CD91 pourrait permettre le transport des IglV à travers la barrière hémato-encéphalique, ce qui permettrait aux IglV d'avoir une activité anti-inflammatoire dans le cerveau.

L'implication du CD91 dans de nombreux processus biologiques (intemalisation, transcytose, signalisation et présentation antigénique) en fait donc une cible de choix pour l'étude des mécanismes d'actions des IgPV et l'élaboration de substituts.