La toute première étude ayant cherché à développer un agoniste non-peptidi ueà deà l áp li e‘à humain, a consisté à cribler une chimiothèque de 800 o pos sàpo teu sàd u àg oupe e tàfluo es e tà lissa i e à pa à u eà te h ologieà o igi aleà deà t a sfe tà d e gieà deà fluo es e eà F‘ET à e t eà leà g oupe e tàfluo es e tàetàl eGFPàfusio eà àl e t it àN-te i aleàdeàl áp li e‘àhu ai àe p i à de façon stable en cellules HEK- .àCeà i lageàaàpe isàd isole àplusieu sà o pos sàa a tàu eàaffi it à pou àl áp li eR allant de 90 nM à 1000 nM dont le composé E339-3D6 présentant une affinité pour l áp li e‘àdeà à M,à iaà etteàte h i ueàdeàF‘ET,àetà à M,à iaàlaàtechnique de radioliaison (Iturrioz et al., 2010a). Ce composé correspond à un pseudopeptide composé de 4 synthons comprenant : une pipéridine, un imidazolium benzylé, un amino-thiazol et une Lys sur laquelle est greffée une chaîne
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dodécacarbonée reliée àu eàlissa i e.àL tudeàdeàses caractéristiques pharmacologiques in vitro et de ses effets ex vivo et in vivo ont montré que ce composé présentait la même capacité que pE13F et K Fà ài dui eàl i te alisatio àdeàl áp li e‘à aisài hi aitàpa tielle e tàlaàp odu tio àd áMP ài duiteà pa àlaàF“K.àái si,àl E -3D6 se comporte comme un agoniste entier vis-à- isàdeàl i te alisatio àdeà l áp li e‘àetà o eàu àago isteàpa tielà is-à- isàduà ouplageà àlaàp ot i eàGαi.àLes études ex vivo, effectuées sur des anneaux aortiques de rat précontractés par la noradrénaline, ont montré que l E -3D6 induisait de façon dose-dépendante et endothélium-dépendant, la vasorelaxation des anneaux aortiques et ce, de façon aussi efficace ueàl a t l holi eàetàsi ilai eà àK F.àLesà tudesàin
vivo o tà o t à ueàl i je tio àpa à oieài. . àd E -3D6 chez la souris vigile et déshydratée induisait une diminution dose-d pe da teàdeàlaàli atio àd áVPàda sàleàsa g,àsugg a tà ueàl E -3D6 exerce lesà eàeffetsà ueàl ap li eàauà i eauàdesà eu o esà ag o ellulai esà asop essi e gi uesà(Iturrioz et al., 2010a).
Par la suite, des études de relation structure-a ti it à e esàsu àl E -3D6 ont permis de développer diff e tsà o pos sàa a tàu eàaffi it àsu i o olai eàpou àl áp li e‘.àEllesào tà gale e tàpe isà de montrer que le taille du linker permettait la sélectivité du composé vis-à-vis du récepteur AT1, que le groupement 3-benzyl-1-methyl-3H- ⁴-i idazoleà taitài po ta tàpou ài dui eàl i te alisatio àdeà l áp li e‘à ai sià ueà laà liaiso à iaà leà g oupe e tà th la i e.à Lesà deu à aut esà g oupe e ts méthylamines et le groupement imine ont été également montrés comme étant importants pour l affi it à età leà pou oi à i te alisa tà duà o pos .à N a oi s,à l esse tielà deà l a ti it à deà liaiso à età d i du tio àdeàl i te alisatio à taient portées par le groupement lissamine (Margathe et al., 2014). Ce composé est cependant trop volumineux et fluorescent, ce qui rend impossible son utilisation potentielle comme agent thérapeutique.
Une autre étude a cherché par un criblage haut débit à découvrir des petites molécules, agonistes du epteu àdeàl ap li eàg eà àu àtestàde e ute e tàdeàlaàβ-a esti eà àl áp li e‘.àLeà i lageàdeà à o pos s,à aà pe isà d isole à leà ML à p se ta tà u eà EC50 de 3,7 µM pour induire le e ute e tàdeàβ-a esti eàpa àl áp li e‘àa e àu eàs le ti it àpou àl áp li e‘à is-à-vis du récepteur AT1 d u àfa teu à .àDuàfaitàdeà etteà o eàs le ti it ,à eà o pos àaàse iàdeàpha a opho eàpou à des études structure-a ti it à isa tà àaug e te àl effi a it àduà o pos à ài dui eàleà e ute e tàdeà laàβ-a esti eà aisàau u eàa lio atio à aàpuà t eào te ueà(Khan et al., 2010). Au cours de cette même étude, une molécule auà a a t eàa tago isteàdeàl áp li e‘àaà t àd ou e te,àleàML ,àetàqui possède une affinité de 2 µM et une sélectivité vis-à- isàduà epteu àáT àd u àfa teu à à(Maloney et al., 2010, 2012). Le ML221 a été utilisé in vivo et présente une activité inhibitrice sur le pouvoir angiogénique de lap li eà(Hall et al., 2017).àIlàpou aità t eài t essa tàd o se e àlesàeffetsàin vivo d u àaut eàa tago isteàdeàl áp li e‘,àp se ta tàu e affinité pour le récepteur du même ordre que le
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ML221, le cyclo(1-6)CRPRLC-KH-cyclo(9-14)CRPRLC qui consiste en motifs RPRL, motif clé de la liaison deàpE Fà àl áp li e‘,à lis sà(Macaluso et al., 2011).
Pa àlaàsuite,àu eàaut eà tudeàaà he h à àd ou i àu eàpetiteà ol uleàago isteàdeàl áp li e‘àpa àu eà méthode de criblage utilisant, premièrement, un test de mobilisation de calcium intracellulaire, puis un test de radioliaison. Pour ce faire, une chimiothèque de petites molécules a été utilisée en ne p e a tà ueàlesà ol ulesàp se ta tàdesà a a t isti uesàph si o hi i uesàp o hesàdeàl ap li eàpuisà 100 composés ont été testés. Une molécule, le composé 1, a présenté une affinité de 5,2 µM pour l áp li e‘àet une capacité à mobiliser le calcium intracellulaire de 21,5 µM. Cette molécule a ensuite servi de pharmacophore pour des études structure-a ti it à isa tà àaug e te àl effi a it àduà o pos .à Ainsi, il a été obtenu une molécule, le composé 22, présentant u eàaffi it àdeà , àµMàpou àl áp li e‘à et une EC50 de 0,8 µM pour induire la mobilisation de calcium (Narayanan et al., 2016). Du fait de sa fai leà apa it à àseàlie àetà àa ti e àl áp li e‘àpa à appo tàau àf ag e ts e dog eàd ap li e,àau u eà étude ex vivo et in vivo o tà t à e es.
Enfin, une aut eà tudeàaàd elopp àu eàpetiteà ol uleàago isteàdeàl áp li e‘à iais eà is-à-vis de la protéine G, le CMF-019 (acide (S)-3-[1-(1-Ethyle-propyle)-2-thiophène-2-ylmethyle-1H-benzoimidazole-5-carbonyle]-amino-5-methyle-hexanoique) (Read et al., 2016). Cette molécule présente une affinité nanomolaire pou à l áp li e‘à età u eà capacité nanomolaire d a ti atio à deà laà protéine Gαi semblable à celle de pE13F. Par contre, elle est 100 fois moins efficace à induire le e ute e tàdeàlaàβ-a esti eàetàl i te alisatio àduà epteu .àCe iàseàt aduitàin vivo, lors deàl i je tio à de cette molécule par voie i.v chez le rat Sprague-Dawley anesthésié, par un effet inotrope positif avec u eà aug e tatio à deà l je tio à età duà d ità a dia ueà età u eà a se eà deà a iatio à deà laà p essio à a t ielleà jus u à à ol.à Ce ià te dà o fi e à ueà l effetà h pote seu à deà l ap li eà suità u à a is eàβ-arrestine-dépendant. De plus, sa demi-vie dans le plasma de rat est de 38 minutes et sa petiteàtailleàpou aitàluiàpe ett eàd t eàad i ist e par voie orale (Read et al., 2016). Néanmoins, d aut esà tudesàdoi e tà t eàe t ep isesàpou à o fi e àleàpote tielàth apeuti ueàdeà etteà ol uleà dans des modèles animaux di suffisa eà a dia ueà età pou à alue à so à odeà d ad i ist atio (Tableau IV).
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